格列美脲的检测方法技术

本发明专利技术提供了格列美脲的检测方法，包括：制备具有格列美脲和内标物的至少三种浓度的标准溶液，标准溶液中的内标物的量相同；利用液质联用仪在检测条件下检测每一种标准溶液，获得标准溶液对应的第一检测结果；根据各个第一检测结果、标准溶液中格列美脲的浓度和内标物的浓度，拟合格列美脲的标准曲线方程；取待处理样品离心后的第一上清液；向第一上清液内加入内标物，涡旋混匀，顺次加入萃取剂，对第一上清液进行萃取，得到待测样品；利用液质联用仪在检测条件下检测待测样品，获得待测样品的第二检测结果；基于标准曲线方程和第二检测结果，得到待测样品中格列美脲的浓度。本方案能够缩短样品检测时间。够缩短样品检测时间。够缩短样品检测时间。

【技术实现步骤摘要】
格列美脲的检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，特别涉及格列美脲的检测方法。

技术介绍

[0002]格列美脲为一种磺酰脲类化合物，为白色结晶性粉末，无臭，无味，在氯仿中溶解、在甲醇或乙醇中极微溶解、在水或乙醚中不溶。
[0003]目前，检测样品中格列美脲含量通常采用的方法为液质联用色谱法。而现有检测方法通常采用梯度洗脱，需要不断改变洗脱流动相的浓度配比，对待测样品的分析时间较长，从而导致样品检测时间较长。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了格列美脲的检测方法，能够缩短样品检测时间。
[0005]为了解决上述问题，本专利技术实施例提供了格列美脲的检测方法，包括：
[0006]制备至少三种浓度的标准溶液，其中，所述标准溶液为具有格列美脲和内标物的溶液，所述至少三种浓度的标准溶液中的内标物的量相同；
[0007]利用液质联用仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；
[0008]根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中格列美脲的浓度和内标物的浓度，拟合格列美脲的标准曲线方程；
[0009]对待处理样品进行离心处理，取离心后的第一上清液；
[0010]向所述第一上清液内加入内标物，涡旋混匀，顺次加入萃取剂，对所述第一上清液进行萃取，得到待测样品；
[0011]利用液质联用仪在所述检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；
[0012]基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中格列美脲的浓度。
[0013]优选地，为了更准确地检测出待测样品中格列美脲的浓度，标准溶液和待测样品中的内标物均为氯磺丙脲。
[0014]具体地，系列浓度的标准溶液制备方式如下：
[0015](1)标准储备液的配制
[0016]精确称取格列美脲标准品置于容量瓶中，用含有50％乙腈的甲醇溶液进行溶解，并定容至容量瓶标线，得到标准储备液，并在-80℃条件下保存。
[0017](2)标准工作液的配制
[0018]取适量步骤(1)中标准储备液，用含有70-90％甲醇的水溶液作为稀释液进行稀释混合，得到含有10-4000ng/mL格列美脲的系列标曲中间液作为标准工作液，并在-80℃条件下保存。
[0019](3)内标储备液的配制
[0020]取内标物氯磺丙脲标准品置于容量瓶中，用甲醇进行溶解，并定容至容量瓶的标线，得到内标储备液，并在-80℃条件下保存。
[0021](4)内标工作液的配制
[0022]取步骤(3)中内标储备液，用含有70-90％甲醇的水溶液作为稀释液进行稀释，得到含氯磺丙脲的内标工作液，并在-80℃保存。
[0023](5)标准溶液的标定
[0024]分别移取步骤(2)中不同浓度的标准工作液和步骤(4)中的内标工作液置于离心管中，分别向各个离心管中加入空白样本，混合制成至少三种不同浓度的混合溶液，将上述混合溶液在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀0.5-1min后，顺次加入萃取剂进行萃取，得到标准溶液。
[0025]需要说明的是，空白样本为未含有格列美脲的血清或血浆。
[0026]为了保证格列美脲充分溶解，选择含有50％乙腈的甲醇溶液进行溶解，同时为了降低标准工作液反复使用过程中的挥发，确保标准工作液的稳定性，所以格列美脲的稀释液为含有70％-90％甲醇的水溶液。同样地，为了提高氯磺丙脲的溶解性，选择甲醇进行溶解，同时为了降低内标工作液反复使用过程中的挥发，确保内标工作液的稳定性，所以氯磺丙脲的稀释液为含有70-90％甲醇的水溶液。
[0027]优选地，所述检测条件中的液相条件，包括：C18反相色谱柱；
[0028]洗脱流动相中的水相包括：含有0.05％-0.1％甲酸的水溶液；
[0029]洗脱流动相中的有机相包括：含有0％-0.1％甲酸的乙腈溶液；
[0030]柱温为25-55℃；流速为0.2-0.4mL/min。
[0031]具体地，色谱柱包括Waters公司的Atlantic dC18色谱柱，长度为50mm、内径为2.1mm以及填料粒径为5μm的色谱柱，进样量为2-10μL。
[0032]针对水相中的甲酸来说，0.05％-0.1％是指0.05％-0.1％范围内的任一比例，比如，0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％以及0.1％。
[0033]针对有机相中的甲酸来说，0％-0.1％是指0％至0.1％范围内的任一值，比如，有机相中添加0％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％以及0.1％的甲酸。
[0034]具体地，针对洗脱流动相中的水相包括：含有0.05％-0.2％甲酸的水溶液；有机相包括：乙腈溶液。
[0035]比如，洗脱流动相中水相为含有0.1％甲酸的水溶液，有机相为乙腈溶液；洗脱流动相中水相为含有0.2％甲酸的水溶液，有机相为乙腈溶液；洗脱流动相中水相为含有0.05％甲酸的水溶液，有机相为含有0.05％甲酸的乙腈溶液；洗脱流动相中水相为含有0.1％甲酸的水溶液，有机相为含有0.1％甲酸的乙腈溶液。
[0036]针对柱温来说，25-55℃是指25℃至55℃范围内的任一温度值，比如，25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃以及55℃。
[0037]针对流速来说，0.2-0.4mL/min是指0.2mL/min至0.4mL/min范围内的任一流速，比如，0.2mL/min、0.25mL/min、0.3mL/min、0.35mL/min以及0.4mL/min。
[0038]针对进样量来说，2-10μL是指2μL至10μL范围内的任一进样量，比如，2μL、4μL、5μL、6μL、8μL以及10μL。
[0039]优选地，洗脱流动相中的水相与有机相的体积比为5:95-40:60中的任一比例。
[0040]针对洗脱流动相中的水相与有机相的体积比来说，5:95-40:60是指5:95至40:60范围内的任一比例，比如，5:95、10:90、15:85、20:80、25:75、30:70、35:65以及40:60。
[0041]比如，水相的体积占洗脱流动相体积的40％，有机相的体积占洗脱流动相体积的60％；水相的体积占洗脱流动相体积的30％，有机相的体积占洗脱流动相体积的70％。
[0042]具体地，当水相在洗脱流动相中体积占比小于5％时，格列美脲和内标物的离子化效果较差，信号响应值较低，影响格列美脲检测灵敏度；当水相在洗脱流动相中体积占比大于40％时，格列美脲出峰时间较晚，会增大格列美脲的检测时间，因此，洗脱流动相中的水相与有机相的体积比为5:95-40:60中的任一比例。
[0043]优选地，所述检测条件中的质谱条件，包括：
[0044]所述液质联用仪采用ESI离子源，正离子扫描模式和多反应监测模式；加热气流速本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.格列美脲的检测方法，其特征在于，包括：制备至少三种浓度的标准溶液，其中，所述标准溶液为具有格列美脲和内标物的溶液，所述至少三种浓度的标准溶液中的内标物的量相同；利用液质联用仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中格列美脲的浓度和内标物的浓度，拟合格列美脲的标准曲线方程；对待处理样品进行离心处理，取离心后的第一上清液；向所述第一上清液内加入内标物，涡旋混匀，顺次加入萃取剂，对所述第一上清液进行萃取，得到待测样品；利用液质联用仪在所述检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中格列美脲的浓度。2.根据权利要求1所述的格列美脲的检测方法，其特征在于，所述检测条件中的液相条件，包括：C18反相色谱柱；洗脱流动相中的水相包括：含有0.05％-0.1％甲酸的水溶液；洗脱流动相中的有机相包括：含有0％-0.1％甲酸的乙腈溶液；柱温为25-55℃；流速为0.2-0.4mL/min。3.根据权利要求1所述的格列美脲的检测方法，其特征在于，洗脱流动相中的水相与有机相的体积比为5:95-40:60中的任一比例。4.根据权利要求1所述的格列美脲的检测方法，其特征在于，所述检测条件中的质谱条件，包括：采用ESI离子源，正离子扫描模式和多反应监测模式；加热气流速：5-10L/min；加热气温度：200-350℃；雾化电压：20-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：许丽，贾永娟，倪君君，
申请(专利权)人：济南和合医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：