转氨酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种转氨酶突变体及其应用。该转氨酶突变体由SEQ ID NO:2发生一种或多种氨基酸突变得到或者为以野生型CvTA转氨酶的序列SEQ ID为NO：1作为参照，第54‑63位及第84‑96位的保守氨基酸发生突变的突变体。此类突变体的催化活性相比野生型转氨酶均有不同程度的提升，因而利用这些突变体进行手性胺类化合物的合成，尤其是大位阻手性胺的合成，有利于提高生产效率，降低工业生产成本。且采用生物酶进行绿色化学合成，有利于减少工业三废。

【技术实现步骤摘要】
转氨酶突变体及其应用
本专利技术涉及生物酶应用领域，具体而言，涉及一种转氨酶突变体及其应用。
技术介绍
大位阻手性胺化合物（本申请中指潜在手性羰基旁边的基团比甲基大的一类化合物）是一类光学活性物质和功能性分子，是药物和配体合成中广泛应用的重要的手性中间体。然而，目前合成此类手性化合物的相关报道较少，而且无法取得令人满意的结果。例如，羰基一边有大位阻苯基叔丁基氨基酯的选择性为76%（Angew.Chem.Int.Ed.2007,46,4367）。目前对于小位阻（本申请中指潜在手性羰基旁边的基团为H或甲基的一类化合物）的不对称加氢反应，一些金属催化剂，比如，钌，铑，钯等均有报道取得较好的立体选择性，但是随着羰基临近位阻的变大，催化效果变得较差。不对称加氢是一类对于生产精细化学品以及药物前体的技术，不过这一技术有一些缺点，比如需要使用高压氢气，对生产的安全性造成很大挑战，需要昂贵的过渡金属催化剂，这些有毒的催化剂还需要在后处理过程中小心对待并除去。而且这个过程中需要花费大量的人力物力筛选对应的配体。很多时候这个过程还存在立体选择性不高的问题（本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体：（1）由SEQ ID NO: 2发生氨基酸突变得到，所述氨基酸突变选自如下任意一种：/n

【技术特征摘要】
1.一种转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体：（1）由SEQIDNO:2发生氨基酸突变得到，所述氨基酸突变选自如下任意一种：
















；
或者
（2）由野生型转氨酶的保守氨基酸突变得到，以野生型CvTA转氨酶的序列为SEQIDNO：1作为参照，所述保守氨基酸发生如下任一种组合突变：（a）L59A+F88A；（b）L59A+F88A+F89D；（c）L59A+F88A+F89D+N86H；（d）L59A+F88A+F89D+N86H+Y85M，所述野生型转氨酶来源于下表所示的酶编号为1至54中的任意一种：




。


2.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子编码权利要求1所述的转氨酶突变体。


3.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒连接有权利要求2所述的DNA分子。


4.一种手性胺化合物的合成方法，采用权利要求1或所述的转氨酶突变体在氨基供体的作用下对式I所示酮类底物进行转氨基反应，得到所述手性胺化合物；

式I，
Ar1表示取代或未取代的芳基或亚芳基，或者取代或未取代的杂亚芳基；
Ar2表示取代或未取代的芳基，或者环烷基；以及
可选的R，R表示C原子数为1~5的取代或未取代的亚烷基，所述R与所述Ar1或Ar2连接成环；
其中，所述取代的芳基或亚芳基、所述取代的杂亚芳基或所述取代的亚烷基的...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪浩，詹姆斯·盖吉，肖毅，张娜，焦学成，马玉磊，牟慧艳，王祖建，孙凯华，李响，赵桐，曹珊，
申请(专利权)人：凯莱英医药集团天津股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12