检测目标抗体的多肽的筛选方法及其筛选的多肽的应用技术

本发明专利技术提供了一种检测目标抗体的多肽的筛选方法及其筛选的多肽的应用。该筛选方法包括：采用多肽芯片技术对目标抗体进行检测，得到与目标抗体具有特异性结合潜能的第一肽段集；利用含有目标抗体的阳性样本和不含目标抗体的阴性样本，对第一肽段集中的多肽进行验证，从而筛选出能够检测目标抗体的多肽。该方法筛选多肽具有成本低、通量高且检测准确性高的优势。

【技术实现步骤摘要】
检测目标抗体的多肽的筛选方法及其筛选的多肽的应用
本专利技术涉及抗体检测领域，具体而言，涉及一种检测目标抗体的多肽的筛选方法及其筛选的多肽的应用。
技术介绍
在免疫应答中，细胞免疫和体液免疫是两个密切相关、互为调节的生理过程，在临床检验工作中，以体液免疫反应中的特异性抗体检测应用最为广泛。血清或血浆中特异性抗体检测可作为自身免疫病、感染类疾病、过敏性疾病、肿瘤等疾病的临床诊断的辅助参考。常用的检测方法众多，除传统的沉淀反应、凝集试验、补体结合试验以外，标记免疫测定，如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等已成为主要的免疫测定技术，免疫印迹法和快速斑点免疫结合试验也被广泛使用。然而这些传统方法通常一次实验只能检测一种抗体指标，而且检测灵敏度低，样本用量大。现有技术中，为了获得能对目标抗体进行检测的肽段，常规采用的方法大致如下：通过计算机软件预测目标抗体的结合位点，并根据该结合位点设计候选肽段并进行化学合成，然后对合成出的候选肽段进行标记，使标记后的候选肽段与目标抗体接触，然后检测标记的信号，进而根据信号的强弱判断候选肽段本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测目标抗体的多肽的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括：/n采用多肽芯片技术对目标抗体进行检测，得到与所述目标抗体具有特异性结合潜能的第一肽段集；/n利用含有所述目标抗体的阳性样本和不含所述目标抗体的阴性样本，对所述第一肽段集中的多肽进行验证，从而筛选出能够检测所述目标抗体的多肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测目标抗体的多肽的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括：
采用多肽芯片技术对目标抗体进行检测，得到与所述目标抗体具有特异性结合潜能的第一肽段集；
利用含有所述目标抗体的阳性样本和不含所述目标抗体的阴性样本，对所述第一肽段集中的多肽进行验证，从而筛选出能够检测所述目标抗体的多肽。


2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，采用多肽芯片技术对目标抗体进行检测，得到与所述目标抗体具有特异性结合潜能的第一肽段集包括：
将包含所述目标抗体的样本进行多个浓度稀释，得到多个不同浓度的待筛选样本；
利用多肽芯片技术对多个不同浓度的所述待筛选样本进行检测，从而得到不同浓度下与所述目标抗体具有不同结合信号强度的多肽集合，记为所述第一肽段集；
优选地，包含所述目标抗体的样本包括：包含所述目标抗体的血清样本和包含所述目标抗体的缓冲液样本；
优选地，在将包含所述目标抗体的样本进行多个浓度稀释之前，所述筛选方法还包括：确定所欲稀释的多个浓度的范围；更优选地，通过利用多个不同稀释浓度的包含所述目标抗体的缓冲液样本进行多肽芯片检测得到。


3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，采用多肽芯片技术对目标抗体进行检测，得到与所述目标抗体具有特异性结合潜能的第一肽段集包括：
将多肽芯片与包含所述目标抗体的样本进行共孵育，得到第一孵育产物；
将所述第一孵育产物与带荧光标记的二抗进行共孵育，得到与所述目标抗体具有不同结合信号强度的多肽集合；
按照所述结合信号强度的大小对所述多肽集合中的多肽进行排序，并选取所述结合信号强度较大的前第一预定数量的所述多肽作为所述第一肽段集；
优选地，包含所述目标抗体的样本包括：包含所述目标抗体的血清样本和包含所述目标抗体的缓冲液样本。


4.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，利用多肽芯片技术对多个不同浓度的所述待筛选样本进行检测，从而得到不同浓度下与所述目标抗体具有不同结合信号强度的多肽集合，记为所述第一肽段集包括：
将多肽芯片分别与不同浓度的所述待筛选样本进行共孵育，得到多个第一孵育产物；
将所述多个第一孵育产物分别与带荧光标记的二抗进行共孵育，然后通过图像采集技术进行检测，得到与所述目标抗体具有不同结合信号强度的多肽集合；
按照所述结合信号强度由强到弱对所述多肽集合中的多肽进行排序；
选取排名靠前的第二预定数量的所述多肽作为所述第一肽段集。


5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，按照所述结合信号强度由强到弱对所述多肽集合中的多肽进行排序包括：
计算每个浓度下，与所述目标抗体具有不同结合信号强度的多肽集合中的每种多肽序列对应特征的信号强度值，并按照所述信号强度值由大到小进行排序；
优选地，利用多肽芯片对各个浓度的所述待筛选样本重复检测多次，计算每个浓度下，与所述目标抗体具有不同结合信号强度的多肽集合中的每种多肽序列对应特征的信号强度的均值或中位值，并按照所述均值或中位值由大到小进行排序；
更优选地，对每个浓度下，与所述目标抗体具有不同结合信号强度的多肽集合中的每种所述多肽对应特征的信号强度值进行对数值转换，优选为log10转换，并按照转换之后的对数值的均值或中位值由大到小进行排序。


6.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，选取排名靠前的第二预定数量的所述多肽作为所述第一肽段集包括：
选择在设定比例的浓度范围中，优选在所有浓度范围中，在每一种浓度下重复多次多肽芯片检测获得结果的均值或中位值的排序均在前第三预定数量的多肽作为第一候选集；
从所述第一候选集中去除在空白对照和/或阴性样本的在每一种浓度下重复多次多肽芯片检测结果的均值或中位值的排序均在前第四预定数量的多肽，得到第二候选集；
获得所述第二候选集中每条多肽在每一种浓度下重复多次多肽芯片检测获得结果的均值或中位值；
根据所述均值或所述中位值，对所述第二候选集中的每条多肽进行排序，挑选排名在前第二预定数量的多肽，作为所述第一肽段集。


7.根据权利要求3或4所述的筛选方法，其特征在于，在将多肽芯片与包含所述目标抗体的样本进行共孵育之前，所述筛选方法还包括：
利用封闭液对多肽芯片进行封闭处理，得到封闭芯片；
将所述封闭芯片与包含所述目标抗体的样本进行共孵育，得到所述第一孵育产物；
优选地，所述封闭液包括如下组分：130～137mM氯化钠、2.5～2.7mM氯化钾、3.8～4.3mM磷酸氢二钠、1.2～1.4mM磷酸二氢钾、0.05％～1％Tween-20v/v、0.05％～0.1％Proclin950v/v、0.5％～1％D-甘露醇w/v和0.1％-1％酪蛋白酸钠w/v，所述封闭液的pH为7.2～7.6，更优选为7.38～7.42；
更优选地，所述封闭液为137mM氯化钠、2.7mM氯化钾、4.3mM磷酸氢二钠、1.4mM磷酸二氢钾、1％Tween-20v/v、0.1％Proclin950v/v、1％D-甘露醇w/v及0.1％酪蛋白酸钠w/v，且所述封闭液的pH为7.4。


8.根据权利要求1至6中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述目标抗体包括一种或多种；
优选地，所述目标抗体为如下任意一种或多种疾病相关的抗体：自身免疫病、过敏性疾病、感染性疾病以及肿瘤；
优选地，所述自身免疫病相关的抗体选自如下抗体中的任意一种或多种：IA2A、GADA、IAA、ZnT8Ab、TGA、TPOAb、TRAb、AsA、HCGAb、ACA-GAb、抗胎盘抗原抗体、AMA-M2Ab、Sp100Ab、SLAAb、LKM-1Ab、ASMAAb、LC-1Ab、ACTAb、ASGPRAb、IFA、tTGAb、ASCA-GAb、PLA2RAb、RNPAAb、RNPCAb、SmBAb、Ro60Ab、Ro52Ab、SSBAb、Rib-PAb、PNCAAb、CENPBAb、组蛋白抗体、gp210Ab、PTAb、B2gp1-GAb、ssDNAAb、dsDNAAb、Anti-PAb、C1qAb、P0Ab、u1-SnRNP、TOPODNAIAb、DSG3Ab、GAF-3XAb、抗α胞衬蛋白抗体、GM1-Ab、Jo-1Ab、PL7Ab、MOGAb、KuAb、抗软骨抗体、MAGAb、RF-GAb、CCPAb、AKAAb、抗Ⅱ型胶原抗体、ASOAb、RA33Ab、AFA、抗巨噬细胞抗体、PR3Ab、MPOAb、ANCAAb、AECAAb、抗青霉素抗体、NMDAAb、PRA、OJAb、EJAb、SRPAb、CADM-140Ab及ARAAb；
优选地，所述过敏性疾病相关的抗体选自如下抗体中任意一种或多种：抗Chao2抗体、抗CryjII抗体、抗Dacg3抗体、抗Api抗体、抗OLE9抗体、抗LOLPIB抗体、抗烟曲霉过敏原特异性抗体、抗艾蒿花粉过敏原特异性抗体、抗小麦谷蛋白抗体、抗小麦醇溶蛋白抗体、抗大豆食物特异性抗体、抗橄榄储存蛋白抗体、抗菠萝蛋白酶抗体、抗草莓Dacg4抗体、抗无花果蛋白酶抗体、食物特异性-芹菜抗体、食物特异性-甘薯抗体、食物特异性-芝麻抗体、抗花生蛋白Arah1抗体、抗花生蛋白Arah3抗体、抗花生凝集素抗体、抗抑制素抗体、抗蓝豆蛋白抗体、抗鳕鱼蛋白酶抗体、抗贝类毒素抗体、抗层粘连蛋白抗体、抗半乳糖凝集素3抗体、抗嚏根草苷抗体、抗木瓜蛋白酶抗体及抗蓖麻毒素抗体；
优选地，所述感染性疾病相关的抗体中的病原菌选自病毒、细菌、支原体、立克次体及衣原体中的一种或多种；
优选地，所述感染性疾病相关的抗体选自如下抗体的一种或多种：HAVAb、HBVAb、HBeAb、HBsAb、HBcAb、Pres1Ab、Pres2Ab、HCVE1Ab、HCVE2Ab、HCcAb、HEVAb、HGVAb、AIVAb、BIVAb、EBV-NA1Ab、EBV-VCAAb、EBGPAb、EBLMPAb、抗白喉类毒素抗体、FHAAb、PTAb、抗百日咳2型菌毛抗体、抗百日咳3型菌毛抗体、抗百日咳黏着素抗体、抗肺炎克雷伯杆菌抗体、CpnAb、MPAb、HPIVAb、RSVAb、TBAb、抗流感嗜血杆菌抗体、MVAb、抗禽型流感病毒抗体、抗嗜肺军团菌抗体、VZVAb、ADVAb、SARS-Cov-2Ab、SARS-Cov-2NAb、SARS-Cov-2中和抗体、SARS-Cov-2SAb、抗SARS-CoV抗体、抗鼻病毒抗体、抗埃可病毒抗体、VCAAb、抗CVB-M抗体、抗柯萨奇病毒B组抗体、EV71Ab、CJCAb、RVAb、抗伤寒杆菌抗体、抗小肠结肠炎耶尔森氏菌抗体、HPAb、HSVAb、HSV1Ab、HSV2Ab、HSVIIAb、HSVIAb、RVAb、TOXAb、CMVAb、HCMVAb、HPVB19Ab、UUAb、TPAb、HIV1p24Ab、HIVgp120Ab、MhAb、CTAb、抗生殖道支原体抗体、抗立克次体抗体、抗人类T淋巴细胞白血病病毒抗体、布鲁氏杆菌抗体、LMOAb、HVAb、PolioAb、RaAb、LymeAb、ASKAb、ASOAb、抗脑膜炎奈瑟菌抗体、ICAb、抗疟原虫抗体、抗诺如病毒抗体、抗破伤风类毒素抗体、WNVAb、抗细粒棘球绦虫抗体、抗星状病毒抗体、抗血吸虫抗体、抗乙型脑炎病毒抗体、HAUAb及TGXAb；
优选地，所述肿瘤相关的抗体选自如下抗体中的一种或多种：抗p53抗体、抗GAGE7抗体、抗PGP9.5抗体、抗CAGE抗体、抗MAGEA1抗体、抗SOX2抗体、抗GBU4-5抗体、抗NY-ESO-1抗体、抗HuD抗体及抗MAGEA4抗体。


9.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，所述目标抗体为自身抗体，优选所述自身抗体选自IA2A、GADA及IAA中的任意一种或多...

【专利技术属性】
技术研发人员：程恳，刘颖，贡卓琳，郭宝森，郑汉城，李丹妮，勾洪磊，孟星宇，
申请(专利权)人：珠海碳云智能科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44