调控异化金属还原菌电子流的方法技术

一种基于CRISPR‑ddAsCpf1调控异化金属还原菌电子流的方法，包括如下步骤：(A)初步选择与能量代谢有关的系列基因；(B)构建靶向所述系列基因的crRNA库；(C)将含有crRNA库的质粒和编码ddAsCpf1的质粒转入异化金属还原菌内，并筛选能够调控异化金属还原菌的电子流的有效基因；(D)通过调控所述有效基因的表达来调控异化金属还原菌电子流。

【技术实现步骤摘要】
调控异化金属还原菌电子流的方法
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种通过抑制电子流竞争路径调控异化金属还原菌电子流的方法。
技术介绍
异化金属还原细菌进化出了特有的胞外电子传递方式用以在厌氧环境中利用多种电子受体完成细胞呼吸代谢过程[1-3]。这类细菌也因为这个特点在污染物降解，能量回收，化学品生产，环境修复等方面具有重要作用。多种异化金属还原细菌，如Shewanellaspp.，Geobacterspp.，Pseudomonasspp.，Listeriaspp.已经被不同的生境中筛选出来并表征了其对应的胞外电子传递通路。ShewanellaoneidensisMR-1作为一株异化金属还原模式菌株，已经被广泛用于科学研究。ShewanellaoneidensisMR-1具有一个复杂的胞外电子传递网络用来将胞内代谢产生的电子传递到胞外电子受体。该细菌胞内首先将L-乳酸氧化分解产生的电子汇聚到NADH池，进而传递电子通过醌池到达内膜和周质上的多种氧化还原终端酶，以及外膜上的孔蛋白-细胞色素复合体(OmcA-MtrCAB)并最终通过直接和间接的方式传本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于CRISPR-ddAsCpf1调控异化金属还原菌电子流的方法，包括如下步骤：/n(A)初步选择与能量代谢有关的系列基因；/n(B)构建靶向所述系列基因的crRNA库；/n(C)将含有crRNA库的质粒和编码ddAsCpf1的质粒转入异化金属还原菌内，并筛选能够调控异化金属还原菌的电子流的有效基因；/n(D)通过调控所述有效基因的表达来调控异化金属还原菌电子流。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR-ddAsCpf1调控异化金属还原菌电子流的方法，包括如下步骤：
(A)初步选择与能量代谢有关的系列基因；
(B)构建靶向所述系列基因的crRNA库；
(C)将含有crRNA库的质粒和编码ddAsCpf1的质粒转入异化金属还原菌内，并筛选能够调控异化金属还原菌的电子流的有效基因；
(D)通过调控所述有效基因的表达来调控异化金属还原菌电子流。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述与能量代谢有关的系列基因为细胞色素基因。


3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述含有crRNA库的质粒为由组成型启动子PCN表达crRNA的pECR质粒。


4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述编码ddAsCpf1的质粒为由IPTG诱导型Plac启动子表达ddAsCpf1的pEAC01质粒。
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【专利技术属性】
技术研发人员：俞汉青，李杰，汤强，刘东风，
申请(专利权)人：中国科学技术大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34