一种基于ddPCR的CD45基因分型检测、小鼠骨髓重建能力检测方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种基于ddPCR的CD45基因分型检测、小鼠骨髓重建能力检测方法及应用。提取小鼠的基因组DNA，利用荧光标记的CD45.1、CD45.2检测探针，通过ddPCR技术对CD45.1和CD45.2抗原进行定量，从而检测小鼠骨髓重建能力；上游序列为SED ID No.1，下游序列为SED ID No.2，CD45.1检测探针的序列为SED ID No.3,CD45.2检测探针的序列为SED ID No.4。本方法只需要少量的血液样本，无需购买昂贵的抗体即可对CD45.1和CD45.2抗原进行定量，从而量化基因修饰细胞和非基因修饰细胞，并据此评估基因修饰对小鼠骨髓重建能力的影响。

【技术实现步骤摘要】
一种基于ddPCR的CD45基因分型检测、小鼠骨髓重建能力检测方法及应用
本专利技术具体涉及一种基于ddPCR的CD45基因分型检测、小鼠骨髓重建能力检测方法及应用。
技术介绍
CD45由一类结构相似，分子量较大的跨膜蛋白组成，广泛存在于白细胞表面，其胞浆区段具有蛋白质酪氨酸磷酸酶的作用，能使底物P56lck和P59fyn上酪氨酸脱磷酸而激活，在细胞的信息传导中发挥重要作用，CD45是细胞膜上信号传导的关键分子，在淋巴细胞的发育成熟，功能调节及信号传递中具有重要意义，CD45的分布可作为某些T细胞亚群的分类标志。据报道现在已在小鼠中鉴定出不同的CD45亚型，常见形式是CD45.2，在C57BL/6小鼠表达，它是由Ptprcb等位基因编码的。而在SJL小鼠品系中鉴定出了另一个等位基因变体Ptprca，该变体翻译成表面蛋白的CD45.1形式。该CD45.1等位基因已成功回交至BL/6背景，并已广泛用于免疫学研究中，以追踪特定基因对造血细胞发育的贡献。在竞争性的同基因骨髓移植模型中，用来自CD45.1和CD45.2供体的1：1嵌合骨髓本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于ddPCR的小鼠骨髓重建能力检测方法，其特征在于：提取小鼠的基因组DNA，利用荧光标记的CD45.1检测探针、CD45.2检测探针，通过ddPCR技术对CD45.1和CD45.2抗原进行定量，从而检测小鼠骨髓重建能力；其中，上游序列为SED ID No.1，下游序列为SED IDNo.2，CD45.1检测探针的序列为SED ID No.3,CD45.2检测探针的序列为SED ID No.4。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于ddPCR的小鼠骨髓重建能力检测方法，其特征在于：提取小鼠的基因组DNA，利用荧光标记的CD45.1检测探针、CD45.2检测探针，通过ddPCR技术对CD45.1和CD45.2抗原进行定量，从而检测小鼠骨髓重建能力；其中，上游序列为SEDIDNo.1，下游序列为SEDIDNo.2，CD45.1检测探针的序列为SEDIDNo.3,CD45.2检测探针的序列为SEDIDNo.4。


2.根据权利要求1所述的一种基于ddPCR的小鼠骨髓重建能力检测方法，其特征在于：所述CD45.1检测探针的5′端标记FAM荧光基团，3′端标记淬灭基团。


3.根据权利要求1所述的一种基于ddPCR的小鼠骨髓重建能力检测方法，其特征在于：所述CD45.2检测探针的5′端标记HEX荧光基团，3′端标记淬灭基团。


4.根据权利要求1所述的一种基于ddPCR的小鼠骨髓重建能力检测方法，其特征在于：所述CD45.1检测探针、CD45.2检测探针的反应温度为60-65℃。


5.根据权利要求1所述的一种基于ddPCR的小鼠骨髓重建能力检测方法，其特征在于：所述ddPCR的反应体系共20μL，组分如下：
DEPC-H2O12.4μL，10XddPCRsupermix2μL，上游引物50μM/0.2μL，下游引物50μM/0.2μL，CD45.1检测探针50μM/0.1μL，CD45.2检测探针50μM/0.1μL，模板基因组DNA50ng/5μL。

【专利技术属性】
技术研发人员：张永有，胡会龙，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35