具备表面展示苯丙氨酸解氨酶的工程益生菌制造技术

本发明专利技术公开了一种具备表面展示苯丙氨酸解氨酶的工程益生菌，其为大肠杆菌Nissle 1917衍生菌，在基因组上敲除了基因argR和/或发生了基因argA(Y19C)突变，整合了L

【技术实现步骤摘要】
具备表面展示苯丙氨酸解氨酶的工程益生菌


[0001]本专利技术属于基因工程领域，具体地说，涉及一种具备表面展示苯丙氨酸解氨酶的工程益生菌、其构建方法及其在制备苯丙酮尿症治疗药物中的应用。

技术介绍

[0002]苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种先天性的苯丙氨酸代谢障碍疾病，是一种常染色体隐性遗传病。在中国，PKU在新生儿中的发病率大概在1/11000，已被列为新生儿必查的疾病项目。
[0003]苯丙酮尿症是因肝脏苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase，PAH)缺乏或四氢生物喋呤合成酶、二氢生物喋呤还原酶突变导致。正常情况下，苯丙氨酸经PAH催化生成酪氨酸，然后通过酪氨酸代谢途径合成甲状腺、肾上腺和黑色素等。PAH突变，导致苯丙氨酸在肝脏中出现代谢紊乱，无法转化为酪氨酸，而是苯丙氨酸与α
‑
酮戊二酸在血液与组织中堆积并被排泄到尿液中，另外，其代谢产物在中枢神经中蓄积会产生毒性，从而诱发患儿出现兴奋不安、多动和精神异常等。
[0004]目前对PKU的治疗方法主要是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种工程益生菌，其为大肠杆菌Nissle 1917衍生菌，其特征在于，具备表面展示的L
‑
苯丙氨酸解氨酶。2.如权利要求1所述的工程益生菌，其特征在于，以大肠杆菌Nissle 1917为底盘菌，通过质粒表达或者基因组整合而得到；或者以胞内已具备苯丙氨酸解氨酶的大肠杆菌Nissle 1917工程菌为基础，再进行表面展示苯丙氨酸解氨酶的基因工程改造而得到。3.如权利要求2所述的工程益生菌，其特征在于，所述胞内已具备苯丙氨酸解氨酶的大肠杆菌Nissle 1917工程菌通过下述步骤构建得到：在大肠杆菌Nissle 1917基因组上整合了外源L
‑
苯丙氨酸解氨酶基因stlA、外源L
‑
苯丙氨酸内运蛋白基因pheP和外源L
‑
氨基酸脱氨酶基因pma。4.如权利要求3所述的工程益生菌，其特征在于，还整合了内源的外排泵基因acrA；并且/或者敲除了基因argR和/或发生了基因argA(Y19C)突变；并且/或者对stlA、pheP、acrA基因的RBS序列进行优化。5.如权利要求4所述的工程益生菌，其特征在于，所述L
‑
苯丙氨酸解氨酶基因stlA的核苷酸序列是SEQ ID NO:1；所述L
‑
苯丙氨酸内运蛋白基因pheP的核苷酸序列是SEQ ID NO:2；所述L
‑
氨基酸脱氨酶基因是pma的核苷酸序列是SEQ ID NO:3；所述外排泵基因acrA的核苷酸序列是SEQ ID NO:4。6.如权利要求4所述的工程益生菌，其特征在于，stlA基因的RBS序列变化为SEQ ID NO:5；pheP基因的RBS序列变化为SEQ ID NO:6；acrA基因的RBS序列变化为SEQ ID NO:7。7.如权利要求1所述的工程益生菌，其特征在于，菌株的基因型是：EcN(malP::Pj23119H
‑
stlA,yicS::Pj23119H
‑
stlA,malE::Pj23119H
‑
stlA,rthC::Ptac
‑
stlA,exo::Ptac
‑
stlA,lacZ::Pj23119H
‑
pheP,agaI::Pj23119H
‑
pheP,araBD::Para
‑
pma,dapA::inaK
‑
stlA,argA*,
△
argR,lacZ::Pj23119H
‑
acrA)。8.一种构建如权利要求1
‑
7中...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋宇，
申请(专利权)人：上海陶宇晟生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：