1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯的制备方法及其制备抗阿尔兹海默症药物的应用技术

本发明专利技术公开了1，6‑O，O‑二乙酰基大花旋覆花内酯的制备方法及其制备抗阿尔兹海默症药物的应用。本发明专利技术通过研究发现OABL对AD模型小鼠进行腹腔注射后，AD模型小鼠的海马区及大脑皮层Aβ淀粉样蛋白沉淀显著减少；相应地，OABL对AD模型小鼠的水迷宫实验中表现出的学习记忆能力改善较明显。所公开的制备方法包括欧亚旋覆花干燥花序的乙醇浸提物经乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯浸提物；之后对乙酸乙酯浸提物进行分离得到1，6‑O，O‑二乙酰基大花旋覆花内酯,重结晶后可获得高纯度的1，6‑O，O‑二乙酰基大花旋覆花内酯。

【技术实现步骤摘要】
1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯的制备方法及其制备抗阿尔兹海默症药物的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯的制备方法及其制备抗阿尔兹海默症药物的应用。
技术介绍
欧亚旋覆花是一种二年生或多年生植物，向光性，金黄色花瓣，直立生长，高约15～75cm，喜沙质壤土和粘土，常用于治疗肿瘤、消化系统疾病、支气管炎、抗菌和病毒感染(包括肝炎病毒)，其中花序可用于治疗肠道疾病及支气管炎等呼吸道炎症。1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯(OABL)被报道从欧亚旋覆花花序经过乙醇提取后从氯仿相分离后得到，分离过程需要正相硅胶、反相色谱、凝胶分离技术等，过程费力耗时。已有技术表明，OABL的抗肿瘤活性和抗炎活性较为突出。OABL抑制了乳腺癌细胞BRK-p53的Bcl-2的磷酸化，并阻滞细胞周期G2/M。此外，OABL通过激活Caspases-3、8和9，线粒体中细胞色素C的释放，诱导细胞凋亡，抑制了白血病细胞HL-60增殖。OABL显示的抗炎活性，通过抑制一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶2(COX-2)的合成抑制巨噬细胞RAW264.7中一氧化氮(NO)及前列腺素2(PGE2)的合成。此外，OABL能够有效活化内皮细胞，可以通过减少血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、血浆骨桥蛋白(OPN)、MMP-9和韧粘素-c(tenascin-c)(细胞外基质中的一种大分子糖蛋白)等物质的表达而有效抑制巨噬细胞对内皮细胞的粘附。然而，OABL对阿尔兹海默病的作用尚未有报道。
技术实现思路
本专利技术基于新的研究发现，首先提供了1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯制备抗阿尔兹海默症药物的应用。基于上述应用的药物包括1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯和药物辅料。所述药物辅料可为在药学领域常用的辅料中合理选择后不影响药效或有助于药效发挥的药物辅料。药物剂型可选注射型。本专利技术同时提供了一种1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯的制备方法。为此，所提供的方法包括：欧亚旋覆花干燥花序的乙醇浸提物经乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯浸提物；之后对乙酸乙酯浸提物进行分离得到1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯。优选的，所述分离包括采用正相硅胶柱、石油醚和乙酸乙酯的混合液为洗脱剂进行分离。阿兹海默病的临床特征主要表现为空间学习记忆等认知障碍和行为障碍。攻克该疾病一直是亟待解决的医学难题。包括辉瑞、强生、葛兰素史克等巨头在内的一众跨国药企，曾集体在阿尔茨海默病药物上折戟，烧钱百亿却无功而返。由此可见，寻找到一种治疗AD的新药或新方法仍任重道远。AD的病因和发病机制目前尚不明确，β淀粉样蛋白(Aβ)的异常沉积被公认为是导致AD的最后共同途径。一直以来针对Aβ病因说的抗AD新药物在不断地进行临床试验，但尚未有成功的临床报道。本专利技术通过研究发现OABL对AD模型小鼠进行腹腔注射后，AD模型小鼠的海马区及大脑皮层Aβ淀粉样蛋白沉淀显著减少；相应地，OABL对AD模型小鼠的水迷宫实验中表现出的学习记忆能力改善较明显。基于此，OABL能用于制备抗阿尔兹海默症药物。附图说明图1为本专利技术化合物的1HNMR(400MHz,CDCl3)图谱；图2为本专利技术化合物的13CNMR(100MHz,CDCl3)图谱；图3为本专利技术化合物分离的纯度分析结果；图4为OABL改善5XFAD小鼠认知功能实验结果；图5为OABL减轻AD模型小鼠β淀粉样蛋白(Aβ)沉积的实验结果；图6为OABL减轻AD模型小鼠炎症蛋白的表达的实验结果。具体实施方式除非另有说明，本文中的术语根据相关领域普通技术人员的认识理解。以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。以下实施例中所用实验材料及试剂均为市售产品。以下实施例中所用的OABL可以为市售产品也可以采用本专利技术提供的方法进行获取。本专利技术的OABL制备方法实施实例为：称取欧亚旋覆花干燥花序10kg，加入工业乙醇20L浸泡3小时，加沸石数粒，经乙醇回流萃取3次，每次20L、4小时，弃去残渣，回收乙醇相，浓缩浸膏；加入三倍体积的水(2L)后，用乙酸乙酯(3*2L)萃取后减压浓缩得到乙酸乙酯相浸膏乙酸乙酯相浸膏0.4Kg；将乙酸乙酯相浸膏直接上正相硅胶柱(100-200目，20cm*140cm)，依次用石油醚:乙酸乙酯9：5、7：5、1：1各1L来洗脱；其中在石油醚:乙酸乙酯7：5段，有晶体析出，经乙醇重结晶后得到纯品OABL；经鉴定为1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯(OABL)，结构式为式(Ⅰ)所示，鉴定结果如图1和2所示；同时对分离物进行纯度分析：通过带有蒸发光散射检测器(ELSD)的Waters1525series分析，10mingradient,80％MeOH:20％H2Oto100％MeOH；tR＝4.164min,99.27％atELSD；HPLC分析纯度>99％，结果如图3所示。实施例1：OABL改善5XFAD小鼠认知功能1.Morris水迷宫实验使用的AD模型小鼠为5XFAD转基因小鼠，购自美国杰克森实验室(JAX)，该转基因小鼠在淀粉样前体蛋白(APP)产生Swedish(K670N/M671L),Florida(I716V)和London(V717I)突变,在前期素蛋白1(PSEN1)产生M146L和L286V突变。所有小鼠于22±2℃，湿度50±10％下，自由采食和饮水，12h光/暗周期，进行饲养，饲养至6月龄，开始进行实验，所有的操作遵守国家卫生局指导指南和实验室动物使用指南；实验分为4组，空白对照组(WT组)、OABL对照组(WT-OABL组)、AD模型组(5XFAD组)、OABL干预组(5XFAD-OABL组)，其中WT组和WT-OABL组使用的小鼠为野生型健康小鼠，5XFAD组和5XFAD-OABL组使用的小鼠为5XFAD转基因小鼠；WT-OABL组和5XFAD-OABL组按照剂量为20mg/Kg/天腹腔注射式(I)天然化合物OABL，对照组给予溶剂，连续给药3周，给药周期结束后，进行Morris水迷宫测试，具体参照Morris水迷宫实验方法进行，用于测量小鼠的学习和记忆能力。Morris水迷宫(MWM)迷宫是一个注有水(24±1)℃的圆形水池(直径150cm,高50cm)，迷宫分为4个象限,在其中一个象限水下1cm处放置直径10cm的站台。小鼠连续训练4天，每天训练4个象限；训练时,将小鼠面朝壁放入水中,若小鼠在60s内找到站台,则让其在站台待10s。若不能找到站台,则将其引至站台,并让其站台待10s。第5天,进行定位导航测试:将小鼠面朝壁从站台邻近象限放入水中60s,记录小鼠从入水至上站台的潜伏期。2.实验结果如图4A所示，Morris水迷宫测试中，AD模型组与空白对照组相比，小鼠从入水至上站台的逃避潜伏时间极显著上升，5XFA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯制备抗阿尔兹海默症药物的应用。/n

【技术特征摘要】
1.1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯制备抗阿尔兹海默症药物的应用。


2.一种抗阿尔兹海默症药物，其特征在于，包括1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内酯和药物辅料。


3.如权利要求4所述的抗阿尔兹海默症药物，其特征在于，所述药物为注射剂型。


4.一种1，6-O，O-二乙酰基大花旋覆花内...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤江江，黄兰芳，郭聪，高锦明，项萍，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61