一种测定豆类和谷物中褪黑素的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定豆类和谷物中褪黑素的方法

【技术实现步骤摘要】
一种测定豆类和谷物中褪黑素的方法


[0001]本专利技术属于食品检验检测
，具体涉及一种测定豆类和谷物中褪黑素的方法
。

技术介绍

[0002]褪黑素
(melatonin
，
MT)
是一种广泛存在于生物有机体中，具有调节昼夜节律
、
抗氧化
、
神经保护等功能的吲哚类色胺
(N
‑
乙酰
‑5‑
甲氧基色胺
)。
褪黑素是已知的抗氧化作用最强的内源性自由基清除剂，对于睡眠
、
促进性腺发育和调免疫调节具有重要作用，对人体具有多种调节功能
。
目前现已发现在无脊椎动物
、
植物和单细胞藻类乃至原核生物等几乎所有生物体内都有褪黑素的存在，在茶和草药的浸液
、
烘焙食品和发酵食品中都发现了其存在
。
外施褪黑素能显著提高植物种子的萌发率，而过高浓度的褪黑素对种子萌发具有抑制作用
。
褪黑素参与调控种子和愈伤组织发育
、
调控植物根部发育，以及果实成熟过程
。
褪黑素可提高植物对生物胁迫和非生物胁迫的抵抗能力
。
[0003]褪黑素分子式为
C
13
N2H
16
O2，由必需氨基酸色氨酸合成而来的小分子吲哚胺类化合物，分子结构式含有一个吲哚环
、
一个甲氧基及一个酰胺基
。
该物质中吲哚环结构赋予其高亲脂性，而甲氧基和乙酰基赋予其疏水性
。
褪黑素是白色类白色结晶粉末，易溶于甲醇，对光线敏感，对空气敏感，易氧化
。
[0004]目前，测定褪黑素的方法主要有高效液相色谱
‑
质谱法
(HPLC
‑
MS)、
毛细管电泳法
(CE)、
气相色谱
‑
质谱法
(GC
‑
MS)、
荧光法
、
放射免疫分析法
(RIA)、
联酶免疫分析法
(ELISA)、
光检测法
、
电泳法
、
以及电化学法等方法，其中高效液相色谱
‑
质谱法是检测速度快
、
精度高，具有检测可靠的方法，液相色谱
‑
三重四极质谱串联法
(LC
‑
MS/MS)
有灵敏度高
、
选择性好等特点，大大提高了褪黑素检测的准确度和精密度，已经在蔬菜
、
水果
、
粮食等方面有所应用，但该方法提取和净化的前处理复杂，需要在对样品提取后，使用固相萃取柱进行吸附
、
洗脱净化或浓缩复溶，操作步骤繁琐
、
效率低
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种测定豆类和谷物中褪黑素的方法
。
大豆和谷物试样用甲醇超声提取，提取液经多壁碳纳米管和磁性
Fe3O4‑
腐殖酸净化，超高效液相色谱
‑
串联四级杆质谱检测，多反应监测模式采集，外标法定量
。
[0006]一种测定豆类和谷物中褪黑素的方法，按照如下步骤进行：
[0007](1)
将试样粉碎，过
50
‑
80
目筛，取1‑
3g
加入离心管中，加入
15
‑
25mL
甲醇，振荡混匀2‑
5min
，放入超声波中超声
20
‑
40min
，
8000
‑
12000rpm
条件下离心3‑
8min
，取
1.5
‑
2.5mL
上清液；
[0008](2)
将上清液转移到加有净化剂的离心管中，涡旋1‑
3min
，
8000
‑
12000rpm
条件下离心
10
‑
20min
，再取
0.6
‑
1.0mL
上清液，加入
0.1
‑
0.3mL
水，旋涡混匀，过滤膜于样品瓶中；
[0009](3)
样品采用超高效液相色谱串联质谱进行测定
。
[0010]所述净化剂为
40
‑
80mg
多壁碳纳米管和
40
‑
80mg
磁性
Fe3O4‑
腐殖酸
。
所述多壁碳纳米管
ID
：
2nm
‑
7nm
；
OD
：
11nm
；
Length
：
10
μ
m。
[0011]所述磁性
Fe3O4‑
腐殖酸的制备方法如下：称取4‑
6g Fe3O4粉末于
100
‑
200mL
蒸馏水中，超声
15
‑
30min
，加入
20
‑
40mL NH3·
H2O
使得溶液体系的
pH
控制在7以上，再
0.5
‑
1.5g
腐殖酸粉末和
80
‑
120mLNaCl
溶液，置于
80
‑
100℃
水浴搅拌
25
‑
45min
，冷却至室温，用无水乙醇清洗直至上清液清澈，用外加磁铁进行分离，于烘箱中进行
40
‑
80℃
烘干，制得
Fe3O4‑
腐殖酸
。
[0012]所述滤膜为
0.22
μ
m
聚醚砜滤膜
。
[0013]所述超高效液相色谱串联质谱进行测定的流动相为
5mmol
甲酸铵
0.1
％甲酸甲醇和
0.1
％甲酸水
。
[0014]所述质谱选择多反应监测方式采集，电喷雾离子源
、
毛细管电压
3.90kV、
去溶剂气流量
650L/Hr、
去溶剂气温度
350℃
，载气
N2、
碰撞气
Ar
，定量离子对为
232.96/173.99、
定性离子对为
232.96/158.97。
[0015]本专利技术的有益效果：本专利技术的方法在前本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种测定豆类和谷物中褪黑素的方法，其特征在于，按照如下步骤进行：
(1)
将试样粉碎，过
50
‑
80
目筛，取1‑
3g
加入离心管中，加入
15
‑
25mL
甲醇，振荡混匀2‑
5min
，放入超声波中超声
20
‑
40min
，
8000
‑
12000rpm
条件下离心3‑
8min
，取
1.5
‑
2.5mL
上清液；
(2)
将上清液转移到加有净化剂的离心管中，涡旋1‑
3min
，
8000
‑
12000rpm
条件下离心
10
‑
20min
，再取
0.6
‑
1.0mL
上清液，加入
0.1
‑
0.3mL
水，旋涡混匀，过滤膜于样品瓶中；
(3)
样品采用超高效液相色谱串联质谱进行测定
。2.
根据权利要求1所述测定豆类和谷物中褪黑素的方法，其特征在于，所述净化剂为
40
‑
80mg
多壁碳纳米管和
40
‑
80mg
磁性
Fe3O4‑
腐殖酸
。3.
根据权利要求2所述测定豆类和谷物中褪黑素的方法，其特征在于，所述磁性
Fe3O4‑
腐殖酸的制备方法如下：称取4‑
6g Fe3O4粉末于
100
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：孙丽娟，张妍，付金东，吴丽，金龙国，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：