金银花-青蒿-栀子提取物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及金银花

【技术实现步骤摘要】
金银花-青蒿-栀子提取物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及金银花-青蒿-栀子提取物及其制备方法与其在制备抗A6型柯萨奇病毒药物中的应用。

技术介绍

[0002]2008年以来，A6型柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CV-A6)开始在全世界范围内流行，从欧洲逐渐传播到了亚洲，CV-A6感染致手足口病发病率呈上升趋势。2008年，CV-A6阳性手足口病首次暴发于芬兰，2009年中国台湾、2010年西班牙、2011年日本、2013年我国广东深圳、2014年法国等地相继暴发了CV-A6感染所致手足口病疫情。2013年以来，CV-A6成为手足口病暴发流行的主要病原之一。国内CV-A6感染致手足口病发病率呈上升趋势，CV-A6感染手足口病患者构成比由2009年的8.2﹪上升到2012年的27.4﹪。2013—2017年我国大陆地区手足口病疫情的监测数据表明，CV-A6已成为大部分地区的主要流行株，部分地区超越了EV71和CV-A16，成为引起手足口病的首位病原体，如2013年浙江省检测样本中CV-A6阳性率为51.3％。
[0003]CV-A6感染发病的平均年龄为(2.91
±
2.12)岁，除了感染儿童，也可以感染免疫功能正常的成年人。CV-A6引起的临床症状由早年的疱疹性咽峡炎向皮疹分布广泛及伴随脱甲转变。PuenpaJ等对VP1基因的分析表明，CV-A6基因组的重组提高了序列间的遗传差异。贝叶斯系统发育分析表明，目前的重组分组(RF-E，-F，
--
H，-J和-K)均可溯源到一个共同的祖先(RF-A)。39个不同RFs的全长基因均在2A-2C和5
’
UTR之间发生重组。Gaunt等的研究表明，截至2014年CV-A6出现了8种重组形式，重组发生在2A-2C区、VP3内部、非编码区和VP1区，且非结构区的重组可能是CV-A6导致临床症状改变的潜在原因。Bian等根据基因组序列的不同，将CV-A6划分为A～E五个分支，E基因型又分为E1和E2亚簇。目前，世界上主流行的CV-A6为E2亚簇。董兆鹏通过ML法建立系统发育树，分析发现从1992年至今山东省CV-A6的流行亚型发生了明显的更替，更替模式为：1992年B亚型
→
1996年C亚型
→
2010年D亚型
→
至今E2亚型，CV-A6的流行实现了由非优势株向优势株的转变。E2亚簇CVA6感染往往导致严重的呼吸系统和神经系统疾病，如疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎、脑干脑炎和急性弛缓性麻痹等。
[0004]但是，CV-A6的相关研究目前较少，亟需抗CV-A6药物的研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供金银花-青蒿-栀子提取物的制备方法，通过该方法制备的金银花-青蒿-栀子提取物，具有良好的抗CV-A6功效。
[0006]本专利技术是通过如下技术方案实现的：
[0007]一种金银花-青蒿-栀子提取物,由如下重量份的药物原料药提取而来：金银花3-15份，青蒿6-25份，栀子1-3份。
[0008]优选的，上述的金银花-青蒿-栀子提取物,由如下重量份的药物原料药提取而来：
金银花3-15份，青蒿6-25份，栀子1-2.99份。
[0009]更优选的，上述的金银花-青蒿-栀子提取物,由如下重量份的药物原料药提取而来：金银花3份，青蒿15份，栀子2份。
[0010]上述的金银花-青蒿-栀子提取物的制备方法,包括如下步骤:
[0011]将金银花、青蒿、栀子粉碎，过60目筛，按照重量配比称取金银花、青蒿、栀子粗粉，加入8倍量75﹪乙醇浸泡2h，室温超声提取20min，提取2次；抽滤，合并滤液；提取液40℃减压回收乙醇，搅拌过夜，得到粗提液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；
[0012]粗提液中加入体积比1:1的石油醚，轻微搅拌、振摇，静置分层，将残留物放入真空干燥箱低压干燥至恒重，得到石油醚部位；
[0013]石油醚萃取后的粗提液中加入体积比1:1的乙酸乙酯，轻微搅拌、振摇，静置分层，下层水相减压浓缩除乙酸乙酯，另置，收集乙酸乙酯层，40℃减压浓缩回收乙酸乙酯，浓缩液冷冻干燥，得到乙酸乙酯部位；
[0014]取水和正丁醇(105:500)置于分液漏斗中，振摇，静置分层，上层为水饱和正丁醇溶液；乙酸乙酯萃取后的粗提液中加入体积比1:1的水饱和正丁醇，轻微搅拌、振摇，静置分层，下层水相另置，收集正丁醇层，50℃减压浓缩除正丁醇，浓缩液冷冻干燥，得到正丁醇部位。优选的，上述的金银花-青蒿-栀子提取物的制备方法,包括如下步骤:
[0015]取石油醚部位硅胶湿法装柱，干法上样，上样后加脱脂棉覆盖；以石油醚-乙酸乙酯(10:0-7:3，v/v)梯度洗脱，每个梯度的洗脱体积为柱体积的2倍，流速25mL/min，每份按500mL收集；用TLC法对洗脱液进行检识，点样于薄层层析硅胶G板，展开剂为石油醚-乙酸乙酯，显色剂为5﹪香草醛硫酸；喷显色剂后吹风机加热，观察斑点，合并相同流分，得A-K共计11组流分，取H和J流分，即得。
[0016]或者，优选的，上述的金银花-青蒿-栀子提取物的制备方法,包括如下步骤:
[0017]取乙酸乙酯部位硅胶湿法装柱，干法上样，上样后加脱脂棉覆盖；以二氯甲烷-甲醇系统(10:0-7:3，v/v)梯度洗脱，每个梯度的洗脱体积为柱体积的2倍，流速20mL
·
min-1
，按每份500mL收集；用TLC法对洗脱液进行检识，点样于薄层层析硅胶G板，展开剂二氯甲烷-甲醇，显色剂为5﹪香草醛硫酸乙醇和2﹪三氯化铁乙醇溶液，喷显色剂后吹风机吹干，紫外灯(365nm)下观察；合并相同流分，得到A-I共计9组流分，取E流分，即得。
[0018]或者，优选的，上述的金银花-青蒿-栀子提取物的制备方法,包括如下步骤:
[0019]称取D-101大孔吸附树脂，用95﹪的乙醇浸泡24h，上柱，用95﹪乙醇洗至洗脱液与水(1:5)混合不产生浑浊，再用水洗至无醇味，备用；正丁醇部位干浸膏加水超声分散上样，上样浓度0.7g/mL；次用水、30﹪、60﹪、95﹪乙醇溶液洗脱，流速10mL/min；收集洗脱液，用TLC法对洗脱液进行检识，点样于薄层层析硅胶G板，展开剂为氯仿-甲醇-水＝65:35:10下层，显色剂为10﹪硫酸乙醇；取30﹪乙醇和60﹪乙醇洗脱产物，即得。
[0020]上述的制备方法制备得到的金银花-青蒿-栀子提取物石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位在制备抗CV-A6药物中的应用。
[0021]上述的制备方法制备得到的金银花-青蒿-栀子提取物石油醚部位H和J流分在制备抗CV-A6药物中的应用。
[0022]上述的制备方法制备得到的金银花-青蒿-栀子提取物乙酸乙酯部位E流分在制备抗CV-A6药物中的应用。
[0023]上述的制备方法制备得到的金银花-青蒿-栀子提取物正丁醇部位30本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金银花-青蒿-栀子提取物,其特征在于，由如下重量份的药物原料药提取而来：金银花3-15份，青蒿6-25份，栀子1-3份。2.根据权利要求1所述的金银花-青蒿-栀子提取物,其特征在于，由如下重量份的药物原料药提取而来：金银花3份，青蒿15份，栀子2份。3.权利要求1或2所述的金银花-青蒿-栀子提取物的制备方法,包括如下步骤:将金银花、青蒿、栀子粉碎，过60目筛，按照重量配比称取金银花、青蒿、栀子粗粉，加入8倍量75﹪乙醇浸泡2h，室温超声提取20min，提取2次；抽滤，合并滤液；提取液40℃减压回收乙醇，搅拌过夜，得到粗提液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；粗提液中加入体积比1:1的石油醚，轻微搅拌、振摇，静置分层，将残留物放入真空干燥箱低压干燥至恒重，得到石油醚部位；石油醚萃取后的粗提液中加入体积比1:1的乙酸乙酯，轻微搅拌、振摇，静置分层，下层水相减压浓缩除乙酸乙酯，另置，收集乙酸乙酯层，40℃减压浓缩回收乙酸乙酯，浓缩液冷冻干燥，得到乙酸乙酯部位；取水和正丁醇(105:500)置于分液漏斗中，振摇，静置分层，上层为水饱和正丁醇溶液；乙酸乙酯萃取后的粗提液中加入体积比1:1的水饱和正丁醇，轻微搅拌、振摇，静置分层，下层水相另置，收集正丁醇层，50℃减压浓缩除正丁醇，浓缩液冷冻干燥，得到正丁醇部位。4.根据权利要求3所述的金银花-青蒿-栀子提取物的制备方法,其特征在于，包括如下步骤:取石油醚部位硅胶湿法装柱，干法上样，上样后加脱脂棉覆盖；以石油醚-乙酸乙酯(10:0-7:3，v/v)梯度洗脱，每个梯度的洗脱体积为柱体积的2倍，流速25mL/min，每份按500mL收集；用TLC法对洗脱液进行检识，点样于薄层层析硅胶G板，展开剂为石油醚-乙酸乙酯，显色剂为5﹪香草醛硫酸；喷显色剂后吹风机加热，观察斑点，合并相同流分，得A-K共计11组流...

【专利技术属性】
技术研发人员：李菲，田景振，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：