本发明专利技术公开了一种杂交瘤细胞LCZ9H4及其分泌的单克隆抗体和应用，所述杂交瘤细胞LCZ9H4保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：C2019145。本发明专利技术能够稳定产生抗δ‑catenin单克隆抗体，且细胞染色体稳定、抗体效价高，完全能够应用于δ‑catenin的应用的研究中。
【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞LCZ9H4及其分泌的单克隆抗体和应用
本专利技术属于临床诊断
，特别是涉及一种杂交瘤细胞LCZ9H4及其制备方法，杂交瘤细胞LCZ9H4分泌的单克隆抗体和单克隆抗体在检测人前列腺癌的试剂盒中的应用。
技术介绍
前列腺癌的治疗及预后主要取决于早期诊断。虽然没有强制要求对一般有患前列腺癌风险的男性进行检测，但是美国癌症协会建议男性从50岁开始进行前列腺特异抗原(PSA)检测和直肠指检(DRE)。处于患前列腺癌风险较高的男性应在45岁开始检测。在过去的几十年间，由于前列腺癌的早期筛查使得前列腺癌在初期和局部发展阶段就被及早的检测出来，前列腺癌患者的5年存活率显著提高，这也充分表明了前列腺癌早发现早诊断的重要性。临床上主要采用前列腺特异性抗原(PSA)、fPSA/tPSA和直肠指检(DRE)来筛查前列腺癌，最初可疑前列腺癌患者通常由直肠指检或血清PSA检查后再决定是否进行前列腺穿刺活检。前列腺癌患者主要通过前列腺系统性穿刺活检取得组织再病理学诊断得以确诊。但是，大量的数据表明血清PSA水平的升高有可能是前列腺癌以外的因素导致，如良性前列腺增生。因此，假阳性是PSA筛查的主要弊端，并可能导致不必要的活检或其他令患者痛苦的干预治疗。另外，术前血清PSA水平并不总是与癌症体积或前列腺癌Gleason分数相关。此外相当一部分患者处于诊断灰区(血清tPSA介于4-10ng/ml，国内推荐fPSA/tPSA>0.16为正常参考值)，但是即使fPSA/tPSA>0.25，发生前列腺癌的可能性仍约为8％，使临床上相当部分患者不能被早期诊断。许多研究估计PSA检查无法检测出超过20％至30％的前列腺癌病患。最近，美国一些针对临床数据的调查得出的结论是PSA筛查无法很好地检测出前列腺癌。因此，开发更可靠的生物标记物来补充PSA筛查就变得尤为重要，这样可以提高前列腺癌的风险评估和预测其发展趋势的准确性,避免对患者的过度诊断和治疗。开发独立于PSA检测的前列腺癌生物标记物不仅可以提高早期诊断的准确性还可以为治疗方案提供很好的指导依据。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种杂交瘤细胞LCZ9H4及其制备方法、该杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体和检测人前列腺癌的试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术采取了以下技术方案：一种杂交瘤细胞LCZ9H4，其特征在于：所述杂交瘤细胞LCZ9H4保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNo：C2019145。本专利技术还提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞LCZ9H4分泌产生。本专利技术还提供一种试剂盒，所述试剂盒包括所述的杂交瘤细胞或所述的单克隆抗体。进一步地说，所述试剂盒为化学发光试剂盒。本专利技术还提供了所述的杂交瘤细胞或所述的单克隆抗体在制备试剂盒中的用途。进一步地说，所述试剂盒是基于免疫检测的试剂盒。进一步地说，所述试剂盒为化学发光试剂盒。进一步地说，所述试剂盒用于检测人前列腺癌。本专利技术还提供了所述的杂交瘤细胞或所述的单克隆抗体在制备用于人前列腺癌诊断的试剂盒中的用途。本专利技术的有益效果至少具有以下几点：1、该杂交瘤细胞能够稳定产生抗δ-catenin单克隆抗体，且细胞染色体稳定、抗体效价高，完全能够应用于δ-catenin的应用的研究中；2、该抗δ-catenin的单克隆抗体可应用于人前列腺癌诊断试剂盒的制备中，检测样本包括了人体尿液、血液、精液、前列腺按摩液等人体样本，用于人前列腺癌的诊断，大大弥补现有临床诊断技术的不足。3、本专利技术的检测方法不仅限于化学发光免疫技术，也包括了胶体金免疫层析技术、荧光免疫层析技术等各种类似的免疫技术。具体实施方式下面对本专利技术的较佳实施例进行详细阐述，以使本专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例1：杂交瘤细胞LCZ9H4的制备，包括以下步骤：1、鼠抗δ-catenin杂交瘤细胞的建立，包括以下步骤：a.选用8只8-12周龄、体重20g左右且健康的雌性BALB/C小鼠，适用性饲养1周后，采集阴性血作为对照用；b.初次免疫用60ug/mlδ-catenin蛋白加弗氏完全佐剂等体积搅拌乳化，肌肉注射。两周后，用30ug/mlδ-catenin蛋白加弗氏不完全佐剂强化免疫2次，每次间隔2周，ELISA检测血清抗体效价，免疫小鼠效价明显达到1:100000以上，准备加强免疫；其中，ELISA检测法具体为：在96孔板中加入用包被缓冲液将δ-catenin蛋白抗原稀释至3ug/ml，在每个反应孔中加50u1，1小时，用洗液洗涤3次，加100u1/孔封闭液在37℃封闭2h，洗涤3次，拍干。加入待测血清，第一孔1:800稀释，往下1:2的梯度倍比稀释，37℃孵育30min，洗板4次，拍干。取辣根酶标记的羊抗鼠IgG按照1:2500倍稀释，100u1/孔加入反应孔，37℃孵育30min，洗涤4次，拍干。最后加入TMB100u1/孔，显色15-30min。然后加入终止液，50u1/孔。以450nm单波长测定各孔OD值，并用阳性对照孔作为判断阳性。结果为血清效价为1:100000的阳性小鼠，可以用于细胞融合。c.用40ug/mlδ-catenin蛋白肌肉注射强化免疫(不含佐剂)，3天后尾部采血，ELISA检测血清抗体效价，同时取脾脏。d.将脾脏细胞与骨髓瘤细胞按细胞数10:1左右进行混合，并在聚乙二醇(PEG，分子量为1500)的促融作用下进行融合，选择培养基为含HAT的RPMI1640培养基(50ml)。11天后，通过间接ELISA方法筛选出能与δ-catenin蛋白反应的阳性杂交瘤细胞，并将初筛得到的阳性杂交瘤细胞扩大培养，并进行标签蛋白杂交瘤细胞的排除，以复筛出针对δ-catenin蛋白而非标签的杂交瘤细胞；e.用有限稀释法将获得的阳性杂交瘤细胞进行克隆，经过6次筛选最终确定5株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞A-1，A-2，A-3，A-4，A-5。间接ELISA方法检测所有阳性5株细胞是否能够特异识别δ-catenin：一株命名为A的阳性细胞可以与δ-catenin特异结合，说明A可以特异识别δ-catenin。经筛选得到能稳定分泌抗人δ-catenin的单克隆抗体的杂交瘤细胞A，该杂交瘤细胞A的分类命名为杂交瘤细胞LCZ9H4，已于2019年8月28日保藏于保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉大学，保藏号为CCTCCN0:C2019145。2、鼠抗人δ-catenin单克隆抗体的制备及单抗亚型的鉴定取1000u1杂交瘤细胞LCZ9H4(5株杂交瘤细胞LCZ9H4-1，LCZ9H4-2，LCZ9H4-3，LCZ9H4-4，LCZ9H4-5)的培养上清，采用sigma分型试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型，结果显示：单克隆抗体的重链为IgGl型，轻链为Kapp本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种杂交瘤细胞LCZ9H4，其特征在于：所述杂交瘤细胞LCZ9H4保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：C2019145。/n
【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞LCZ9H4，其特征在于：所述杂交瘤细胞LCZ9H4保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNo：C2019145。
2.一种单克隆抗体，其特征在于：其由权利要求1所述的杂交瘤细胞LCZ9H4分泌产生。
3.一种试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的杂交瘤细胞或权利要求2所述的单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为化学发光试剂盒。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱泽，孟洁，
申请(专利权)人：昂科生物医学技术苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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