一株对根线虫具有抑制作用的土曲霉及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株对根线虫具有抑制作用的土曲霉及其应用。本发明专利技术保护一种制备土曲霉HH6‑10的提取物的方法，包括如下步骤：将土曲霉HH6‑10进行发酵，得到发酵物；取所述发酵物，采用有机试剂进行提取，收集提取液；将所述提取液进行减压蒸馏以去除有机溶剂和水，得到提取物。本发明专利技术提供了土曲霉(Aspergillus terreus)HH6‑10，保藏登记号为CGMCC No.21032。本发明专利技术还保护所述提取物或土曲霉HH6‑10的应用：在制备线虫抑制剂中的应用；在抑制线虫中的应用；在制备式(Ⅰ)所示化合物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一株对根线虫具有抑制作用的土曲霉及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一株对根线虫具有抑制作用的土曲霉及其应用。
技术介绍
根线虫，又名根结线虫，是动物门，线虫纲的一种昆虫。根线虫雌雄异体。幼虫呈细长蠕虫状；雄成虫线状，尾端稍圆，无色透明，大小1.0～1.5×0.03～0.04毫米；雌成虫梨形，多埋藏在寄主组织内，大小0.44～1.59×0.26～0.81毫米；卵囊通常为褐色，表面粗糙，常附着许多细小的砂粒。根线虫寄主范围广泛，可危害39科130多种作物，在无寄主条件下可存活一年。被害株地上部生长矮小、缓慢、叶色异常，结果少，产量低，甚至造成植株提早死亡。根线虫多分布在0-20厘米土壤内，特别是3-9厘米土壤中线虫数量最多。土温25℃-30℃，土壤湿度为40％-70％条件下线虫繁殖很快，10℃以下停止活动，55℃时10分钟死亡。由于药物的广泛使用，根结线虫随之发生了耐药现象，因此需要筛选新的药物，用于农业线虫防治。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株对根线虫具有抑制作用的土曲霉及其应用。本专利技术保护一种制备土曲霉HH6-10的提取物的方法，包括如下步骤：将土曲霉HH6-10进行发酵，得到发酵物；取所述发酵物，采用有机试剂进行提取，收集提取液；将所述提取液进行减压蒸馏以去除有机溶剂和水，得到提取物。所述发酵采用的培养基为发酵培养基。所述有机试剂由3-5体积份乙酸乙酯和1体积份甲醇组成。具体来说，有机试剂由4体积份乙酸乙酯和1体积份甲醇组成。所述减压蒸馏的温度为40℃。制备土曲霉HH6-10的提取物的方法具体如下：(1)取土曲霉HH6-10，接种于PDA培养基平板上，28℃静置培养3-5天；(2)完成步骤(1)后，用无菌水冲洗所述平板，收集孢子，每个平板约得到50-60ml孢子液；(3)将步骤(2)得到的孢子液接种至装有发酵培养基的三角瓶中(每个三角瓶接种10ml孢子液)，20-35℃静置培养21-35天(具体可为：28℃静置培养28天)；(4)完成步骤(3)后，在所述三角瓶中加入2.0L有机试剂，室温浸提24h，收集上清液；(5)完成步骤(4)后，在所述三角瓶中加入2.0L有机试剂，室温浸提24h，收集上清液；(6)完成步骤(5)后，在所述三角瓶中加入2.0L有机试剂，室温浸提24h，收集上清液；(7)将步骤(4)得到的上清液、步骤(5)得到的上清液和步骤(6)得到的上清液合并，然后减压蒸馏以去除有机溶剂和水，得到的产物即为提取物。所述方法制备得到的提取物也属于本专利技术的保护范围。本专利技术还提供了一种制备土曲霉HH6-10的发酵物的方法，包括如下步骤：将土曲霉HH6-10进行发酵，得到发酵物。所述发酵采用的培养基为发酵培养基。制备土曲霉HH6-10的发酵物的方法具体如下：(1)取土曲霉HH6-10，接种于PDA培养基平板上，28℃静置培养3-5天；(2)完成步骤(1)后，用无菌水冲洗所述平板，收集孢子，每个平板约得到50-60ml孢子液；(3)将步骤(2)得到的孢子液接种至装有发酵培养基的三角瓶中(每个三角瓶接种10ml孢子液)，20-35℃静置培养21-35天(具体可为：28℃静置培养28天)。完成步骤(3)后，三角瓶中的内容物即发酵物。所述方法制备得到的发酵物也属于本专利技术的保护范围。以上任一所述发酵培养基的原料组成如下：1-2质量份大米和1-2质量份水。以上任一所述发酵培养基的制备方法如下：1-2质量份大米和1-2质量份水混合，浸泡。以上任一所述发酵培养基的制备方法具体如下：200g大米和200g水混合，室温浸泡12小时。三角瓶规格为1000mL。每个三角瓶中的发酵培养基如下：将200g大米和200g水混合，室温浸泡12小时。以上任一所述PDA培养基平板的直径具体可为9cm。本专利技术还保护所述发酵物或所述提取物的应用，为如下(a)或(b)：(a)在制备线虫抑制剂中的应用；(b)在抑制线虫中的应用。本专利技术还保护所述发酵物或所述提取物在制备式(Ⅰ)所示化合物中的应用。本专利技术提供了土曲霉(Aspergillusterreus)HH6-10，已于2020年12月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCCNo.21032。本专利技术还保护土曲霉HH6-10的应用，为如下(a)或(b)：(a)在制备线虫抑制剂中的应用；(b)在抑制线虫中的应用。本专利技术还保护土曲霉HH6-10在制备式(Ⅰ)所示化合物中的应用。本专利技术还保护式(Ⅰ)所示化合物的应用，为如下(a)或(b)：(a)在制备线虫抑制剂中的应用；(b)在抑制线虫中的应用。以上任一所述线虫具体可为南方根结线虫。本专利技术提供的菌株的发酵提取物具有很高的抗根线虫的活性。本专利技术对菌株的发酵提取物进行化合物分离，得到了式(Ⅰ)所示化合物，该化合物对根线虫具有较高的致死率。附图说明图1为反相色谱层析的色谱图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。如无特殊说明，采用的培养基均为灭菌后的培养基。DMSO全称为二甲基亚砜。如无特殊说明，以下实施例中的定量试验，均设置三次重复试验，结果取平均值。实施例1、菌株的分离、鉴定和保藏一、菌株HH6-10的采集2019年9月从厦门沿海红树林根际土壤中分离到一株菌，命名为菌株HH6-10。二、菌株HH6-10的鉴定形态特征：菌丝体为浅黄色，气生菌丝为树根状，短绒毛状，边缘白色，在培养基表面向上生长旺盛，菌落较大，有少量放射状沟纹；孢子梗顶端短棒状。ITS部分序列见序列表的序列1，与GENBANKACCESSIONNO.NR131276.1的序列相似性最高，相似性为99.67％。根据鉴定结果，菌株HH6-10属于土曲霉(Aspergillusterreus)。三、菌株HH6-10的保藏土曲霉(Aspergillusterreus)HH6-10，已于2020年12月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备土曲霉的提取物的方法，包括如下步骤：/n将土曲霉(Aspergillus terreus)HH6-10进行发酵，得到发酵物；土曲霉(Aspergillusterreus)HH6-10，其保藏登记号为CGMCC No.21032；/n取所述发酵物，采用有机试剂进行提取，收集提取液；/n将所述提取液进行减压蒸馏以去除有机溶剂和水，得到提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备土曲霉的提取物的方法，包括如下步骤：
将土曲霉(Aspergillusterreus)HH6-10进行发酵，得到发酵物；土曲霉(Aspergillusterreus)HH6-10，其保藏登记号为CGMCCNo.21032；
取所述发酵物，采用有机试剂进行提取，收集提取液；
将所述提取液进行减压蒸馏以去除有机溶剂和水，得到提取物。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述有机试剂由3-5体积份乙酸乙酯和1体积份甲醇组成。


3.权利要求1或2所述方法制备得到的提取物。


4.一种制备土曲霉的发酵物的方法，包括如下步骤：
将土曲霉(Aspergillusterreus)HH6-10进行发酵，得到发酵物；
土曲霉(Aspergilluste...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋福行，王龙，杨娜，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11