一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条及应用和检测方法技术

本发明专利技术提供了一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条及应用和检测方法，涉及免疫荧光检测技术领域。本发明专利技术所述试纸条包括由左到右首尾相连且依次固定在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体；在硝酸纤维素膜(NC膜)上包被抗卵白蛋白抗体(T1线)、抗卵类黏蛋白抗体(T2线)、抗卵转铁蛋白抗体(T3线)、抗鸡蛋总抗体(T4线)和兔抗鼠IgG抗体(C线)，其中T1线、T2线、T3线、T4线为检测线，C线为质控线。本发明专利技术所述试纸条能够快速定量检测鸡蛋过敏原的种类和含量，并且操作简便、准确性高，回收率应在90％～110％、灵敏度高(≤0.84ng/ml)。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条及应用和检测方法
本专利技术属于免疫荧光检测
，具体涉及一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条及应用和检测方法。
技术介绍
随着食品行业的发展，过敏性疾病已成为全球性的问题。近年来，食用鸡蛋引起的过敏疾病发生率呈上升趋势。据国外流行病学统计，在食物过敏儿童中，约35％的儿童对鸡蛋过敏，其中1岁前的幼儿更为常见。目前国内外对鸡蛋食物过敏疾病尚没有有效的治疗方法，对鸡蛋抗原严重过敏的患者避免食入含有鸡蛋成分的食物是目前最有效的预防方法之一。近年来，美国及欧盟国家食品标签法中规定必须把鸡蛋作为主要过敏原成分加以标示，并开始对部分进口食品进行鸡蛋过敏原检测，而我国食品出口企业常因食品过敏原标注不正确而被美国FDA通报且遭遇退货。随着人们对食品安全的日益重视，我国也势必建立一套过敏原标识制度，这就需要有相应的检测方法为制度的落实提供保障。因此，开发鸡蛋的快速检测方法十分必要。蛋类过敏原在加工过程中稳定性强，有文献证实，蛋类过敏原分别经糖基化处理、6mol/L尿素处理、95℃加热处理后仍不能完全脱敏。进口鸡蛋过敏原酶联免疫试剂盒多将其作为食品中鸡蛋过敏原的检测目标。但进口试剂盒价格昂贵，因此，研制出快速、有效、低成本的过敏原检测试剂盒有重要意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条及应用和检测方法，可快速定性和定量检测食品中的鸡蛋过敏原成分，操作简便、准确度高、灵敏度高。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条，所述试纸条上包括由左到右首尾相连且依次固定在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体；所述混合抗体包括：抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；所述硝酸纤维素膜上包括平行的4条检测线和1条质控线；所述检测线上分别包被抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；所述质控线上包被兔抗鼠IgG抗体；所述检测线上的包被抗体与所述荧光胶乳微球标记的混合抗体为配对抗体。优选的，所述荧光胶乳微球的粒径为50～500nm。优选的，所述包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体的结合垫的制备方法，包括：a.将荧光标记的链霉亲和素和胶乳微球吸附结合，得到荧光胶乳微球；b.将生物素与所述混合抗体结合，得到生物素化混合抗体；c.将所述荧光胶乳微球和所述生物素化混合抗体混合，得荧光胶乳微球标记的混合抗体；d.将所述荧光胶乳微球标记的混合抗体喷涂在结合垫上；步骤a和b之间不具有时间上的先后关系。优选的，步骤a所述荧光标记包括异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或荧光素CY5。优选的，步骤d所述喷涂时，将所述荧光胶乳微球标记的混合抗体按照2～10μl/cm的用量喷涂在结合垫上。优选的，所述混合抗体中抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体的质量比为1：1：1：1。优选的，4条所述检测线上包被抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体的包被浓度均为0.5～5.0μl/cm；所述质控线上包被兔抗鼠IgG抗体的包被浓度为0.5～5μl/cm。本专利技术还提供了上述免疫荧光检测试纸条在检测食品中鸡蛋过敏原成分中的应用。优选的，所述花生过敏原成分包括卵白蛋白、卵类黏蛋白、卵转铁蛋白和总鸡蛋蛋白。本专利技术还提供了一种检测食品中鸡蛋过敏原成分的方法，包括以下步骤：滴加100～120μl的食品溶液于上述免疫荧光检测试纸条的样品垫上，15min后读取所述检测试纸条的荧光信号，根据标准曲线测定花生过敏原的成分和含量；所述标准曲线为R2＝0.9997；其中x为过敏原浓度，单位IU/ml，y为荧光信号比值。本专利技术提供了一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条，其结构如图1所示，包括由左到右首尾相连且依次固定在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体；所述混合抗体包括：抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；在硝酸纤维素膜(NC膜)上包被抗卵白蛋白抗体(T1线)、抗卵类黏蛋白抗体(T2线)、抗卵转铁蛋白抗体(T3线)、抗鸡蛋总抗体(T4线)和兔抗鼠IgG抗体(C线)，其中T1线、T2线、T3线、T4线为检测线，C线为质控线。本专利技术所述混合抗体和NC膜上包被的抗体分别配对，且混合抗体类似于二抗，NC膜上包被抗体类似于一抗。本专利技术所述试纸条能够快速定量检测鸡蛋过敏原的种类和含量，并且操作简便、准确性高，回收率应在90％～110％、灵敏度高(≤0.84ng/ml)。附图说明图1为本专利技术所述免疫荧光检测试纸条的结构图；图2为荧光免疫层析法测定标准曲线。具体实施方式本专利技术提供了一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条，其结构如图1所示，所述试纸条上包括由左到右首尾相连且依次固定在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体；所述混合抗体包括：抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；所述硝酸纤维素膜上包括平行的4条检测线和1条质控线；所述检测线上分别包被抗抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；所述质控线上包被兔抗鼠IgG抗体；所述检测线上的包被抗体与所述荧光胶乳微球标记的混合抗体为配对抗体。本专利技术所述结合垫上包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体，所述包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体的结合垫的制备方法，优选包括：a.将荧光标记的链霉亲和素和胶乳微球吸附结合，得到荧光胶乳微球；b.将生物素与所述混合抗体结合，得到生物素化混合抗体；c.将所述荧光胶乳微球和所述生物素化混合抗体混合，得荧光胶乳微球标记的混合抗体；d.将所述荧光胶乳微球标记的混合抗体喷涂在结合垫上；步骤a和b之间不具有时间上的先后关系。本专利技术步骤a中所述荧光标记的链霉亲和素和胶乳微球的质量比优选为1:40；步骤b中所述生物素和混合抗体的体积比优选为1:4；步骤c中荧光胶乳微球和生物素化混合抗体的体积比优选为10:1。本专利技术所述荧光胶乳微球的粒径优选为50～500nm。本专利技术步骤a所述荧光标记优选包括异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或荧光素CY5。本专利技术对所述混合抗体中抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体的质量比优选为1：1：1：1。本专利技术对所述抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体的来源并没有特殊限定，优选为本领域的常规市售抗体。本专利技术步骤d中所述结合垫上所述荧光胶乳微球标记的混合抗体的喷涂量优选为2～10μl/cm。在本专利技术中，所述荧光胶乳微球标记的混合抗体均为二抗。本专利技术所述硝酸纤维素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条，其特征在于，所述试纸条上包括由左到右首尾相连且依次固定在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体；所述混合抗体包括：抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；/n所述硝酸纤维素膜上包括平行的4条检测线和1条质控线；所述检测线上分别包被抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；所述质控线上包被兔抗鼠IgG抗体；/n所述检测线上的包被抗体与所述荧光胶乳微球标记的混合抗体为配对抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种鸡蛋免疫荧光检测试纸条，其特征在于，所述试纸条上包括由左到右首尾相连且依次固定在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体；所述混合抗体包括：抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；
所述硝酸纤维素膜上包括平行的4条检测线和1条质控线；所述检测线上分别包被抗卵白蛋白抗体、抗卵类黏蛋白抗体、抗卵转铁蛋白抗体和抗鸡蛋总抗体；所述质控线上包被兔抗鼠IgG抗体；
所述检测线上的包被抗体与所述荧光胶乳微球标记的混合抗体为配对抗体。


2.根据权利要求1所述免疫荧光检测试纸条，其特征在于，所述荧光胶乳微球的粒径为50～500nm。


3.根据权利要求1所述免疫荧光检测试纸条，其特征在于，所述包被有荧光胶乳微球标记的混合抗体的结合垫的制备方法，包括：a.将荧光标记的链霉亲和素和胶乳微球吸附结合，得到荧光胶乳微球；
b.将生物素与所述混合抗体结合，得到生物素化混合抗体；
c.将所述荧光胶乳微球和所述生物素化混合抗体混合，得荧光胶乳微球标记的混合抗体；
d.将所述荧光胶乳微球标记的混合抗体喷涂在结合垫上；
步骤a和b之间不具有时间上的先后关系。


4.根据权利要求3所述免疫荧光检测试纸条，其特征在于，步骤a所述荧光标记包括异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯莹，武涌，李欣，孟轩夷，佟平，袁娟丽，
申请(专利权)人：杭州福德敏生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33