IRES序列、IRES序列的应用和多顺反子表达载体制造技术

本申请属于基因工程技术领域，具体涉及一种IRES序列、IRES序列的应用和多顺反子表达载体。所述IRES序列是基于SARS‑Cov‑2中的ORF8基因片段得到的。该IRES序列可以直接从SARS‑Cov‑2中分离得到，也可以人工合成。该IRES序列具备对真核生物的起始翻译能力，可以应用于目标基因的表达过程，也可以应用于抗SARS‑Cov‑2药物的筛选。

【技术实现步骤摘要】
IRES序列、IRES序列的应用和多顺反子表达载体
本申请属于基因工程
，具体涉及一种内部核糖体进入位点(InternalRibosomeEntrySites，IRES)序列、IRES序列的应用和多顺反子表达载体。
技术介绍
真核生物的翻译(Translation)过程是基因表达的重要阶段，是指将从脱氧核糖核酸(DNA)转录得到的真核生物的信使核糖核酸(mRNA)上的遗传信息合成蛋白质的过程。真核生物的翻译过程中，需要依赖mRNA的5’端帽子结构与核糖体结合，起始翻译。但对于缺乏帽子构的RNA病毒，可以基于RNA病毒的5’端非翻译区(untranslatedregion,UTR)翻译调控的顺式作用元件IRES序列，招募核糖体进入病毒的mRNA起始翻译。IRES序列是一种具有非帽子结构依赖性的起始翻译能力的核苷酸序列，能够在反式作用因子的辅助下，招募核糖体进入病毒mRNA的翻译起始位点。并且有研究表明，将IRES序列与外源cDNA融合，IRES能独立的起始翻译。因此对IRES序列的研究对基因表达有着重要的意义。
技术实现思路
本申请提供一种IRES序列、IRES序列的应用和多顺反子表达载体，该IRES序列具备对真核生物的起始翻译能力，能够应用于目标基因的表达过程。第一方面，本申请提供一种IRES序列，所述IRES序列是基于SARS-Cov-2中的ORF8基因片段得到，所述ORF8基因片段如SEQIDNO.1所示。本申请提供的IRES序列具备对真核生物的起始翻译能力，能够应用于目标基因的表达过程。可选的，所述IRES序列如SEQIDNO.1所示。可选的，所述IRES序列是所述ORF8基因片段经过延长、裁切、重组和/或突变得到的序列。可选的，所述IRES序列包括：所述ORF8基因片段，以及，所述ORF8基因片段在所述SARS-Cov-2中的上游区段和/或下游区段。可选的，所述IRES序列包括所述ORF8基因片段、120bp的所述上游区段和14bp的所述下游区段，所述IRES序列如SEQIDNO.2所示。可选的，所述IRES序列从所述SARS-Cov-2中分离得到。第二方面，本申请提供一种如第一方面或第一方面的任一可选方式所述的IRES序列在目的基因表达上的应用。第三方面，本申请提供一种如第一方面或第一方面的任一可选方式所述的IRES序列在抗SARS-Cov-2药物筛选中的应用。第四方面，本申请提供一种多顺反子表达载体，包括如第一方面或第一方面的任一可选方式所述的IRES序列，所述IRES序列位于所述多顺反子表达载体中目的基因的起始密码子上游。本申请提供的多顺反子表达载体能够同步表达多顺反子表达载体中包含的目的基因。可选的，所述多顺反子表达载体为双荧光蛋白表达载体，所述双荧光蛋白表达载体包括所述IRES序列、GFP和mCherry，所述IRES序列位于所述GFP的终止密码子和所述mCherry的起始密码子之间。附图说明图1是本申请实施例提供的一种有IRES序列的双荧光蛋白表达载体的图谱；图2是本申请实施例提供的一种目的载体和目的片段的电泳图；图3是本申请实施例提供的一种无IRES序列的双荧光蛋白表达载体的图谱；图4是本申请实施例提供的一种HEK-293T细胞转染后48小时的荧光图。具体实施方式本申请中，术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B的情况。其中A，B可以是单数或者复数。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。在本申请实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本申请。在本申请实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。在本申请说明书中描述的参考“一个实施例”或“一些实施例”等意味着在本申请的一个或多个实施例中包括结合该实施例描述的特定特征、结构或特点。由此，在本说明书中的不同之处出现的语句“在一个实施例中”、“在一些实施例中”、“在其他一些实施例中”、“在另外一些实施例中”等不是必然都参考相同的实施例，而是意味着“一个或多个但不是所有的实施例”，除非是以其他方式另外特别强调。术语“包括”、“包含”、“具有”及它们的变形都意味着“包括但不限于”，除非是以其他方式另外特别强调。本申请实施例说明书中所提到的相关成分的含量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间含量的比例关系，因此，只要是按照本申请实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本申请实施例说明书公开的范围之内。具体地，本申请实施例说明书中所述的体积、核苷酸的数量、转速、时间可以是μL、mL、bp、kbp、rpm、s、min、h等基因工程
公知的计量单位。下面结合具体实施例，对本申请提供的IRES序列、IRES序列的应用以及多顺反子表达载体进行示例性的说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请的方案，并不用于限定本申请。本申请提供的IRES序列是基于SARS-Cov-2中的ORF8基因片段得到的。其中，SARS-Cov-2中的ORF8基因片段如SEQIDNO.1所示。SEQIDNO.1：5’-ATGAAATTTCTTGTTTTCTTAGGAATCATCACAACTGTAGCTGCATTTCACCAAGAATGTAGTTTACAGTCATGTACTCAACATCAACCATATGTAGTTGATGACCCGTGTCCTATTCACTTCTATTCTAAATGGTATATTAGAGTAGGAGCTAGAAAATCAGCACCTTTAATTGAATTGTGCGTGGATGAGGCTGGTTCTAAATCACCCATTCAGTACATCGATATCGGTAATTATACAGTTTCCTGTTTACCTTTTACAATTAATTGCCAGGAACCTAAATTGGGTAGTCTTGTAGTGCGTTGTTCGTTCTATGAAGACTTTTTAGAGTATCATGACGTTCGTGTTGTTTTAGATTTCATCTAA-3’。SARS-Cov-2也可以称为新型冠状病毒，是一种具有外膜的正链单股RNA病毒。冠状病毒隶属于网巢病毒目冠状病毒科冠状病毒属，而冠状病毒属又可细分为4个属，分别为α冠状病毒属、β冠状病毒属、γ冠状病毒属和δ冠状病毒属。其中，SARS-Cov-2属于β冠状病毒属。SARS-Cov-2呈球形或椭圆形，病毒颗粒的直径一般在60～200nm之间，平均直径为100nm。SARS-Cov-2的遗传物质是目前为止所有RNA病毒中含量最大的。SARS-Cov-2可以感染人、鼠、猪、猫、犬和禽类脊椎动物，是目前发现的第7种可以感染人类的冠状病毒，具有高传播力、潜伏期长，突变率高等特点。通过对SARS-Cov-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种内部核糖体进入位点IRES序列，其特征在于，所述IRES序列基于SARS-Cov-2中的ORF8基因片段得到，所述ORF8基因片段如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种内部核糖体进入位点IRES序列，其特征在于，所述IRES序列基于SARS-Cov-2中的ORF8基因片段得到，所述ORF8基因片段如SEQIDNO.1所示。


2.如权利要求1所述的IRES序列，所述IRES序列如SEQIDNO.1所示。


3.如权利要求1所述的IRES序列，所述IRES序列是所述ORF8基因片段经过延长、裁切、重组和/或突变得到的序列。


4.如权利要求1所述的IRES序列，其特征在于，所述IRES序列包括：所述ORF8基因片段，以及，所述ORF8基因片段在所述SARS-Cov-2中的上游区段和/或下游区段。


5.如权利要求4所述的IRES序列，其特征在于，所述IRES序列包括所述ORF8基因片段、120bp的所述上游区段和14bp的所述下游区段，所述IRES序列如SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴俊彪，卢俊南，杨炜钐，温栾，林鑫，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44