一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽及其制备方法和应用，属于功能多肽技术领域。本发明专利技术以酪蛋白为原料，通过生物酶解技术将其制备为酪蛋白肽混合物，并经过多次分离纯化，得到了两条具有阿片性质的生物活性肽序列，并且经斑马鱼试验证明本发明专利技术提供的酪蛋白肽对于改善睡眠有较理想的功效。因此，本发明专利技术制备的酪蛋白肽在制备治疗失眠症的药物或制备改善睡眠质量的保健品或保健食品中的应用。备改善睡眠质量的保健品或保健食品中的应用。备改善睡眠质量的保健品或保健食品中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于功能多肽
，具体涉及一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]睡眠是一种重要的生理现象。良好的睡眠对维持正常的生理活动和身心健康起着重要的作用。失眠给患者的身心健康带来困扰，使人们的昼夜节律紊乱，降低了他们的活动能力，严重影响了患者的生活质量和生活质量。睡眠也是记忆细胞的新陈代谢过程：老化的细胞将用于每个记忆信息的排列，输入新的细胞进行储存。这些包括运动、语言区、平衡键以及日常生活中的一些过去事件和记忆。它们都是物质，所以它们也以物质的方式存在。
[0003]如果一个人长期缺乏睡眠导致记忆细胞不能健康地生活，一些健康问题，甚至疾病，如失语症，痉挛，或休克和昏厥引起的强制性睡眠，将很容易发生。随着时间的推移，也很容易产生癌变。有规律的生活是一个良好的基础，但长期的“规律”疲劳是危险的。科学家建议有经济能力的人最好顺其自然，不要为了提倡道德而损害他们的健康。根据中国睡眠研究学会最新公布的睡眠调查数据，中国人失眠的发生率在38.2％。
[0004]目前市面上有很多物理辅助睡眠的产品，但是此类产品对于助睡眠是治标不治本，待适应后，此类产品将无法促进人的睡眠。如智能床垫、智能灯泡、遮光眼罩、声音模仿装置。
[0005]市面上也有药物类治疗失眠的，主要是镇静类、抗抑郁药、抗组胺药、安眠药等等。安定类的药物若长期服用，会出现成瘾性和依赖性的问题，一旦形成依赖，就离不开安眠药，会把它当成生活中必不可少的东西，如果不用安眠药，就难以入睡或通宵不眠。不仅因为缺药而高度紧张，而且有全身难受的感觉，出现生理、情绪、行为以及认知能力方面的综合症状。一些医学家临床观察发现，经常服用安眠药的人，他们的服药剂量渐渐增大，明显超过正常人，而且到后来，他们服用安眠药已不能达到增进睡眠的目的，反而变得兴奋欣快，步态不稳，口齿不清，有的甚至出现神志恍惚等症状。事实证明，长期服用安眠药的人，极容易发生安眠药依赖性。长期服用安眠药可使记忆力和智力减退。这种情况在老年人更加明显。医学家还发现，60岁以上的人常服安眠药，直接影响大脑平衡和保持头脑清醒的能力，致使他们有随时跌跤和骨折的危险。国外研究还表明，长期服用安眠药与老年性痴呆的发病有一定关系。服用安眠药引起的睡眠，与正常睡眠不完全相同。睡眠时往往恶梦多，并有定时早醒和白天嗜睡现象，对体力和精力的恢复均不利，对性格情感也有改变。一些安眠药成瘾的人，性格也会逐渐发生改变，变得情感冷淡，或脾气暴躁，常为小事发脾气，自私、固执。
[0006]由于药物会对身体有所损伤，非药物治疗的保健食品成为失眠人群越来越多的选择，市面上有很多用于改善睡眠的保健食品加入了一些昂贵的中药材人参等药材，成本很大，功效也并没有全面的去发挥，造成效果一般或无效。还有一些需要的药品种类较多，存在制造方法复杂，好多成分提取不完整，造成成分的流失，保健食品的助睡眠功能失效。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种新型的具有睡眠改善作用的酪蛋白肽及其制备方法和应用。
[0008]本专利技术提供了一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T1，所述酪蛋白肽T1的氨基酸序列为如SEQ ID NO：1所示的KLPPVGPY。
[0009]本专利技术提供了一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T2，所述酪蛋白肽T2的氨基酸序列为如SEQ ID NO：2所示的APIASLLPPY。
[0010]本专利技术提供了一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽组合物，包括所述酪蛋白肽T1和所述酪蛋白肽T2；
[0011]所述酪蛋白肽T1和酪蛋白肽T2的摩尔比为(1～10):(1～10)。
[0012]本专利技术提供了所述具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T1或所述具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T2的提取分离方法，包括以下步骤：
[0013]1)将酪蛋白溶液经匀浆和均质，得到性质稳定的匀浆液；
[0014]2)将所述匀浆液在48～52℃条件下搅拌1～1.5h，调节pH值至7.0～7.4，得到预处理匀浆液；
[0015]3)将所述预处理匀浆液依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶作用下酶解，灭酶后，得到酶解液；
[0016]4)所述酶解液去除色素后，依次过30000Da陶瓷膜和1KD有机膜，收集膜下物，得到酪蛋白肽混合物；
[0017]5)用Sephadex G-50层析柱对所述酪蛋白肽混合物进行粗分离纯化，收集出峰时间为12～15min的组分；
[0018]6)采用纳升级液相色谱-Q EXACTIVE质谱联用系统对所述组分进行分析，得到的两种单链多肽分别为酪蛋白肽T1和酪蛋白肽T2。
[0019]优选的，步骤1)中所述匀浆液中颗粒粒径为0.10～0.15mm；
[0020]所述均质的压力为25兆帕，所述均质的时间为2h。
[0021]优选的，步骤3)中胰蛋白酶在匀浆液中的质量浓度为0.5％～0.7％，所述胰蛋白酶的酶解时间为1～1.2h；
[0022]所述木瓜蛋白酶在匀浆液中的质量浓度为0.2％～0.4％，所述木瓜蛋白酶的酶解时间为4～4.5h。
[0023]优选的，步骤3)中所述胰蛋白酶在匀浆液中的质量浓度为0.6％；所述胰蛋白酶的酶解时间为1h；
[0024]所述木瓜蛋白酶在匀浆液中的质量浓度为0.2％～0.4％；所述木瓜蛋白酶的酶解时间为4h。
[0025]优选的，步骤6)中所述分析的参数如下：流动相流速为300nl/min；进样量为1μL；
[0026]流动相梯度程序如下：
[0027]时间(min)02.036.038.041.042.045.0A相体积百分含量％97976310109797B相体积百分含量％3337909033
[0028]其中，A相为甲酸和纯净水的体积比为0.1:100的混合液；B相为甲酸和乙腈的体积
比为0.1：100的混合液。
[0029]本专利技术提供了一种用于治疗失眠症的药物，包括所述酪蛋白肽T1、所述酪蛋白肽T2或所述酪蛋白肽组合物。
[0030]本专利技术提供了所述酪蛋白肽T1和/或所述酪蛋白肽T2在制备治疗失眠症的药物中的应用。
[0031]优选的，当所述药物包含所述酪蛋白肽T1或所述酪蛋白肽T2时，所述酪蛋白肽T1或所述酪蛋白肽T2的浓度不低于25μg/mL。
[0032]本专利技术提供的具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T1和T2，是以酪蛋白为原料，通过生物酶解技术，将其制备为酪蛋白肽，并进一步分离纯化，得到了两条具有阿片性质的生物活性肽。经斑马鱼试验和动物实验均证明，与模型对照组比较，酪蛋白纯肽、酪蛋白肽T1和T2在本实验浓度(27.8μg/mL、83.3μg/mL和250μg/mL)下对咖啡因诱导的斑马鱼失眠症均具有显著的睡眠改善作用，同时与阳性氯化锂给药组和酪蛋白纯肽给药组相比，在一定浓度下酪蛋白肽T1和酪蛋白肽T2的对咖啡因诱导的斑马鱼失眠症均具有显著的睡本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T1，其特征在于，所述酪蛋白肽T1的氨基酸序列为如SEQ ID NO：1所示的KLPPVGPY。2.一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T2，其特征在于，所述酪蛋白肽T2的氨基酸序列为如SEQ ID NO：2所示的APIASLLPPY。3.一种具有睡眠改善作用的酪蛋白肽组合物，包括权利要求1所述酪蛋白肽T1和权利要求2所述酪蛋白肽T2；所述酪蛋白肽T1和酪蛋白肽T2的摩尔比为(1～10):(1～10)。4.权利要求1所述具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T1或权利要求2所述具有睡眠改善作用的酪蛋白肽T2的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将酪蛋白溶液经匀浆和均质，得到性质稳定的匀浆液；2)将所述匀浆液在48～52℃条件下搅拌1～1.5h，调节pH值至7.0～7.4，得到预处理匀浆液；3)将所述预处理匀浆液依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶作用下酶解，灭酶后，得到酶解液；4)所述酶解液去除色素后，依次过30000Da陶瓷膜和1KD有机膜，收集膜下物，得到酪蛋白肽混合物；5)用Sephadex G-50层析柱对所述酪蛋白肽混合物进行粗分离纯化，收集出峰时间为12～15min的组分；6)采用纳升级液相色谱-Q EXACTIVE质谱联用系统对所述组分进行分析，得到的两种单链多肽分别为酪蛋白肽T1和酪蛋白肽T2。5.根据权利要求4所述提取分离...

【专利技术属性】
技术研发人员：张九勋，张学军，田明展，张西平，魏玮，王慧娟，王芳，谷帅，
申请(专利权)人：中食都庆山东生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：