毕赤酵母定点DSB系统及应用技术方案

本发明专利技术涉及一种毕赤酵母定点DSB系统，构建步骤如下：构建site‑I‑SceI‑KanMX转化盒，利用诱导型启动子，电转化野生毕赤酵母GS115菌株，即得毕赤酵母定点DSB系统。本发明专利技术以毕赤酵母为载体，利用归位内切酶I‑SceI建立的定点DSB诱导系统，可以提高转化效率，同时细胞对其修复应答产生了Aneuploidy，与人肿瘤细胞中的Aneuploidy相似，可以作为一个研究定点DSB导致的Aneuploidy模型。

【技术实现步骤摘要】
毕赤酵母定点DSB系统及应用
本专利技术属于基因工程
，尤其是一种毕赤酵母定点DSB系统及应用，通过诱导毕赤酵母定点DSB，研究酵母细胞的修复应答。
技术介绍
毕赤酵母作为应用最广泛的外源蛋白真核表达系统之一，如何提高重组效率显得尤为重要。基于毕赤酵母较低的同源重组效率，有学者通过敲除非同源末端(NHEJ)相关基因Ku70/80阻断NHEJ通路，增加同源重组(HR)通路，提高同源重组效率，或者利用CRISPR/Cas9系统在毕赤酵母中进行精确的基因编辑工程。但是，阻断NHEJ通路会影响毕赤酵母自身的代谢反应，而CRISPR/Cas9系统不适合于外源基因的整合。目前对毕赤酵母的DNA损伤机制知之甚少，毕赤酵母细胞中NHEJ是DNA损伤的主要修复通路，其同源重组能力较弱，这与哺乳动物细胞相似。同时，毕赤酵母被用于高密度发酵，对活性氧(ROS)等有很强耐受性，该特性与肿瘤细胞相似。诱导毕赤酵母细胞定点发生DSB，研究其修复应答机制，可作为继酿酒酵母之后研究细胞DNA损伤修复机制的又一模式菌株。通过检索，尚未发现与本专利技术专利申本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种毕赤酵母定点DSB系统，其特征在于：构建步骤如下：/n构建site-I-SceI-KanMX转化盒，利用诱导型启动子，电转化野生毕赤酵母GS115菌株，即得毕赤酵母定点DSB系统。/n

【技术特征摘要】
1.一种毕赤酵母定点DSB系统，其特征在于：构建步骤如下：
构建site-I-SceI-KanMX转化盒，利用诱导型启动子，电转化野生毕赤酵母GS115菌株，即得毕赤酵母定点DSB系统。


2.根据权利要求1所述的毕赤酵母定点DSB系统，其特征在于：构建site-I-SceI-KanMX转化盒时，I-SceI酶识别位点Site序列为：SEQIDNO.1。


3.根据权利要求1所述的毕赤酵母定点DSB系统，其特征在于：所述诱导型启动子为醇氧化酶AOX基...

【专利技术属性】
技术研发人员：周飒，马文建，李心雨，陈洪冉，晋利君，向婉晨，
申请(专利权)人：天津科技大学，齐鲁理工学院，
类型：发明
国别省市：天津;12