一种杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株可分泌番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体用于制备免疫金标速测卡，其方法如下，步骤1、对番茄斑萎病毒重组蛋白进行纯化，步骤2、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，获得多克隆抗体，步骤3、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合、克隆化筛选制备得到该单克隆抗体，最后制备小鼠腹水，经过纯化得到鼠抗番茄斑萎病毒单克隆抗体，步骤4、通过配对筛选，得到配对的单克隆抗体和多克隆抗体用于所述免疫金标速测卡，借此，本发明专利技术具有可将该免疫金标速测卡应用于番茄斑萎病毒进行快速、现场和灵敏的检测的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种杂交瘤细胞株及其应用
本专利技术属于番茄斑萎病毒
，特别涉及一种杂交瘤细胞株及其应用。
技术介绍
番茄斑萎病毒(TSWV)的粒子呈球型，直径约85am，表面包裹有一层膜，膜外层由突起层组成，突起层厚5nm，几乎连续。该病毒共有4种结构蛋白，包括：糖蛋白G1，其分子质量为78.0kDa；糖蛋白G2，其分子质量为58.0kDa；蛋白L，分子质量为200.0kDa；外壳蛋白N，其分子质量为28.8kDa。粒子重量的20％～30％为脂类，粒子重量的7％为碳水化合物，病毒包裹3分子线形ssRNA，其基因组长约16600nt，核酸占病毒粒子总重量的1％～2％，各基因组RNA均由核衣壳蛋白(N)包被，形成拟核衣壳结构，每一双层膜结构内包被3个核衣壳。大的RNA片段(L)为8897nt，编码RNA聚合酶(331kD)，小RNA片段(S，2916nt)和中等大小RNA片段(M，4821nt)以反义方式排列，小RNA编码核衣壳蛋白(30kD)及非结构蛋白(NS)，mRNA的互补链编码G1和G2的前蛋白和一种非结构蛋白(NS)，病毒链编码运动蛋白(M，33本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO:C202055。/n

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CCTCCNO:C202055。


2.一种番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生，其特征在于，所述单克隆抗体亚型为IgG1，轻链类型为κ。


3.一种检测试剂盒，该检测试剂盒内包括权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述检测试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光检测试剂盒中的一种。


4.一种免疫金标速测卡，包括标记垫和与标记垫相搭接的层析膜，其特征在于，所述标记垫含有被胶体金标记的权利要求2所述的单克隆抗体，所述层析膜上的检测线含有番茄斑萎病毒多克隆抗体，所述层析膜上的控制线含有羊抗鼠IgG二抗。


5.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，其制备方法如下：
步骤1、对番茄斑萎病毒重组蛋白进行纯化；
步骤2、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，获得多克隆抗体；
步骤3、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合、克隆化筛选制备得到单克隆抗体细胞株，最后制备小鼠腹水，经过纯化得到鼠抗番茄斑萎病毒单克隆抗体；
步骤4、通过配对筛选，得到配对的单克隆抗体和多克隆抗体用于所述免疫金标速测卡。


6.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述标记垫上单克隆抗体的量为5ng-50ng，层析膜上多克隆抗体的量为0.4μg-1.2μg。


7.根据权利要求5所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述步骤1中进行纯化的方法如下：
步骤5、选取病毒目标蛋白合成基因序列，并按照基因序列，合成原核表达载体pET-30a-TSWV，转化BL21与Rosetta；
步骤6、固体平板上挑取pET30a-TSWV单克隆菌落接入LB液体培养基，37℃培养12h-14h；
步骤7、次日，将步骤6中的菌种以1：50接入LB液体培养基，37℃培养至OD＝0.4-0.6，加入IPTG，20℃-30℃诱导表达3h-7h后菌液离心，收集菌体；
步骤8、将步骤7中的菌体进行超声波裂解，收集...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金广，余艳璧，王凤龙，夏振远，黄坤，李莹，申莉莉，刘春明，蔺忠龙，谢永辉，张立猛，杨海林，王志江，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所，云南省烟草农业科学研究院，云南省烟草公司红河州公司，云南省烟草公司昆明市公司，云南省烟草公司玉溪市公司，
类型：发明
国别省市：山东;37