氯胺酮和其代谢物的半抗原、免疫原、抗体和偶联物制造技术

在去甲氯胺酮的Ｎ位置用交联剂衍生的半抗原。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于制备免疫原、抗体和偶联物的半抗原，用于竞争性免疫测试中检测氯胺酮和它的初级代谢物，去甲氯胺酮(norketamine)。本专利技术也涉及检测或测定氯胺酮和去甲氯胺酮的方法和试剂盒。“检测”是指定性分析物质的有无。“测定”是指定量分析物质的数量。氯胺酮(参见附图-1)是已经在临床上使用了30年的短效肠胃外麻醉剂。该药物在亚麻醉剂量时就引起深度镇痛，没有大多数其他常规麻醉剂相关的心脏呼吸受抑作用。尽管存在这些重要的临床优点，但是，烦扰的应急反应，包括神志不清和恶梦经常伴随氯胺酮的治疗，限制它的临床应用。虽然这些中枢神经系统(CNS)副作用的起源仍不清楚，已经有人推测，氯胺酮的代谢物可能在其中发挥重要作用，因为在氯胺酮诱导麻醉紧急情况中，母体药物的循环浓度非常低。氯胺酮通过肝酶进行了广泛的代谢，通过N去甲基化，主要产生了去甲氯胺酮(参见附图-1)。该一级胺进一步在环己酮环系统的4，5和/或6位产生羟基化的去甲氯胺酮家族而发生代谢，其中主要成份是6-羟基去甲氯胺酮(参见附图-1)。现有技术目前，生物液体中氯胺酮和代谢物的测定主要是基于气相色谱质谱(GC-MS)和HPLC。这些色谱方法提供了良好的敏感度和选择性，但需要衍生氯胺酮和它的代谢物。另外，这些方法作为筛选工具，太昂贵且耗时。特定的结合反应，如抗体-抗原反应已经广泛用于检测生物液体中存在的各种物质的免疫测试中。所以，例如，可以用放射免疫测定来测定氯胺酮和它的代谢物。放射免疫测定非常敏感，但需要放射核素示踪物，例如125I和3H，在某些情况中，还需要一个初级萃取步骤。对于氯胺酮，没有已知的RIA。酶联免疫吸附测试(ELISA)是非放射性活性的或选方法，可以用于定性和定量地测定氯胺酮和它的代谢物。另外，当2002年1月31日提交构成优选权的欧洲专利申请02075445.3时，还没有已知检测氯胺酮的ELISA。从那时开始，Neogen公司研制了针对氯胺酮的ELISA试剂盒，其与氯胺酮有100％的交叉反应性，与去甲氯胺酮有4.6％的交反应性。可以相信，Neogen试剂盒应用了针对掺入至少氯胺酮甲氨基表位的氯胺酮半抗原研制的抗体和偶联物。EP 0459 387 A2(Abbott实验室)描述了对苯环利定和一些苯环利定衍生物的荧光极化测试。将苯环己胺衍生物与载体物质偶联以产生免疫原，与荧光素衍生物偶联产生示踪物。抗体，优选单克隆抗体是免疫原产生的。利用了前面提到的抗体和示踪物研制了苯环利定和苯环利定衍生物的免疫测定方法。所述免疫测定方法对苯环利定、苯环利定代谢物和苯环利定类似物具有高度的特异性。它与氯胺酮没有明显的交叉反应(参见第8页表3(c))。虽然苯环己胺衍生物与本专利技术的半抗原具有结构相似性，但Abbott免疫测试中缺乏与氯胺酮的交叉反应性证实，在苯环上缺少氯和在环己基环上缺少羰基都是显著的。Owens等(′Antibodies against arylcyclohexylamines and their similarities inbinding specificity with the phencyclidine receptor′(J.Pharmacol.Exp.Ther.(1988)，246(2)，472-478))描述了针对苯环利定(PCP)类似分子5个表位的抗体，以确定与PCP受体结合的芳基环己胺的分子需求。从PCP衍生物和TCP类似物合成4个半抗原，即PCHP；PCHBA；tPPC和TCHP。从苯环己胺制成第5个半抗原PCHAP。这些半抗原与BSA结合产生用于制备抗体的免疫原。所产生的抗体对于PCP和一些相关化合物是高度特异的，但与氯胺酮具有非常低的交叉反应性(＜0.6％)(表2，第475页)。半抗原PCHAP与本专利技术的半抗原不同之处在于苯环上没有氯，环己环上没有羰基。与氯胺酮没有交叉反应性再次证实这两个部分的缺失是显著的。Owens等人(′Melecular requirements for an immunological model of thephencyclidine receptor′，生物学中作为分子探针的Sigma和PCP类似化合物，1988)描述了针对PCP和其他芳基环己胺的半抗原、免疫原和抗体的制备(表1，第667页)。制备了4个半抗原PCHP；tPPC；PCHBA和PCHAP(参见附图说明图1，第665页)。产生的抗体显示对PCP和相关化合物的高水平交叉反应性，但对氯胺酮的低水平交叉反应性，如高IC50值所示(表1，第667页)。氯胺酮的交叉反应性，又一次证实缺少氯和羰基是有意义的。Leung等(′Comparative pharmacology in the rat of ketanine and its twoprincipal metabolites，norketamine and(z)-6-hydronorketamine，J Med Chem(1986)，29(11)，2396-2399)描述了从氯胺酮的初级代谢物，去甲氯胺酮合成(z)-6-羟基去甲氯胺酮(一种氯胺酮的次级代谢物)。他们也进行了氯胺酮、去甲氯胺酮和(z)-6-羟基去甲氯胺酮在大鼠上比较药理学研究。Leung等人既没有公开也没有建议怎样制备针对氯胺酮或去甲氯胺酮的半抗原、免疫原和抗体。专利技术详述在第一方面，本专利技术提供了在去甲氯胺酮的N位置用交联剂派生半抗原。优选地半抗原具有下面的结构式 其中R是二价键，X是末端基团。最优选地，R包括取代的或未取代的、直链的或支链的、饱和的或未饱和的亚烷基成分；和X包括羧酸或其酯；一种胺、马来酰亚胺、卤代羧酸或其酯、醛、二硫吡啶成分、乙烯砜成分或硫代羧酸或其酯。所以，在优选的实施方案的通式中，交联剂包括-R-X。在本专利技术最广泛的方面中，交联剂也可以包括-R-X。更优选地，R是C1-5，最优选地C3，取代或未取代，直链，饱和的亚烷基成分。最优选地，如果存在取代基时，取代基是羰基基团。优选地，X选自羧酸，硫代羧酸，二硫吡啶，马来酰亚胺，或醛成分。最优选地，X是羧基(COOH)或硫代乙酰基(SCOCH3)成分。最优选地，半抗原选自下面去甲氯胺酮半抗原衍生物N-(4′-羧丙基)去甲氯胺酮(半抗原A)；N-(3′-乙酰基硫代丙基)去甲氯胺酮(半抗原B)；和N-(3′-乙酰基硫代丙酰氨基)去甲氯胺酮(半抗原C)。这些新型半抗原是通过利用适当的交联剂对去甲氯胺酮进行N-衍生化，优选N烷基化制备。得到的半抗原进一步在这些功能化位置进行修饰，以便与修饰或未修饰的载体物质结合提供生产抗体的免疫原，和具有良好的敏感性和特异性的结合物(示踪物)，以检测或测定氯胺酮和去甲氯胺酮。本专利技术公开了去甲氯胺酮的第一半抗原衍生物的制备。通过将它们与修饰或未修饰的产生抗原性的载体物质结合，来制备免疫原。然后，对哺乳动物寄主注射得到的免疫原，引发特异抗体的产生，优选多克隆抗体，然后用来研发氯胺酮和去甲氯胺酮的竞争性免疫测定，利用与标记试剂结合的半抗原作为检测试剂。本专利技术也提供了包括本专利技术的半抗原与产生抗原性的载体物质结合的免疫原。优选载体物质是蛋白质、蛋白质片段、合成多肽或半合成多肽。另一方面本专利技术涉及抗本专利技术免疫原的抗体，抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特·I·麦康奈尔，埃尔·O·本奇克，斯蒂芬·P·菲茨杰拉德，约翰·V·拉蒙特，
申请(专利权)人：兰多克斯实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：