本发明专利技术提供了一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，包括：A)将曲氟尿苷及其异构体在衍生化试剂、溶剂和缚酸剂的存在下分别进行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品；B)采用高效液相色谱对曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品进行检测；色谱参数为：色谱柱为C18柱；柱温为35℃～45℃；检测波长为238nm～242nm，流动相流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述流动相为梯度洗脱；流动相A为7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氢钠溶液；流动相B为乙腈。本发明专利技术通过对曲氟尿苷及其异构体进行类苯酰基衍生化，采用反相色谱柱，实现了曲氟尿苷及其异构体的分离。尿苷及其异构体的分离。
【技术实现步骤摘要】
一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法
[0001]本专利技术涉及药物分析
，尤其是涉及一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法。
技术介绍
[0002]三氟胸苷作为一种癌症治疗药物，目前主要用于结直肠癌的治疗。经对其结构进行逆合成分析，该化合物为由2-脱氧-D-核糖、尿嘧啶、三氟甲基三个重要结构单元组成。因此，2-脱氧-D-核糖与尿嘧啶的缩合是制备曲氟尿苷的主要策略。曲氟尿苷是含有3个手性中心的多手性化合物，具体如式(I)结构。因此，在原料药质量控制中，立体异构体的控制就尤其关键。
[0003][0004]详细的文献调研，确认了上述分析。目前报道的曲氟尿苷的合成路线主要是该路线以5-三氟甲基尿嘧啶和2-脱氧-D-核糖为起始原料，分别经硅基化保护和甲基化、对氯苯甲酰基化、氯代后经缩合、脱保护共经历六步反应制得曲氟尿苷，具体如式(II)所示。
[0005][0006]结合曲氟尿苷结构和其主要的合成路线进行综合分析可知，其3,4位的手性结构可能来自呋喃糖结构，其杂质产生的概率较小。其主要的异构体杂质应为在合成工艺中形成的曲氟尿苷呋喃糖环1位的手性异构体。
[0007]因此，曲氟尿苷原料药质量控制应着重关注该异构体的含量。因此，开发一种检测该异构体的方法是非常必要的。
技术实现思路
[0008]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，本专利技术方法分离度高，检测结果准确。
[0009]本专利技术提供了一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，包括：
[0010]A)将曲氟尿苷及其异构体在衍生化试剂、溶剂和缚酸剂的存在下分别进行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品；
[0011]B)采用高效液相色谱对曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品进行检测；
[0012]色谱参数为：
[0013]色谱柱为C18柱；柱温为35℃～45℃；检测波长为238nm～242nm，流动相流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述流动相为梯度洗脱；
[0014]流动相A为7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氢钠溶液；流动相B为乙腈。
[0015]优选的，所述曲氟尿苷异构体是指曲氟尿苷呋喃糖环1位的手性异构体。
[0016]优选的，所述衍生化试剂为苯甲酰氯、苯甲酸酐、对甲基苯甲酰氯、对甲基苯甲酸酐、对氯苯甲酰氯、对氯苯甲酸酐、对硝基苯甲酰氯或对硝基苯甲酸酐中的一种或几种。
[0017]优选的，所述溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或四氢呋喃中的一种或几种；所述缚酸剂为三乙胺或吡啶。
[0018]优选的，所述衍生化的温度为30℃～50℃，衍生化的时间为2～50min。
[0019]优选的，步骤A)所述衍生化后还包括加入1mol/L稀盐酸猝灭，经萃取后，浓缩，即得。
[0020]优选的，所述色谱柱为Waters Symmetry C18，5μm，4.6
×
150mm或Inertsil ODS-3，4.6
×
150mm 5μm；所述色谱柱温度为40℃；所述检测波长为240nm。
[0021]优选的，所述流动相A为7.8g/L的磷酸二氢钠溶液；流动相B为乙腈；流动相流速为1.0mL/min；进样量为10μL。
[0022]优选的，所述梯度洗脱具体为：
[0023]0～10min流动相A为40％，流动相B为60％；
[0024]10～20min流动相A为40％～20％，流动相B为60～80％；
[0025]20～21min流动相A为20％～40％，流动相B为80％～60％；
[0026]21～30min流动相A为40％，流动相B为60％。
[0027]优选的，曲氟尿苷衍生化样品与异构体衍生化样品分离度为2以上。
[0028]与现有技术相比，本专利技术提供了一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，包括：A)将曲氟尿苷及其异构体在衍生化试剂、溶剂和缚酸剂的存在下分别进行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品；B)采用高效液相色谱对曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品进行检测；色谱参数为：色谱柱为C18柱；柱温为35℃～45℃；检测波长为238nm～242nm，流动相流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述流动相为梯度洗脱；流动相A为7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氢钠溶液；流动相B为乙腈。本专利技术通过对曲氟尿苷及其异构体进行类苯酰基衍生化，在增加曲氟尿苷及其异构体紫外吸收的基础上，采用反相色谱柱，实现了曲氟尿苷及其异构体的分离。本专利技术具有操作简单、衍生化完全(回收率高)、曲氟尿苷与其异构体分离度大，专属性好，中间精密度高的特点。
附图说明
[0029]图1为本专利技术实施例2测定曲氟尿苷衍生化样品、曲氟尿苷异构体衍生化样品色谱图；
[0030]图2为曲氟尿苷异构体衍生化标品色谱图；
[0031]图3为混合标品的色谱图；
[0032]图4为本专利技术实施例4合成样品的色谱图；
[0033]图5为本专利技术对比例1测定结果色谱图；
[0034]图6为本专利技术对比例2测定结果色谱图；
[0035]图7为本专利技术对比例3测定结果色谱图。
具体实施方式
[0036]本专利技术提供了一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本专利技术保护的范围。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0037]本专利技术提供了一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，包括：
[0038]A)将曲氟尿苷及其异构体在衍生化试剂、溶剂和缚酸剂的存在下分别进行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品；
[0039]B)采用高效液相色谱对曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品进行检测；
[0040]色谱参数为：
[0041]色谱柱为C18柱；柱温为35℃～45℃；检测波长为238nm～242nm，流动相流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述流动相为梯度洗脱；
[0042]流动相A为7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氢钠溶液；流动相B为乙腈。
[0043]本专利技术提供的曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法旨在分离曲氟尿苷与其异构体。所述曲氟尿苷异构体是指曲氟尿苷呋喃糖环1位的手性异构体。从而对曲氟尿苷原料药质量控制具有积极的意义。
[0044]本专利技术首先将曲氟尿苷及其异构体在衍生化试剂、溶剂和缚酸剂的存在下分别进行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品。
[0045]本专利技术所述衍生化试剂优选为苯甲酰氯、苯甲酸酐、对甲基苯甲酰本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，其特征在于，包括：A)将曲氟尿苷及其异构体在衍生化试剂、溶剂和缚酸剂的存在下分别进行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品；B)采用高效液相色谱对曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品进行检测；色谱参数为：色谱柱为C18柱；柱温为35℃～45℃；检测波长为238nm～242nm，流动相流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述流动相为梯度洗脱；流动相A为7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氢钠溶液；流动相B为乙腈。2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述曲氟尿苷异构体是指曲氟尿苷呋喃糖环1位的手性异构体。3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述衍生化试剂为苯甲酰氯、苯甲酸酐、对甲基苯甲酰氯、对甲基苯甲酸酐、对氯苯甲酰氯、对氯苯甲酸酐、对硝基苯甲酰氯或对硝基苯甲酸酐中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或四氢呋喃中的一种或几种；所述缚酸剂为三乙胺或吡啶。5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述衍生化的温度为30℃～50℃，衍生化的时间为2～...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐昊，李泉妙，王淑娟，康威，
申请(专利权)人：国药一心制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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