【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】外泌体胞外囊泡及其使用方法本披露涉及包含经修饰的RNA的外泌体。本披露进一步涉及使用本文披露的外泌体的方法和组合物。在某些方面，本文披露的外泌体可用于将经修饰的RNA递送至细胞。在某些方面，本文披露的外泌体可用于治疗或预防受试者的障碍。还提供了用于产生所披露的外泌体的方法和组合物。RNA是一种用于治疗多种疾病的有前途的治疗分子，这些疾病包括癌症、传染病和遗传性基因病状(Pardi等人.(2018)NatRevDrugDiscov.[自然评论·药物发现]17(4)：261-79；Dunbar等人.(2018)Science[科学]359(6372)：eaan4672)。RNA疗法通常涉及使用RNA干扰(RNAi，例如siRNA)使病理基因沉默或通过将mRNA递送至细胞来表达治疗性蛋白质。为了获得监管机构的批准，用于RNA递送的载体应是安全的(即非免疫原性且无毒的)，并能够有效地将治疗性RNA转运到受体细胞的胞质中。已知的药物载体，例如脂质纳米颗粒(LNP)有助于将药物靶向性、位点特异性递送至组织和细胞，从而增强其生物利用度。包含可离子化的脂质的LNP代表一种RNA递送的平台(Semple等人.(2010)NatBiotechnol.[自然生物技术]28(2)：172-6；Patel等人.(2017)NanoLett.[纳米通讯]17(9)：5711-8；Rietwyk和Peer(2017)ACSNano.[美国化学学会纳米]11(8)：7572-86)。然而，开发LNP和其他此类载体的障碍是与它们的配制品的组分相关的潜在免疫原性反应。<...
【技术保护点】
1.一种分离的外泌体，其包含通过以下方法制备的经修饰的RNA，该方法包括：/n(a)提供一种或多种包含该经修饰的RNA的脂质纳米颗粒(LNP)；/n(b)在允许细胞摄取LNP的条件下使一个或多个细胞与该LNP接触；以及/n(c)分离由该一个或多个细胞产生的外泌体，其中至少一个分离的外泌体包含该经修饰的RNA。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180628 US 62/6913481.一种分离的外泌体，其包含通过以下方法制备的经修饰的RNA，该方法包括：
(a)提供一种或多种包含该经修饰的RNA的脂质纳米颗粒(LNP)；
(b)在允许细胞摄取LNP的条件下使一个或多个细胞与该LNP接触；以及
(c)分离由该一个或多个细胞产生的外泌体，其中至少一个分离的外泌体包含该经修饰的RNA。
2.如权利要求1所述的外泌体，其中该LNP包含至少一种可离子化的脂质、磷脂、结构脂质和/或PEG脂质。
3.如权利要求2所述的外泌体，其中该至少一种可离子化的脂质是DLin-MC3-DMA和/或DLin-DMA。
4.如权利要求2或3权利要求所述的外泌体，其中该至少一种可离子化的脂质是DLin-MC3-DMA。
5.如权利要求2或3权利要求所述的外泌体，其中该至少一种可离子化的脂质是DLin-DMA。
6.如权利要求2至5中任一项所述的外泌体，其中该至少一种磷脂是DSPC。
7.如权利要求2至6中任一项所述的外泌体，其中该至少一种结构脂质是胆固醇。
8.如权利要求2至7中任一项所述的外泌体，其中该至少一种PEG脂质是PEG-DMPE或PEG2000-DMPE。
9.如权利要求1至8中任一项所述的外泌体，其中该LNP包含为DLin-MC3-DMA或DLin-DMA的可离子化的脂质、为DSPC的磷脂、为胆固醇的结构脂质、和/或为PEG-DMPE或PEG2000-DMPE的PEG脂质。
10.如权利要求9所述的外泌体，其中该LNP包含为DLin-MC3-DMA的可离子化的脂质、为DSPC的磷脂、为胆固醇的结构脂质、和为PEG-DMPE或PEG2000-DMPE的PEG脂质。
11.如权利要求9所述的外泌体，其中该LNP包含为DLin-DMA的可离子化的脂质、为DSPC的磷脂、为胆固醇的结构脂质、和为PEG-DMPE或PEG2000-DMPE的PEG脂质。
12.如权利要求1至11中任一项所述的外泌体，其中该LNP包含的可离子化的脂质∶经修饰的RNA核苷酸的摩尔比为约2∶1至约4∶1、或约4∶1、约3∶1或约2∶1。
13.如权利要求1至12中任一项所述的外泌体，其中该LNP包含的可离子化的脂质∶经修饰的RNA核苷酸的摩尔比为约3∶1。
14.如权利要求1至13中任一项所述的外泌体，其中该外泌体包含至少一种可离子化的脂质、磷脂、结构脂质和/或PEG脂质。
15.如权利要求14所述的外泌体，其中该至少一种可离子化的脂质、磷脂、结构脂质和/或PEG脂质源自该LNP。
16.如权利要求14或权利要求15所述的外泌体，其中该至少一种可离子化的脂质是DLin-MC3-DMA和/或DLin-DMA。
17.如权利要求14至16中任一项所述的外泌体，其中该至少一种可离子化的脂质是DLin-MC3-DMA。
18.如权利要求14至16中任一项所述的外泌体，其中该至少一种可离子化的脂质是DLin-DMA。
19.如权利要求14至18中任一项所述的外泌体，其中该至少一种磷脂是DSPC。
20.如权利要求14至19中任一项所述的外泌体，其中该至少一种结构脂质是胆固醇。
21.如权利要求1至20中任一项所述的外泌体，其中该外泌体包含为DLin-MC3-DMA或DLin-DMA的可离子化的脂质、为DSPC的磷脂、和/或为胆固醇的结构脂质。
22.如权利要求21所述的外泌体，其中该外泌体包含为DLin-MC3-DMA的可离子化的脂质、为DSPC的磷脂、和为胆固醇的结构脂质。
23.如权利要求21所述的外泌体，其中该外泌体包含为DLin-DMA的可离子化的脂质、为DSPC的磷脂、和为胆固醇的结构脂质。
24.如权利要求1至23中任一项所述的外泌体，其中该外泌体包含的可离子化的脂质∶经修饰的RNA核苷酸的摩尔比为约1∶1至约3∶1、或约3∶1、约2∶1、约1∶1或小于约1∶1。
25.如权利要求1至24中任一项所述的外泌体，其中该外泌体包含的可离子化的脂质∶经修饰的RNA核苷酸的摩尔比为约1∶1或小于约1∶1。
26.如权利要求1至25中任一项所述的外泌体，其中该外泌体包含的可离子化的脂质∶经修饰的RNA核苷酸的摩尔比小于该LNP包含的该可离子化的脂质∶经修饰的RNA核苷酸的摩尔比。
27.如权利要求1至26中任一项所述的外泌体，其中该外泌体包含的可离子化的脂质∶经修饰的RNA核苷酸的摩尔比为约1∶1或小于约1∶1，并且该LNP包含的可离子化的脂质∶经修饰的RNA核苷酸的摩尔比为约3∶1。
28.如权利要求1至27中任一项所述的外泌体，其中该外泌体的直径为约30nm至约300nm。
29.如权利要求1至28中任一项所述的外泌体，其中该外泌体的直径为约40nm至约150nm。
30.如权利要求1至29中任一项所述的外泌体，其中该细胞获自受试者。
31.如权利要求1至30中任一项所述的外泌体，其中该细胞是上皮细胞、免疫细胞、祖细胞或干细胞。
32.如权利要求1至31中任一项所述的外泌体，其中该细胞是B淋巴细胞、T淋巴细胞或单核细胞。
33.如权利要求1至32中任一项所述的外泌体，其中该经修饰的RNA编码促红细胞生成素多肽。
34.如权利要求1至33中任一项所述的外泌体，其中该经修饰的RNA编码人促红细胞生成素多肽。
35.如权利要求1至34中任一项所述的外泌体，其中该经修饰的RNA编码具有SEQIDNO：1的促红细胞生成素多肽。
36.如权利要求1至35中任一项所述的外泌体，其中该方法在体外进行。
37.如权利要求1至36中任一项所述的外泌体，其中在人血清存在下，进行一个或多个细胞与该LNP的接触。
38.如权利要求37所述的外泌体，其中该人血清以按体积计约0.5％、约1％或约1.5％存在。
39.如权利要求37或权利要求38所述的外泌体，其中该人血清以按体积计约1％存在。
40.如权利要求1至39中任一项所述的外泌体，其中使一个或多个细胞与该LNP接触包括使该一个或多个细胞与至少2个、至少3个或至少4个不同剂量的该LNP接触。
41.如权利要求1至40中任一项所述的外泌体，其中使一个或多个细胞与该LNP接触包括使该一个或多个细胞与至少3个不同剂量的该LNP接触。
42.如权利要求1至41中任一项所述的外泌体，其中分离外泌体包括从体外细胞培养基的样品分离外泌体。
43.一种药物组合物，其包含至少一种如权利要求1至42中任一项所述的外泌体以及药学上可接受的载体。
44.一种将经修饰的RNA递送至细胞的方法，该方法包括使该细胞与有效量的如权利要求1至42中任一项所述的外...
【专利技术属性】
技术研发人员：海迪·瓦拉迪，L·林福斯，
申请(专利权)人：阿斯利康瑞典有限公司，海迪·瓦拉迪，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
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