用于鉴定处于AKI“风险”的受试者的生物标志物组合制造技术

本发明专利技术提供了一种用于确定受试者形成肾功能障碍(AKI)的素因的方法，以及用于进行这种确定的试剂盒。适当地，在该方法中使用存在于血液或尿液样品中的至少一种选自Midkine(MK)或H‑FABP的标志物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于鉴定处于AKI“风险”的受试者的生物标志物组合本专利技术涉及一种用于确定受试者形成肾功能障碍(renaldysfunction)的素因(predisposition)的方法，以及用于进行这种确定的试剂盒。急性肾损伤(AcuteKidneyInjury,AKI)是公认的利用心肺转流(cardiopulmonarybypass,CPB)的心脏手术(CS)的并发症，并且其特征是估计的肾小球滤过率(eGFR)的急剧下降。AKI-CS与住院时间、发病率和死亡率增加相关联。AKI-CS的鉴定和诊断是基于血清肌酐浓度的变化。然而，这是有问题的，因为血清肌酐的升高可能会在损伤后延迟24-72小时。对处于“风险(at-risk)”的患者的早期预测和鉴定将允许实施适当的术前、术中和术后肾保护策略。与晚期肾脏替代疗法(RenalReplacementTherapy，RRT)相比，早期RRT的好处与患者生存期延长和ICU住院时长缩短(RRT<术后3天)相关联。术前和术中肾脏保护策略，例如施用促红细胞生成素(erythropoietin)或最小化CPB的持续时间，可以提供给那些在手术前被鉴定有AKI风险的受试者。适当地在手术后24小时内，对那些有AKI风险的受试者进行手术后检测，将允许早期的术后干预，例如肾脏替代治疗。此外，遭受身体创伤(可以包括骨折)的受试者，经常发展为急性肾功能障碍(AKI)。其他引起类似的急性肾功能障碍的原因包括延长的低血压状态(例如与粘膜肠缺血和内毒素从肠转移到循环有关)，败血症和败血性休克综合征。进行强有力的身体创伤后测试，适当地在创伤后24小时内，可以允许对重症监护病房中被认为具有处于AKI“风险”的受试者采取预防措施。
技术实现思路
尽管已鉴定出几种标志物用于鉴定处于形成急性肾损伤(AKI)“风险”的受试者，但改进对此类受试者的检测将是有益的。专利技术人已经确定，在创伤前后，对存在于受试者中的生物标志物的特定组合的测量可以提供用于处于形成AKI“风险”的受试者的改进的检测。因此，本专利技术的第一方面提供了一种用于确定受试者形成AKI的素因的方法，该方法包括以下步骤：在手术，身体创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤之前，确定从受试者采集的血液或尿液样品中存在的至少一种选自Midkine(MK)或H-FABP的标志物的水平；其中，当该Midkine或H-FABP的水平高于来自对照的血液或尿液样品中的Midkine或H-FABP的正常水平时，表明该受试者在手术，身体创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤后具有高于正常的形成AKI的素因。一方面，本公开提供了诊断或辅助诊断受试者中AKI的方法，包括：分析来自所述受试者的生物样品以确定样品中AKI的一种或多种生物标志物的水平，其中从表2、3、4、5、6或7中选择一种或多种生物标志物，并将样品中一种或多种生物标志物的水平与该一种或多种生物标志物的AKI阳性和/或AKI阴性参照水平进行比较，以诊断受试者是否患有AKI。根据本专利技术的第二方面，提供了确定受试者形成AKI的素因的方法，该方法包括以下步骤：确定在手术，身体创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤后48小时内从受试者采集的血液或尿液样品中存在的至少一种选自Midkine(MK)或H-FABP的标志物的水平；其中，当该Midkine或H-FABP的水平高于来自对照的血液或尿液样品中的Midkine或H-FABP的正常水平时，表明该受试者在手术，身体创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤后具有高于正常的形成AKI的素因。如本文所用，标志物和生物标志物可互换使用。如将理解的，可以将来自被测试受试者的生物标志物的水平与来自患有AKI疾病状态的受试者的样品中的生物标志物的水平进行比较，并且当来自被测受试者的样品中生物标志物的水平与来自患有AKI疾病状态的受试者的样品中生物标志物的水平无差异时，表明被测试受试者患有AKI。备选地，如将理解的，可以将来自被测试受试者的生物标志物的水平与来自非AKI疾病状态的受试者的样品中的生物标志物的水平进行比较，并且当来自被测试受试者的样品中生物标志物的水平与来自非AKI疾病状态受试者的样品中生物标志物的水平无差异时，表明被测受试者没有患AKI。“生物标志物”是指与来自具有第二表型(例如没有疾病)的受试者或一组受试者的生物样品相比，在来自具有第一表型(例如患有疾病)的受试者或一组受试者的生物样品中差异存在(即增加或减少)的生物化合物。生物标志物可以以任何水平差异存在，但适当地以统计学上显著的水平差异存在(即，如使用韦尔奇T检验或Wilcoxon秩和检验确定的，p值小于0.05和/或q值小于0.10)。适当地，生物标志物可以以具有0.7或更大，适当地0.75或更大，适当地0.8或更大的AUC(在接收操作特征曲线的曲线下的面积)的水平存在。一种或多种生物标志物的“水平”是指样品中生物标志物的绝对或相对量或浓度。“样品”或“生物样品”是指从受试者分离的生物材料。生物样品可以含有适合于检测期望的生物标志物的任何生物材料，并且可以包含来自受试者的细胞和/或非细胞材料。可以从任何合适的生物流体中分离样品，比如，所述生物流体例如是血液，血浆，血清或尿液。生物标志物的“参照水平或正常水平”是指指示非AKI状态，表型或形成AKI疾病状态或表型的素因的生物标志物的水平。生物标志物的“水平”可以是生物标志物的绝对或相对量或浓度，生物标志物的存在或不存在，生物标志物的量或浓度的范围，生物标志物的最小和/或最大量或浓度，生物标志物的平均量或浓度和/或生物标志物的中值量或浓度；并且，此外，生物标志物组合的“参照水平”也可以是两种或更多种生物标志物相对于彼此的绝对或相对量或浓度的比率。可以通过测量一个或多个合适受试者中所需生物标志物的水平来确定用于AKI的生物标志物的适当正常参照水平，并且可以针对特定的受试者人群定制此类参照水平(例如，参照水平可以是年龄匹配或性别匹配的，以便可以使在来自特定年龄或性别的受试者的样品中的生物标志物水平与来自特定年龄或性别组中的AKI疾病状态，表型或缺乏AKI疾病状态的参照水平之间进行比较。当本专利技术的方法用于辅助诊断AKI时，该方法的结果可以与可用于临床确定受试者是否患有AKI的其他方法(或其结果)一起使用。为了确定样品中一种或多种生物标志物的水平，可以使用任何合适的方法来分析生物样品。合适的方法包括色谱法(例如HPLC，气相色谱法，液相色谱法)，质谱法(例如MS，MS-MS)，酶联免疫吸附测定(ELISA)，抗体连接，其他免疫化学技术及其组合。此外，可例如通过使用测量与所需待测生物标记水平相关的一种或多种化合物的水平的测定法来间接测量一种或多种生物标记的水平。将理解的是，可以使用任何合适的测定或装置，例如ELISA测定，BIOCHIP技术等来检测如本文讨论的标记。适当地本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种确定受试者形成AKI的素因的方法，所述方法包括以下步骤：/n确定在手术，身体创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤后48小时内，从所述受试者采集的血液或尿液样品中存在的至少一种选自Midkine(MK)或H-FABP的标志物的水平；/n其中当Midkine或H-FABP的水平高于来自对照的血液或尿液样品中的Midkine或H-FABP的正常水平时，表明所述受试者在手术，物理创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤后具有高于正常的形成AKI的素因。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180322 GB 1804648.21.一种确定受试者形成AKI的素因的方法，所述方法包括以下步骤：
确定在手术，身体创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤后48小时内，从所述受试者采集的血液或尿液样品中存在的至少一种选自Midkine(MK)或H-FABP的标志物的水平；
其中当Midkine或H-FABP的水平高于来自对照的血液或尿液样品中的Midkine或H-FABP的正常水平时，表明所述受试者在手术，物理创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤后具有高于正常的形成AKI的素因。


2.一种确定受试者形成AKI的素因的方法，所述方法包括以下步骤：
确定在手术，身体创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是在心脏手术或骨折创伤之前，从所述受试者采集的血液或尿液样品中存在的至少一种选自H-FABP或Midkine(MK)的标志物的水平；
其中当H-FABP或Midkine标志物水平高于来自对照的血液或尿液样品中的H-FABP或Midkine的正常水平时，表明所述受试者在手术，身体创伤，低血压，败血症和/或败血性休克综合征，尤其是心脏手术或骨折创伤后具有高于正常的形成AKI的素因。


3.权利要求1或2的方法，其中确定至少一种选自H-FABP或Midkine的标志物的水平的步骤是在来自所述受试者的血清上进行的。


4.前述权利要求中任一项的方法，其中所述确定步骤包括确定至少两种标志物的水平，其中第一标志物选自Midkine(MK)和H-FABP中的至少一种，并且至少第二标志物选自TNFRII和TNFRI中的至少一种，其中当检测到的TNFRII和/或TNFRI的水平分别高于对照中的TNFRII和/或TNFRI的正常水平时，表明该受试者在心脏手术或骨折创伤后具有高于正常的形成AKI的素因。


5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述确定步骤包括确定选自TNFRI，TNFRII和Midline的至少三种标志物的水平。


6.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述确定步骤包括确定选自TNFRI，TNFRII和H-FABP的至少三种标志物的水平。


7.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述确定步骤包括确定选自TNFRI，H-FABP和Midkine的至少三种标志物的水平。


8.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法进一步包括检测选自以下的至少一种标志物：IL-1a，IL-5，IL-6，IL-8，IL-10，IL-15，MIP1-alpha，VEGF，INF-γ，TNF-α，MCP，NGAL，IL12P40，IP10或IL1Ra。


9.权利要求8...

【专利技术属性】
技术研发人员：MJ库尔思，J拉蒙特，P菲茨杰拉德，M拉多克，W麦克布莱德，
申请(专利权)人：兰多克斯实验室有限公司，贝尔法斯特医疗及社会保障信托基金，
类型：发明
国别省市：英国;GB