【技术实现步骤摘要】
无标签人半乳糖凝集素13及其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及蛋白质制备
，具体涉及一种无标签人半乳糖凝集素13及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]人半乳糖凝集素13(uniport编号为Q9UHV8)主要在胎盘合体滋养层细胞中表达，并从其中分泌出来。在怀孕早期，人半乳糖凝集素13表达的上调对于正常妊娠是必须的。如果人半乳糖凝集素13的表达受到抑制，或者人半乳糖凝集素13的基因发生突变，那么就会引起子痫前期或者HELLP综合征。
[0003]目前，已报道的研究所使用的半乳糖凝集素13的来源主要有两种：1、纯化于人的胎盘组织；2、纯化于大肠杆菌(带有标签或者遗留有额外的几个氨基酸)。第一种方法不够经济，存在成本高的问题。第二种方法较为简单，也节省物力财力，成本低。但是，目前已报道的使用大肠杆菌发酵方法获得的人半乳糖凝集素13都会带有标签，或者经过蛋白酶切以后会遗留有额外的几个氨基酸。标签和额外的几个氨基酸在人体内可能会引起不必要的反应，降低人半乳糖凝集素13作为药物的安全性。
[0004]...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.无标签人半乳糖凝集素13的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将人半乳糖凝集素13的基因插入到质粒pET15b中，限制性内切酶的位点为NcoI和XhoI或BamHI，人半乳糖凝集素13的cDNA的末尾加上终止密码子TAA，所获得的质粒命名为pET15b_Galectin-13；步骤二、将质粒pET15b_Galectin-13转化至大肠杆菌BL21、大肠杆菌BL21(DE3)或大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中；步骤三、挑取若干大肠杆菌菌落置于LB培养基中，置于摇床中培养，摇床中的温度为37℃，转速为150-220rpm；待OD
600
至0.2-4，加入0.1-10mM的IPTG诱导蛋白质表达，诱导时间为2-24h；4000-6000g离心收集细菌；步骤四、加入细菌裂解液，超声裂解2-30min；步骤五、8000-100000g离心去沉淀，收集上清，上清中含有无标签人半乳糖凝集素13，操作温度为0-42℃；步骤六、向上清中加入饱和度30％的硫酸铵，使上清中的部分杂蛋白形成沉淀，操作温度为0-42℃；步骤七、5000-100000g离心，抛弃沉淀，收集上清，操作温度为0-42℃；步骤八、向上清中添加硫酸铵，使其饱和度达到50％，其中的人半乳糖凝集素13会形成白色沉淀，操作温度为0-42℃；步骤九、5000-100000g离心，收集沉淀，抛弃上清，操作温度为0-42℃；步骤十、将人半乳糖凝集素13的白色沉淀使用pH 7.0、10-100mM Hepes溶解；步骤十一、将所得样品置于透析袋中，并置于透析液中透析，透析温度为4-25℃；所述透析袋中的cutoff为3-10kDa，所述透析液为10mM Hepes，pH 7.0；步骤十二、透析完成后，收集所有含有人半乳糖凝集素13的溶液上样于阴离子交换柱上，操作温度为4-42℃；步骤十三、利用梯度洗脱方法，采用梯度缓冲液将人半乳糖凝集素13从阴离子交换柱上洗脱下来，洗脱速度为0.1-10ml/min；收集人半乳糖凝集素13所对应的洗脱峰，获得无标签的人半乳糖凝集素13，操作温度为4-42℃；步骤十四、收集所有人半乳糖凝集素13上样于凝胶过滤层析柱上进行凝胶过滤层析；步骤十五、将所有样品置于透析袋中，并置于透析液中透析，换液两次，透析温度为4-25℃；所述透析袋中的cut off为3-10kDa；步骤十六、使用蛋白质浓缩管将人半乳糖凝集素13浓缩至1-10mg/ml，所述蛋白质浓缩管中的cut off为3-10kDa，或者对人半乳糖凝集素13溶液进行冻干，保存于0-80℃。2.根据权利要求1所述的无标签人半乳糖凝集素13的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述人半乳糖凝集素13的基因来源于人或来源于基因合成。3.根据权利要求2所述的无标签人半乳糖凝集素13的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述人半乳糖凝集素13的基因为cDNA或合成基因。4.根据权利要求1所述的无标签人半乳糖凝集素13的制备方法，其特征在于，步骤四中，所...
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