肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法及其在免疫治疗中的用途技术

本发明专利技术提供了改进的和/或缩短的扩增TIL和生产治疗性TIL群的方法，包括在封闭系统中扩增TIL群的新方法，所述方法导致在更短的时间内提高TIL的疗效、改善表型和增强代谢健康，同时减少微生物污染并降低成本。此TIL群可用于治疗性治疗方案中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法及其在免疫治疗中的用途相关申请本申请要求于2018年3月29日提交的美国专利申请15/940,901的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
使用过继性转移的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL，tumorinfiltratinglymphocyte)治疗大体积、难治性的癌症代表了一种治疗预后不良患者的有效方法。Gattinoni等，Nat.Rev.Immunol.，2006，6，383-393。成功的免疫治疗需要大量的TIL，商业化需要稳健可靠的方法。由于细胞扩增的技术、物流和监管问题，这是一项需要实现的挑战。由于其速度和效率，基于IL-2的TIL扩增随后进行“快速扩增过程”(REP，rapidexpansionprocess)已成为TIL扩增的优选方法。Dudley等，Science，2002，298，850-54；Dudley等，J.Clin.Oncol.，2005，23，2346-57；Dudley等，J.Clin.Oncol.，2008，26，5233-39；Riddell等，Science1992，257，238-41；Dudley等，J.Immunother.，2003，26，332-42。REP可以在14天内使TIL扩增1000倍，尽管它需要通常来自多个供体的、大量过量(例如200倍)的经辐照的同种异体外周血单核细胞((PBMC，peripheralbloodmononuclearcell)，也称为单核细胞(MNC))作为饲养细胞(饲养细胞)，以及抗CD3抗体(OKT3)和高剂量的IL-2。Dudley等J.Immunother.2003,26,332-42。经历REP程序的TIL在黑色素瘤患者的宿主免疫抑制后产生了成功的过继性细胞治疗。目前的输注接受参数(infusionacceptance参数)依赖于TIL组成的读数(例如CD28、CD8或CD4阳性)以及REP产物的倍数扩增和活力。目前的TIL生产方法受到时长、成本、无菌问题以及本文所述的其他因素的限制，使得此类方法商业化的潜力受到严重限制，并且由于这些和其他原因，目前尚无商业方法可用。迫切需要提供TIL生产方法和基于此种方法的治疗，其适用于商业规模生产，并获得在多个临床中心用于人类患者的监管批准。
技术实现思路
本专利技术提供了改进的和/或缩短的扩增TIL和产生治疗性TIL群的方法。本专利技术提供了将肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)扩增为治疗性TIL群的方法，该方法包括以下步骤：(a)通过将从患者获得的肿瘤样品处理成多个肿瘤碎片，从患者切除的肿瘤中获得第一TIL群；(b)将肿瘤碎片加入封闭系统中；(c)通过在包含IL-2和可选的OKT-3的细胞培养基中培养第一TIL群来进行第一次扩增，产生第二TIL群；其中，第一次扩增在提供第一透气表面积的封闭容器中进行；其中，第一次扩增进行约3天至14天，获得第二TIL群；其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少50倍；其中，从步骤(b)到步骤(c)的转变在不打开系统的情况下发生；(d)通过向第二TIL群的细胞培养基中补充另外的IL-2、可选的OKT-3和抗原呈递细胞(APC)进行第二次扩增，产生第三TIL群；其中，第二次扩增进行约7天至14天，获得第三TIL群；其中，第三TIL群是治疗性TIL群；其中，第二次扩增在提供第二透气表面积的封闭容器中进行；其中，从步骤(c)到步骤(d)的转变在不打开系统的情况下发生；(e)收获从步骤(d)获得的治疗性TIL群；其中，从步骤(d)到步骤(e)的转变在不打开系统的情况下发生；以及(f)将从步骤(e)收获的TIL群转移至输液袋；其中，从步骤(e)到步骤(f)的转变在不打开系统的情况下发生。在一些实施方式中，该方法还包括以下步骤：使用冷冻保存方法冷冻保存来自步骤(f)的包含收获的TIL群的输液袋。在一些实施方式中，冷冻保存方法使用1：1比率的收获的TIL群与冷冻保存培养基进行。在一些实施方式中，抗原呈递细胞是外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方式中，PBMC是经辐照且同种异体的。在一些实施方式中，在步骤(d)的第9天至14天中的任何一天将PBMC添加到细胞培养基中。在一些实施方式中，抗原呈递细胞是人工抗原呈递细胞。在一些实施方式中，步骤(e)中的收获使用基于膜的细胞处理系统进行。在一些实施方式中，步骤(e)中的收获使用LOVO细胞处理系统进行。在一些实施方式中，多个碎片包括约4个至约50个碎片；其中，每个碎片的体积为约27mm3。在一些实施方式中，多个碎片包括约30个至约60个碎片，碎片总体积为约1300mm3至约1500mm3。在一些实施方式中，多个碎片包括约50个碎片，碎片总体积为约1350mm3。在一些实施方式中，多个碎片包括约50个碎片，碎片总质量为约1克至约1.5克。在一些实施方式中，在选自G容器和Xuri细胞袋的容器中提供细胞培养基。在一些实施方式中，步骤(d)中的细胞培养基还包含IL-15和/或IL-21。在一些实施方式中，IL-2浓度为约10,000IU/mL至约5,000IU/mL。在一些实施方式中，IL-15浓度为约500IU/mL至约100IU/mL。在一些实施方式中，IL-21浓度为约20IU/mL至约0.5IU/mL。在一些实施方式中，步骤(f)中的输液袋是含有HypoThermosol的输液袋。在一些实施方式中，冷冻保存培养基包含二甲基亚砜(DMSO)。在一些实施方式中，冷冻保存培养基包含7％至10％的二甲基亚砜(DMSO)。在一些实施方式中，步骤(c)中的第一阶段和步骤(e)中的第二阶段各自在10天、11天或12天内进行。在一些实施方式中，步骤(c)中的第一阶段和步骤(e)中的第二阶段各自在11天内进行。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行约10天至约22天。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行约20天至约22天。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行约15天至约20天。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行约10天至约20天。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行约10天至约15天。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行22天以下。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行20天以下。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行15天以下。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)进行10天以下。在一些实施方式中，步骤(a)至步骤(f)和冷冻保存进行22天以下。在一些实施方式中，在步骤(e)中收获的治疗性TIL群包含足以达到TIL的治疗有效剂量的TIL。在一些实施方式中，足以达到治疗有效剂量的TIL的数量为约2.3×1010至约13.7×1010。在一些实施方式中，步骤(b)至步骤(e)在单个容器中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.将肿瘤浸润淋巴细胞TIL扩增为治疗性TIL群的方法，其中，所述方法包括以下步骤：/n(a)将经处理的肿瘤碎片加入至封闭系统中，获得第一TIL群，所述肿瘤碎片来自从患者切除的肿瘤；/n(b)通过在包含IL-2和可选的OKT-3的细胞培养基中培养第一TIL群来进行第一次扩增，产生第二TIL群；第一次扩增在提供第一透气表面积的封闭容器中进行；第一次扩增进行约3天至14天，获得第二TIL群；第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少50倍；从步骤(a)到步骤(b)的转变在不打开系统的情况下发生；/n(c)通过向第二TIL群的细胞培养基中补充另外的IL-2、可选的OKT-3和抗原呈递细胞APC来进行第二次扩增，产生第三TIL群；第二次扩增进行约7天至14天，获得第三TIL群；第三TIL群是治疗性TIL群；第二次扩增在提供第二透气表面积的封闭容器中进行；从步骤(b)到步骤(c)的转变在不打开系统的情况下发生；/n(d)收获从步骤(c)获得的治疗性TIL群；从步骤(c)到步骤(d)的转变在不打开系统的情况下发生；以及/n(e)将从步骤(d)收获的TIL群转移至输液袋；从步骤(d)到(e)的转变在不打开系统的情况下发生。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180329 US 15/940,9011.将肿瘤浸润淋巴细胞TIL扩增为治疗性TIL群的方法，其中，所述方法包括以下步骤：
(a)将经处理的肿瘤碎片加入至封闭系统中，获得第一TIL群，所述肿瘤碎片来自从患者切除的肿瘤；
(b)通过在包含IL-2和可选的OKT-3的细胞培养基中培养第一TIL群来进行第一次扩增，产生第二TIL群；第一次扩增在提供第一透气表面积的封闭容器中进行；第一次扩增进行约3天至14天，获得第二TIL群；第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少50倍；从步骤(a)到步骤(b)的转变在不打开系统的情况下发生；
(c)通过向第二TIL群的细胞培养基中补充另外的IL-2、可选的OKT-3和抗原呈递细胞APC来进行第二次扩增，产生第三TIL群；第二次扩增进行约7天至14天，获得第三TIL群；第三TIL群是治疗性TIL群；第二次扩增在提供第二透气表面积的封闭容器中进行；从步骤(b)到步骤(c)的转变在不打开系统的情况下发生；
(d)收获从步骤(c)获得的治疗性TIL群；从步骤(c)到步骤(d)的转变在不打开系统的情况下发生；以及
(e)将从步骤(d)收获的TIL群转移至输液袋；从步骤(d)到(e)的转变在不打开系统的情况下发生。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(d)中收获的治疗性TIL群包含足以达到TIL的治疗有效剂量的TIL。


3.根据权利要求2所述的方法，其中，足以达到治疗有效剂量的TIL的数量为约2.3×1010至约13.7×1010。


4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述方法还包括以下步骤：使用冷冻保存方法冷冻保存包含收获的TIL群的输液袋。


5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述冷冻保存方法使用1：1比率的收获的TIL群与冷冻保存培养基进行。


6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述抗原呈递细胞是外周血单核细胞PBMC。


7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述PBMC是经辐照且同种异体的。


8.根据权利要求7所述的方法，其中，在步骤(c)的第9天至14天中的任何一天将PBMC添加到细胞培养基中。


9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗原呈递细胞是人工抗原呈递细胞。


10.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(d)中的收获使用LOVO细胞处理系统进行。


11.根据权利要求1所述的方法，其中，多个碎片包括约4个至约50个碎片，每个碎片的体积为约27mm3。


12.根据权利要求1所述的方法，其中，多个碎片包括约30个至约60个碎片，碎片总体积为约1300mm3至约1500mm3。


13.根据权利要求2所述的方法，其中，多个碎片包括约50个碎片，碎片总体积为约1350mm3。


14.根据权利要求1所述的方法，其中，多个碎片包括约50个碎片，碎片总质量为约1克至约1.5克。


15.根据权利要求1所述的方法，其中，多个碎片包括约4个碎片。


16.根据权利要求1所述的方法，其中，在选自G-容器和Xuri细胞袋的容器中提供第二细胞培养基。


17.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(e)中的输液袋是含有HypoThermosol的输液袋。


18.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(b)中的第一阶段和步骤(c)中的第二阶段各自在10天、11天或12天内进行。


19.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(b)中的第一阶段和步骤(c)中的第二阶段各自在11天内进行。


20.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)至步骤(e)进行约10天至约22天。


21.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)至步骤(e)进行约10天至约20天。


22.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)至步骤(e)进行约10天至约15天。


23.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)至步骤(e)进行22天以下。


24.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(a)至步骤(e)和冷冻保存进行22天以下。


25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中，步骤(b)至步骤(e)在单个容器中进行；与在超过一个的容器中进行步骤(b)至步骤(e)相比，在单个容器中进行步骤(b)至步骤(e)使得每个切除的肿瘤的TIL产量增加。


26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中，在步骤(c)的第二阶段期间，在不打开系统的情况下将抗原呈递细胞添加到TIL中。


27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中，步骤(d)中的第三TIL群是治疗性TIL群，相对于第二TIL群，所述治疗性TIL群包含增加的效应T细胞和/或中枢记忆T细胞的亚群；相对于获自第二细胞群的效应T细胞和/或中枢记忆T细胞，获自所述治疗性TIL群的效应T细胞和/或中枢记忆T细胞表现出选自下组的一种以上特征：CD27+表达、CD28+表达、端粒更长、CD57表达增加和CD56表达降低。


28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中，相对于获自第二细胞群的效应T细胞和/或中枢记忆T细胞，获自治疗性TIL群的效应T细胞和/或中枢记忆T细胞表现出：CD57表达增加和CD56表达降低。


29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中，与开放系统相比，所述方法降低了微生物污染的风险。


30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中，将来自步骤(e)的TIL注入患者体内。


31.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述封闭容器包括单个生物反应器。


32.根据权利要求31所述的方法，其中，所述封闭容器包括G-REX-10。


33....

【专利技术属性】
技术研发人员：S·沃德尔，J·本德，
申请(专利权)人：艾欧凡斯生物治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US