用于质谱分析的试剂制造技术

本发明专利技术涉及适用于质谱分析的试剂以及使用所述试剂对分析物分子进行质谱分析测定的方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于质谱分析的试剂


[0001]本专利技术涉及适用于质谱分析的试剂以及使用所述试剂对分析物分子进行质谱分析测定的方法。

技术介绍

[0002]质谱分析(MS)是一种广泛使用的技术，用于对从小分子到大分子范围内的化学物质进行定性和定量分析。通常，它是非常灵敏且特异性的方法，甚至允许对复杂的生物样品(例如环境样品或临床样品)进行分析。然而，对于若干种分析物，特别是如果从复杂的生物基质诸如血清分析，则测量的灵敏度仍是问题。
[0003]MS往往与色谱技术特别是气相色谱和液相色谱诸如HPLC联用。这里，将经过分析的目标分子进行色谱分离，并且各自进行质谱分析(Higashi等人，(2016)J.of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 130，第181-190页)。
[0004]然而，仍需要增加MS分析方法的灵敏度，特别是用于对低丰度分析物进行分析或当仅能获取极少量材料(诸如生物活检组织)时。
[0005]本领域中，若干种旨在改善这些分析物的测量灵敏度的衍生化试剂是已知的。其中，试剂包含组合在单个功能性单元中的带电单元和中性丢失单元(例如，WO 2011/091436)。其他包含独立单元的试剂在结构上相对较大，这影响样品制备和MS测量的一般工作流程(Rahimoff等人，(2017)J.Am.Chem.Soc.139(30)，第10359-10364页)。已知的衍生化试剂是，例如，Cookson型试剂、Amplifex Diene、Amplifex Keto、Girard T、Girard P。所有这些均存在以下问题：由于标记效率往往不足而导致的缺点、由于偶合化学反应而导致结构异构体的生成、非优化的离子化效率、在偶合后进行色谱分离的缺点、由于裂解途径众多而导致的非优化的裂解行为以及需要高碰撞能量。
[0006]因此，本领域中亟需衍生化试剂，其允许从复杂生物基质中灵敏地检测分析物并且表现出不对MS测量工作流程造成负面影响的化学结构。这在随机存取的高通量MS设置中尤为重要，其中不得不在短时间内测量表现出不同化学特性的若干种不同分析物。
[0007]本专利技术涉及新颖的试剂，其允许对生物样品中的分析物分子(诸如类固醇、蛋白质和其他类型的分析物)进行灵敏的测定。该试剂以模块化方式设计，以允许针对某些分析物的测量中出现的具体需求或针对具体工作流程调整进行个别调整。此外，该试剂以尽可能小的方式设计，以尽可能少地干扰测量工作流程，特别是尽可能少地干扰在实际MS测量之前执行的色谱富集和分离过程。

技术实现思路

[0008]在第一方面，本专利技术涉及式A所示化合物：
[0009]X-L1-Y-L2-Z
[0010]其中
[0011]X是反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键，
[0012]L1和L2彼此独立地为取代或非取代的连接基，特别是线性连接基，
[0013]Y是中性丢失单元，
[0014]Z是包含至少一个永久带电部分的带电单元，
[0015]包括所述化合物的任何盐。
[0016]在第二方面，本专利技术涉及包含本专利技术第一方面的化合物的组合物。
[0017]在第三方面，本专利技术涉及包含本专利技术第一方面的化合物或本专利技术第二方面的组合物的试剂盒。
[0018]在第四方面，本专利技术涉及包含分析物分子与本专利技术第一方面的化合物的共价加合物，特别是通过分析物分子与本专利技术第一方面的化合物的化学反应形成的共价加合物。
[0019]在第五方面，本专利技术涉及本专利技术第一方面的化合物、或本专利技术第二方面的组合物、或本专利技术第三方面的试剂盒的用途，以用于对分析物分子进行质谱测定。
[0020]在第六方面，本专利技术涉及用于质谱测定分析物分子的方法，所述方法包括以下步骤：
[0021](a)使分析物分子与本专利技术第一方面的化合物反应，从而形成分析物分子与式A所示化合物的共价加合物，以及
[0022](b)对来自步骤(a)的共价加合物进行质谱分析。
附图说明
[0023]图1：标记1-睾酮衍生物：(A)标记1-睾酮衍生物的MS裂解：来自三唑基团的三甲胺和N2的协同中性丢失(Δ87Da)；(B)在不同的碰撞能量下，标记1-睾酮衍生物的母离子(左轴，黑色棒)和子离子(右轴，灰色棒)的峰面积；(C)在30V碰撞能量下，标记1-睾酮的MS质谱。前体离子m/z 483.2673，产物离子m/z 396.1974。
[0024]图2：与其他试剂比较：在0.1μg/mL下，标记1-睾酮、试剂A-睾酮、Amplifex Keto-睾酮、Girard P-睾酮和游离的
13
C
3-睾酮的母离子在最大强度时的峰面积。
[0025]图3：标记2-睾酮衍生物：(A)标记2-睾酮衍生物的MS裂解：来自三唑基团的N2的中性丢失(Δ28Da)；(B)在0.1μg/mL下，标记2-睾酮、试剂A-睾酮、Amplifex Keto-睾酮、Girard P-睾酮和游离的
13
C
3-睾酮的母离子在最大强度时的峰面积。
[0026]图4：标记2-25(OH)维生素D3衍生物：(A)标记的25-OH-维生素D3(左)和游离的25-OH-维生素D3(右)的LC色谱图，(B)标记的25-OH-维生素D3的MS裂解：来自三唑基团的N2的中性丢失(Δ28Da)
[0027]图5：与非衍生化的25-(OH)维生素D3比较：在0.1μg/mL下，标记的25-OH-维生素D3衍生物和游离的25-OH-维生素D3的母离子在最大强度时的峰面积。
具体实施方式
[0028]在下文中详细描述本专利技术之前，应理解，本专利技术并不限于本文所述的具体方法、方案和试剂，因为这些是可变的。也应理解，本文中使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，并不旨在限制本专利技术的范畴，本专利技术的范畴仅由所附权利要求书限制。除非另外指明，否则本文所用的所有科学技术术语具有如本领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
[0029]本说明书文本全文引用了若干文献。本文所引用的文献(包括所有专利、专利申
请、科学出版物、制造商的说明书、使用说明等)中的每一篇，无论上文或下文中引用，均通过引用而以其整体并入本文。在此类并入的参考文献的定义或教导与本说明书中引用的定义或教导矛盾时，以本说明书文本为准。
[0030]下面将描述本专利技术的元件。这些元件与具体实施例一起列出，然而，应理解，它们可以任何方式和任何数目组合以创建另外的实施例。各种描述的实例和优选实施例不应解释为仅将本专利技术限制为明确描述的实施例。此描述应理解为支持并且涵盖将明确描述的实施例与任何数目的所公开和/或优选元件组合的实施例。此外，除非上下文另有指示，否则本申请中所有所描述元件的任何排列和组合均应视为由本申请的说明书公开。
[0031]定义
[0032]词语“包括”以及变体诸如“包含”和“含有”应理解为暗示包括所陈述的整本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种式A所示化合物：X-L1-Y-L2-Z其中X是反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键，L1和L3彼此独立地为经取代或未经取代的连接基，特别是线性连接基Y是中性丢失单元，Z是带电单元，其包含至少一个永久带电的部分，特别是包含一个永久带电的部分，包括所述化合物的任何盐。2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述反应性单元X选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮化物反应性单元。3.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元X是羰基反应性基团，特别地，其中X选自由以下项组成的组：(i)肼单元，特别是H2N-NH-或H2N-NR1-单元，其中R1是芳基或C1-4烷基，特别是C1或C2烷基，任选地经取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼，特别是H2N-NH-C(O)-或H2N-NR2-C(O)-单元，其中R2是芳基或C1-4烷基，特别是C1或C2烷基，任选地经取代，(iii)羟氨基单元，特别是H2N-O-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述反应性单元X是硫醇反应性基团或氨基反应性基团，诸如活性酯基团，例如N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯或磺基-NHS酯、羟基苯并三唑(HOBt)酯或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)酯基团。5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述中性丢失单元Y在离子化时释放中性实体。6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述带电单元Z是永久带电的。7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述连接基L1、L2彼此独立地包含1个至10个C原子，任选地包含1个或多个杂原子。8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元X是羰基反应性基团，所述中性丢失单元Y是5元杂环部分，所述带电单元Z包含一个永久带正电的部分。9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元X是H2N-NH-，所述中性丢失单元...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：