一种利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的方法。本发明专利技术方法包括以下步骤：a.将碳毡插入沉积物中构建得到碳毡‑沉积物培养体系，然后将碳毡‑沉积物培养体系置于水体中，连续曝气培养；b.取沉积物表面以下的碳毡，漂洗、修剪、固定、再漂洗，然后进行荧光原位杂交和扫描电镜成像观察。本发明专利技术采用碳毡实现了对长线状微生物的捕获以及后续的荧光原位杂交和扫描电镜成像观察，这大大地扩展了沉积物中长线状微生物形态结构观察的技术手段。

【技术实现步骤摘要】
一种利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的方法。
技术介绍
沉积物中存在数目众多的长线状微生物，这些长线状微生物会通过相互交联形成密布于沉积物空间的骨架网络，并对沉积物局部微环境中的微生物群落及其相关的物质循环、物质转运产生显著影响。不过目前对沉积物中的长线状微生物的研究仍较为缺乏，捕获长线状微生物有助于深入探究其特殊的结构及生态学作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的方法，以实现快速、简易、大量地捕获沉积物中长线状微生物，并对其进行荧光原位杂交和扫描电镜成像观察与研究。沉积物中长线状微生物由于其特殊的长线状形态以及可能存在的运动能力，使其很容易附着缠绕在其他的丝状物上。在电化学系统中常用到的碳毡为碳丝相互缠绕组成，且相对微生物来说，碳毡中的孔隙多而大，极有利于长线状微生物的附着缠绕。得益于长线状微生物远高于普通单细胞短杆状或球形等非长线微生物的体积，扫描电镜可以很容易将长线状微生物与周围环境细节(主要包括沉积物颗粒和非长线状微生物)区分开。本专利技术的利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的方法，包括以下步骤：a.将碳毡插入沉积物中构建得到碳毡-沉积物培养体系，然后将碳毡-沉积物培养体系置于水体中，连续曝气培养；b.取沉积物表面以下的碳毡，漂洗、修剪、固定、再漂洗，然后进行荧光原位杂交和扫描电镜成像观察。r>优选，所述的曝气培养为曝气培养20天。优选，所述的步骤b中所取的碳毡为与沉积物接触的碳毡表面及其向碳毡内部5mm内的厚度。优选，所述的漂洗是用pH为7.4的0.05mol/L磷酸盐缓冲液漂洗。优选，所述的修剪是将碳毡修剪为小于1cm3。优选，所述的固定是浸没于3％多聚甲醛溶液中固定，时间为4h。本专利技术的有益效果为：本专利技术采用碳毡实现了对长线状微生物的捕获以及后续的荧光原位杂交和扫描电镜分析，这大大地扩展了沉积物中长线状微生物形态结构观察的技术方法和手段。附图说明图1为多丝碳毡捕获成像装置示意图。图2为多丝碳毡捕获长线状微生物的荧光原位杂交和扫描电镜成像示意图；(A)荧光原位杂交-共聚焦观察碳毡表面；(B)扫描电镜观察碳毡表面。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。以下所用试剂或仪器，如无特别说明，均为可以通过市场购买的常规产品。以下实施例中所用的碳毡生产厂家为甘肃郝氏炭纤维有限公司，型号规格为Δ＝0.8cm。实施例1本专利技术提供了一种利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的简易方法。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术。构建如图1所示的碳毡-沉积物培养体系：将新鲜沉积物注入容器中形成一定深度的沉积物层，将碳毡插入沉积物表面下至少2cm深度位置。将上述构建的碳毡-沉积物培养体系放入水族箱，水族箱内放入适量的自来水(水深至少要淹没整个沉积物容器)，连续曝气以维持饱和氧孵育培养。培养20天后，取出碳毡，用0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)漂洗，然后切取沉积物表面以下的碳毡，并剪成厚度5mm*1cm2左右大小。随后浸没于3％多聚甲醛溶液中固定，时间为4h，再用0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)轻柔漂洗三次，每次10min。随后分别进行荧光原位杂交和扫描电镜分析。从图2可以看到，对碳毡表面进行的荧光原位杂交-共聚焦显微镜成像结果表明，碳毡成功捕获到了在曝气过程中被富集的电缆细菌。但是，碳毡的捕获层仅限于与沉积物接触的碳毡表面及其向碳毡内部5mm内的厚度。这些电缆细菌在碳毡表面纵横交错形成明显的网状结构。此外，对碳毡表面进行的扫描电镜成像结果表明，除了具有典型电缆细菌结构(即，首尾相接的细胞、细胞外壁表面存在沿着首尾方向平行且不间断的嵴)的长线状微生物以外，还存在多种形态的其他长线状微生物，例如类似弹簧的超螺旋状长线状微生物、首尾相接的无嵴长线状微生物。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的方法，其特征在于，包括以下步骤：/na.将碳毡插入沉积物中构建得到碳毡-沉积物培养体系，然后将碳毡-沉积物培养体系置于水体中，连续曝气培养；/nb.取沉积物表面以下的碳毡，漂洗、修剪、固定、再漂洗，然后进行荧光原位杂交和扫描电镜成像观察。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用碳毡捕获沉积物中长线状微生物及成像的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.将碳毡插入沉积物中构建得到碳毡-沉积物培养体系，然后将碳毡-沉积物培养体系置于水体中，连续曝气培养；
b.取沉积物表面以下的碳毡，漂洗、修剪、固定、再漂洗，然后进行荧光原位杂交和扫描电镜成像观察。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的曝气培养为曝气培养20天。


3.根据权利要求1所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：许玫英，黄友达，王斌，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：广东;44