亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法。该亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法，亲和层析柱配基为凝血酶，包括如下步骤：样品前处理，将含有凝血酶调节蛋白的溶液放入到透析袋袋中进行透析，充分透析后透析袋内的液体为上样液；上样及平衡液冲洗，将上样液上样亲和层析柱，然后平衡液平衡亲和层析柱；冲洗液冲洗，平衡液平衡后采用冲洗液对亲和层析柱进行冲洗；洗脱液洗脱，冲洗液冲洗后采用洗脱液对亲和层析柱进行洗脱，并收集洗脱峰；将收集的洗脱峰进行超滤浓缩，得到凝血酶调节蛋白精制品。本发明专利技术的方法，能够大批量的纯化凝血酶调节蛋白，收率较高，纯度较高。纯度较高。纯度较高。

【技术实现步骤摘要】
亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法


[0001]本专利技术涉及蛋白提取和纯化领域，尤其是涉及亲和层析柱纯化凝血酶 调节蛋白的方法。

技术介绍

[0002]人尿液凝血酶调节蛋白(Thrombomodulin，简称TM)主要存在于人血 浆和人尿液中，是由557个氨基酸残基构成的糖蛋白，分子量约为60,300Da， 等电点约为3.8，最初由N.L.Esmon等于1981年在实验中发现。
[0003]TM是一种内皮细胞膜糖蛋白，它通过与凝血酶形成复合物来中和凝血 酶活性，并且该复合物有效地激活了C蛋白。以蛋白质S为辅助因子，活 化的C蛋白通过使活化的凝血因子V和VIII失活而充当抗凝剂。人尿TM 在非还原性SDS-PAGE上表现出四种主要形式，在还原状态下SDS-PAGE 上表现出七种主要形式，这些分子大小类似于血浆TM的分子大小。TM通 过切割具有18个氨基酸的信号肽前体产生的一种成熟的跨膜蛋白，完整的 蛋白显示出五个不同的功能域，包括一个N端凝集素样结构域(TM-D1)， 其次是六个表皮生长因子(EGF)样重复序列(TM-D2)，一个丝氨酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法，其特征在于，亲和层析柱配基为凝血酶，包括如下步骤：(1)样品前处理量取凝血酶调节蛋白粗制品，将含有凝血酶调节蛋白的溶液放入到透析袋袋中进行透析，其置换液为亲和层析柱的平衡液，将透析袋放入到置换液中进行透析，整个透析过程在4℃下进行，充分透析后透析袋内的液体为上样液；(2)上样及平衡液冲洗将上样液上样亲和层析柱，然后平衡液平衡亲和层析柱，平衡液为0.02-0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液，所述缓冲液含0-0.5mol/L NaCl，pH为5.0-9.0；(3)冲洗液冲洗平衡液平衡后采用冲洗液对亲和层析柱进行冲洗，冲洗液冲洗5-10个亲和层析柱体积，冲洗直至紫外峰将至基线附近，冲洗液选择0.02-0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液，所述缓冲液含0.1-1.0mol/LNaCl，pH为5.0-9.0；(4)洗脱液洗脱冲洗液冲洗后采用洗脱液对亲和层析柱进行洗脱，洗脱液冲洗3-5个亲和层析柱体积，并收集洗脱峰，洗脱液选择0.02-0.2mol/L的Tris-HCl缓冲体系，所述缓冲液含0.5-3.0mol/LNaCl，pH为5.0-9.0；(5)超滤处理将收集的洗脱峰进行超滤浓缩，得到凝血酶调节蛋白精制品。2.权利要求1所述的亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法，其特征在于，凝血酶调节蛋白粗制品液相纯度在4-6％。3.权利要求1所述的亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法，其特征在于，透析袋放入到置换液中进行透析，更换3-4次置换液，最后一次置换时间为5-8小时，或者过夜，之前的置换时间为0.5-1个小时。4.权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：宗扬，侯晓彦，袁玉，傅和亮，沈小宁，李文全，
申请(专利权)人：江苏艾迪药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：