嵌合抗原受体肿瘤浸润淋巴细胞制造技术

公开了用于靶向治疗感染和表达癌症的组合物和方法。特别地，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)被遗传工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)多肽，从而产生CAR‑TIL，其可以与过继性细胞转移一起使用，以靶向、穿透和杀伤实体肿瘤块。因此，还公开了在患有感染或癌症的受试者中提供免疫疗法的方法，其涉及所公开的CAR‑TIL的过继性转移。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合抗原受体肿瘤浸润淋巴细胞相关申请的交叉引用本申请要求2018年6月12日提交的美国临时申请号62/683,792和2019年6月4日提交的申请序列号62/857,054的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
手术、放射疗法和化学疗法已经是治疗癌症包括白血病、实体瘤和转移(metastasis)的标准公认方法。多年来，已经研究了直接或间接使用身体免疫系统来缩小或根除癌症的免疫疗法(有时称为生物疗法(biologicaltherapy/biotherapy)或生物反应调节剂疗法)作为常规癌症疗法的辅助。人们相信，人类免疫系统是癌症治疗的未开发资源，并且一旦免疫系统的组分被适当利用，就可开发有效的治疗。嵌合抗原受体(CAR)是工程化的受体，其与免疫细胞组合新的特异性以靶向癌细胞。CAR-T细胞设计的基本原理涉及组合抗原结合和T细胞激活功能的重组受体。迄今为止，所有CAR-T细胞都涉及激活的外周血淋巴细胞(PBL)作为CAR的载体以消除造血(液体)癌。然而，激活的PBL在生物学上不能穿透实体肿瘤块。
技术实现思路
与PBL不同，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)具有穿透肿瘤块的能力。因此，公开了表达CAR多肽的TIL(本文中称为“CAR-TIL”)，其可以与过继性细胞转移(adoptivecelltransfer,ACT)一起使用以靶向和杀伤受试者中的癌症，包括实体瘤。首先使用标准方法从手术切除的肿瘤离体扩增TIL。这可以包括选择具有最佳肿瘤反应性的TIL，然后用快速扩增方案(REP)进一步扩增这些TIL。然后可以遗传工程化TIL以表达一个或多个CAR用于表面表达。这种遗传操作可以发生在快速扩增方案(REP)阶段或REP前阶段。通过用CAR工程化TIL，TIL被再靶向至不同的肿瘤抗原。在一些实施方案中，可以通过标准方法(例如CRISPR-Cas9；shRNA等)使CAR-TIL表达的内源性TcRs或其它分子沉默，以改善CAR识别的肿瘤抗原的靶向。CAR多肽在胞外结构域中含有可结合癌细胞上的肿瘤抗原的靶向剂。与其它CAR一样，所公开的多肽也可含有跨膜结构域和能够激活免疫效应细胞的胞内结构域。例如，所述胞内结构域可以含有信号传导结构域和/或一个或多个共刺激信号传导区。还公开了含有至少两种结合不同配体结合靶标的CAR的双CAR-TIL。在这些实施方案中，一个CAR可以仅包括CD3ζ结构域，并且另一个CAR可以仅包括一个或多个共刺激结构域。在这些实施方式中，双CAR-TIL激活需要两种靶向到靶细胞上共表达。还公开了在患有癌症的受试者中提供抗肿瘤免疫的方法，其涉及向受试者施用有效量的所公开的CAR-TIL。在附图和下面的描述中阐述了本专利技术的一个或多个实施例的细节。本专利技术的其它特征、目的和优点将从说明书和附图以及权利要求书中显而易见。附图说明图1A显示了针对MC-38的TIL的Cr51释放测定。图1B显示接受TIL的小鼠中MC-38肿瘤体积。图1C显示了通过CD45.2染色追踪的TIL优先再运输回MC-38肿瘤。图2显示了在肿瘤中过继性转移7天后TIL的富集。图3显示了7天后检测受体小鼠的脾、淋巴结和骨髓中的TIL。图4显示了7天后肿瘤中幼稚T细胞和效应记忆细胞以及终末分化的效应细胞的比例。图5是显示TIL中CAR表达的直方图。开放直方图显示CAR表达。浅灰色直方图显示染色的、未转导的T细胞。深灰色直方图显示未染色的细胞。具体实施方式本文公开了人肿瘤相关淋巴细胞(TIL)，其被工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)(本文中称为“CAR-TIL”)，所述嵌合抗原受体可特异性识别诱导自身(induced-self)或外源蛋白质，这些蛋白质在正常细胞表面上完全不存在或仅以低水平存在，但被感染、转化、衰老和应激的细胞过表达(overexpressed)。因此，还公开了使用所公开的CAR-TIL在受试者中提供免疫疗法的方法。CAR通常由三个结构域组成：胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域。胞外结构域包含靶向剂并且负责结合肿瘤抗原。它还任选地含有信号肽(SP)，使得CAR可以被糖基化并锚定在免疫效应细胞的细胞膜中。跨膜结构域(TD)如其名字所暗示的那样，将胞外结构域连接到胞内结构域，并且当由细胞表达时位于细胞膜内。胞内结构域是CAR的工作端，其在抗原识别后将激活信号传输至免疫效应细胞。例如，所述胞内结构域可以含有信号传导结构域(ISD)和共刺激信号传导区(CSR)。由于所公开的CAR旨在与第二CAR组合，CAR可以具有需要第二CAR用于激活的不完全胞内结构域。“信号传导结构域(SD)”通常含有免疫受体基于酪氨酸的激活基序(ITAM)，当ITAM被磷酸化时，ITAM激活信号传导级联。术语“共刺激信号传导区(CSR)”是指来自共刺激蛋白受体，例如CD28、41BB和ICOS的胞内信号传导结构域，其能够增强T细胞受体对T细胞的激活。其它CAR构建体描述于例如FresnakAD等人EngineeredTcells:thepromiseandchallengesofcancerimmunotherapy.NatRevCancer.2016Aug23；16(9):566-81中，其全部内容通过引用并入本文，以教导这些CAR模型。例如，CAR可以是TRUCK、通用CAR、自驱动CAR、装甲CAR、自毁CAR、条件性CAR、标记CAR、TenCAR、双CAR或sCAR。TRUCK(通用细胞因子杀伤重定向T细胞)共表达嵌合抗原受体(CAR)和抗肿瘤细胞因子。细胞因子表达可以是组成性的或由T细胞激活诱导。以CAR特异性为靶标，促炎性细胞因子的局部产生将内源性免疫细胞招募到肿瘤位点，并且可以增强抗肿瘤应答。通用的同种异体CART细胞被工程化以不再表达内源性T细胞受体(TCR)和/或主要组织相容性复合体(MHC)分子，从而分别防止移植物抗宿主病(GVHD)或排斥。自驱动CAR共表达CAR和趋化因子受体，所述趋化因子受体结合肿瘤配体，从而增强肿瘤归巢。经过工程化以抵抗免疫抑制的CART细胞(装甲CAR)可以进行基因修饰，以不再表达各种免疫检查点分子(例如细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)或程序性细胞死亡蛋白1(PD1))，具有免疫检查点转换受体，或者可以与阻断免疫检查点信号传导的单克隆抗体一起施用。可以使用通过电穿孔递送的RNA实现瞬时CAR表达。或者，可基于更昔洛韦与基因修饰的淋巴细胞中的胸苷激酶结合或最近描述的通过小分子二聚体激活人胱天蛋白酶9的系统，来实现TIL细胞的诱导性凋亡。条件性CART细胞默认为无反应的，或“关闭”，直到加入小分子以完成回路，使得信号1和信号2两者能够完全转导，从而激活CART细胞。或者，T细胞可以被工程化以表达对随后施用的针对靶抗原的二级抗体具有亲和力的衔接子特异性受体。标记CART细胞表达CAR加上现有单克隆抗体试剂结合的肿瘤表位。在无法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组淋巴细胞，其通过包含以下步骤的方法产生：/n(a)从哺乳类受试者获得并扩增肿瘤浸润淋巴细胞；以及/n(b)遗传工程化自体肿瘤浸润淋巴细胞以表达嵌合抗原受体CAR，其中所述CAR包含胞外结构域、跨膜结构域、胞内信号传导结构域和共刺激信号传导区，和/n其中所述胞外结构域包含肿瘤抗原结合剂。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180612 US 62/683,792;20190604 US 62/857,0541.一种重组淋巴细胞，其通过包含以下步骤的方法产生：
(a)从哺乳类受试者获得并扩增肿瘤浸润淋巴细胞；以及
(b)遗传工程化自体肿瘤浸润淋巴细胞以表达嵌合抗原受体CAR，其中所述CAR包含胞外结构域、跨膜结构域、胞内信号传导结构域和共刺激信号传导区，和
其中所述胞外结构域包含肿瘤抗原结合剂。


2.如权利要求1所述的重组淋巴细胞，其中所述肿瘤浸润淋巴细胞的内源性T细胞受体TcRs已经缺失或沉默。


3.如权利要求1或2所述的重组淋巴细胞，其中所述共刺激信号传导区包含选自由CD27、CD28、4-1BB、O...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯·穆勒，丹尼尔·阿贝特达加，
申请(专利权)人：H·李·莫菲特癌症中心和研究所公司，
类型：发明
国别省市：美国;US