【技术实现步骤摘要】
一种液相色谱串联质谱法检测7种抗高血压药物及代谢物的方法
[0001]本专利技术涉及药物检测
,尤其涉及一种液相色谱串联质谱法检测7种抗高血压药物及代谢物的方法
。
技术介绍
[0002]高血压属于慢性病,大部分患者需要长期药物治疗,有效控制血压到目标水平
。
降压药主要通过影响交感神经系统
、
肾素
‑
血管紧张素
‑
醛固酮系统和内皮素系统等对血压的生理调节起重要作用的系统而发挥降压效应
。
[0003]其中,利尿降压药包括有:
1、
噻嗪类:例如,氢氯噻嗪(
hydrochlorothiazide
)
、
氯噻酮(
chlortralidone
)
。
氢氯噻嗪是临床上广泛应用的口服利尿药和抗高血压药,适用于水肿和高血压的治疗
。
氯噻酮主要用于治疗充血性心力衰竭
、
肝硬化腹水
、
肾病综合征
、
急慢性肾炎水肿
、
慢性肾功能衰竭早期
、
肾上腺皮质激素和雌激素治疗所致的钠滞留,可单独或与其他降压药联合应用,主要用于治疗原发性高血压
。
[0004]2、
醛固酮拮抗剂:例如,螺内酯(
Spironolactone
)
、
坎利酮(
Canrenone
)
。 />螺内酯在临床上常用于治疗原发性高血压和伴有醛固酮增高的水肿
。
醛甾酮拮抗剂坎利酮常用于治疗心衰水肿和肝硬变腹水
。
[0005]3、
潴钾利尿剂:例如阿米洛利(
Amiloride
),氨苯蝶啶(
Triamterene
)
。
阿米洛利是一种保钾利尿剂,治疗肝硬化
、
水肿
、
原发性醛固酮增多症等,有较强的排钠保钾利尿作用,目前临床主要用于轻中度高血压的治疗
。
氨苯蝶啶是一种保钾利尿剂,作用于肾脏的远曲小管上皮细胞,抑制钠离子
、
氯离子重吸收而产生利尿作用,对钾离子则有潴留作用
。
[0006]4、
袢利尿剂:例如呋塞米(
Furosemide
),常用于治疗心脏性水肿
、
肾性水肿
、
肝硬化腹水
、
机能障碍或血管障碍所引起的周围性水肿
。
[0007]5、
吲达帕胺(
indapamide
)是一种磺胺类利尿剂,通过抑制远端肾小管皮质稀释段的再吸收而发挥降压
、
利尿的作用,在临床上,广泛用于原发性高血压患者
。
[0008]由于降压药种类多,因此监测其血药浓度,对于患者合理安全用药具有重要的意义
。
目前测定高血压药物通常采用的方法为高效液相色谱质谱联用法
。
而已有方法中关于利尿降压药物的检测上,普遍存在一针同时检测物质少
、
前处理操作较复杂,样品量需求大,分析时间长
、
检测灵敏度不足的缺陷
。
[0009]鉴于此,特提出本专利技术
。
技术实现思路
[0010]为了解决上述技术问题,本专利技术提供了一种液相色谱串联质谱法检测7种降压药及1种代谢物的方法,7种抗高血压药物及代谢物包括:氢氯噻嗪
、
氯噻酮
、
螺内酯
、
坎利酮
、
阿米洛利
、
氨苯蝶啶
、
呋塞米和吲达帕胺,至少包括以下步骤:
S1、
制备得到标准曲线方程,包括:配制内标工作液和标准工作液,制备得到标曲用上样溶液,使用高效液相色谱质谱联用仪对标曲用上样溶液进行检测,获得用于计算7种抗高血压药物及代谢物含量的标准曲线方程;
S2、
待测样本的前处理,包括:将内标工作液
、
待测样本和蛋白沉淀剂混匀,离心得上清液,上清液中加入水
I
混匀,作为进样样本;蛋白沉淀剂为甲醇;
S3、
检测进样样本,包括:使用高效液相色谱质谱联用仪对进样样本进行检测,将进样样本的检测结果代入标准曲线方程中,得到待测样本中7种抗高血压药物及代谢物的含量
。
[0011]可选的,待测样本为添加有甲酸的血浆,甲酸的加入量为:每
1 mL
血浆加入
2 ~ 4 μ
L
甲酸
。
[0012]可选的,
S1
包括:
S11、
分别配制内标工作液
、
梯度浓度的标准工作液;
S12、
分别取内标工作液
、
标准工作液,加入水
II
和蛋白沉淀剂,混匀得到混合液,混合液中加入水
III
混匀,作为标曲用进样样本;蛋白沉淀剂为甲醇;
S13、
使用高效液相色谱质谱联用仪对标曲用上样溶液进行检测,获得标准曲线方程
。
[0013]可选的,
S12
中,标准品工作液和内标工作液的体积比为1:
2。
[0014]可选的,
S12
中,标准品工作液和水
II
的体积比为1:
9。
[0015]可选的,
S12
中,标准品工作液与水
II
的总体积和蛋白沉淀剂的体积比为1:
4~6
;可选的,
S12
中,混合液和水
III
的体积比为1:
0.8 ~ 1.2。
[0016]可选的,
S2
中,待测样本和蛋白沉淀剂的体积比为1:
4 ~ 6。
[0017]可选的,
S2
中,待测样本和内标工作液的体积比为5:
1。
[0018]可选的,
S2
中,上清液和水
I
的体积比为1:
0.8 ~ 1.2。
[0019]可选的,
S2
中:内标工作液
、
待测样本和蛋白沉淀剂进行混匀的条件为
1500 ~ 2500 r/min
涡旋混匀
3 ~ 6 min。
[0020]可选的,
S2
中,加入水
I
后进行混匀的条件为:
1500 ~ 2500 r/min
涡旋混匀
0.5 ~ 1.5 min。
[0021]可选的,
S2
中,离心的条件为
12000 ~ 15000 r/min...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种液相色谱串联质谱法检测7种抗高血压药物及代谢物的方法,其特征在于,所述7种抗高血压药物及代谢物包括:氢氯噻嗪
、
氯噻酮
、
螺内酯
、
坎利酮
、
阿米洛利
、
氨苯蝶啶
、
呋塞米和吲达帕胺,所述方法至少包括以下步骤:
S1、
制备得到标准曲线方程,包括:配制内标工作液和标准工作液,制备得到标曲用上样溶液,使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标曲用上样溶液进行检测,获得用于计算7种抗高血压药物及代谢物含量的标准曲线方程;
S2、
待测样本的前处理,包括:将内标工作液
、
待测样本和蛋白沉淀剂混匀,离心得上清液,所述上清液中加入水
I
混匀,作为进样样本;所述蛋白沉淀剂为甲醇;所述待测样本为添加有甲酸的血浆,甲酸的加入量为:每
1 mL
血浆加入
2 ~ 4 μ
L
甲酸;
S3、
检测所述进样样本,包括:使用高效液相色谱质谱联用仪对所述进样样本进行检测,将所述进样样本的检测结果代入所述标准曲线方程中,得到所述待测样本中7种抗高血压药物及代谢物的含量
。2.
根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
S1
包括:
S11、
分别配制内标工作液
、
梯度浓度的标准工作液;
S12、
分别取所述内标工作液
、
所述标准工作液,加入水
II
和蛋白沉淀剂,混匀得到混合液,所述混合液中加入水
III
混匀,作为标曲用进样样本;所述蛋白沉淀剂为甲醇;
S13、
使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标曲用上样溶液进行检测,获得标准曲线方程
。3.
根据权利要求2所述的方法,其特征在于,
S12
中:所述标准品工作液和所述内标工作液的体积比为1:2;和
/
或,所述标准品工作液和所述水
II
的体积比为1:9;和
/
或,所述标准品工作液与所述水
II
的总体积和所述蛋白沉淀剂的体积比为1:
4 ~ 6
;和
/
或,所述混合液和所述水
III
的体积比为1:
0.8 ~ 1.2。4.
根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
S2
中:所述待测样本和所述蛋白沉淀剂的体积比为1:
4 ~ 6
;和
/
或,所述待测样本和所述内标工作液的体积比为5:1;和
/
或,所述上清液和所述水
I
的体积比为1:
0.8 ~ 1.2。5.
根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
S2
中:所述内标工作液
、
所述待测样本和所述蛋白沉淀剂进行混匀的条件为
1500 ~ 2500 r/min
涡旋混匀
3 ~ 6 min
,和
/
或,加入水
I
后进行混匀的条件为:
1500 ~ 2500 r/min
涡旋混匀
0.5 ~ 1.5 min
;和
/
或,所述离心的条件为
12000 ~ 15000 r/min
离心
8 ~ 12 min。6.
根据权利要求2所述的方法,其特征在于,
S12
中:所述混匀的条件为
1500 ~ 2500 r/min
涡旋混匀
0.5 ~ 1.5 min。7.
根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述内标工作液中含有所述7种抗高血压药物及代谢物的同位素内标:
氢氯噻嗪的同位素内标为:氢氯噻嗪
‑
[13C6]
;氯噻酮的同位素内标为:氯噻酮
‑
[13C6]
;螺内酯的同位素内标为:螺内酯
‑
d3
;坎利酮的同位素内标为:坎利酮
‑
d4
;阿米洛利的同位素内标为:阿米洛利
‑
[15N3]
;氨苯蝶啶的同位素内标为:氨苯蝶啶...
【专利技术属性】
技术研发人员:李婷,贾永娟,解娜,倪君君,
申请(专利权)人:济南和合医学检验有限公司,
类型:发明
国别省市:
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