治疗乙型肝炎病毒（HBV）感染的方法技术

在本发明专利技术中，人类肝细胞核中HBc相互作用因子的蛋白质组学鉴定揭示了大部分RNA结合蛋白(RBPs)参与mRNA代谢，并且特别是发现了富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子10(SRSF10)在HBc复合物中富集了近3000倍。发明专利技术人证明，用小分子1C8(4

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的方法
专利

[0001]本专利技术涉及使用SRSF10(富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子10)的生物活性抑制剂治疗乙型肝炎病毒感染的方法和药物组合物，特别是所述抑制剂使SRSF10保持在去磷酸化状态，并阻止或降低SRSF10的剪接活性。
[0002]专利技术背景
[0003]尽管存在预防性疫苗，但慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染在世界范围内仍然是主要健康问题，因为它们涉及2.5亿人口，并且表现为原发性肝癌(肝细胞癌，HCC)的首要诱因(Petruzziello，2018)。目前临床上公认的针对HBV慢性感染的抗病毒治疗包括直接靶向由病毒DNA转录并间接增强宿主免疫反应的聚乙二醇化干扰素-α(IFN-α和/或特异性抑制HBV逆转录的核苷类似物(NUC)。这些治疗通常会导致患者血液中的病毒血症短暂降低(针对IFN)或持久降低(针对NUC)(Zoulim和Durantel，2015)。然而，很少取得肝脏病毒的清除，因此必须使用NUC进行终身治疗。因此，迫切需要开发能够直接或间接抑制HBV复制的新型抗病毒分子，这些抗病毒分子可用于组合疗法。
[0004]在高度复制HBV的细胞中，HBV核心蛋白(HBc)积聚在细胞核中，这意味着，除了众所周知的其在pgRNA的衣壳化和随后的逆转录产生病毒粒子基因组中的作用外，HBc可能还具有其他调控功能。早期研究表明，HBc与HBV cccDNA以及细胞DNA结合(Zlotnick等，2015)。这些发现表明，该病毒蛋白可通过招募表观遗传调控因子和/或阻止接近沉默因子来调节病毒微型染色体(cccDNA)的表达。然而，最近的研究表明，新合成的HBc并非HBV转录本身所需。因此，HBc的细胞核功能仍然不明确(Seeger等，2015)。
[0005]为了破译HBc的细胞核功能，专利技术人鉴定了其在人类分化的肝细胞中的细胞核伙伴。对人类肝细胞核中的HBc相互作用因子的蛋白质组学鉴定揭示了大多数RNA结合蛋白(RBPs)参与mRNA的代谢。特别地，发现了富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子10(SRSF10)在HBc复合物中富集了近3000倍，因此突出了HBc与该核RNA结合因子的强且优先的相互作用。
[0006]为了进一步研究SRSF10在HBV复制过程中的作用，专利技术人使用了化合物1C8(4-吡啶酮苯并异噻唑甲酰胺(4-pyridinonebenzisothiazole carboxamide))，该化合物最近被确定为HIV-1复制的强抑制剂(Shkreta等，2017)。1C8最初被鉴定为IDC16的结构模拟物，IDC16是一种抑制主要SR因子SRSF1剪接功能的药物(Cheung等，2016)。分子分析表明，1C8并不抑制SRSF1，而是阻止SRSF10的磷酸化，从而调节其剪接活性(Shkreta等，2017)。特别地，1C8被揭示可抑制SRSF10在丝氨酸133的磷酸化。此残基的磷酸化以及丝氨酸131发生的磷酸化先前被发现会改变与其他剪接因子的相互作用(Shkreta等，2017)。体外研究表明，1C8强烈抑制HIV复制，而对细胞基因和细胞活力的影响很小。
[0007]HIV复制的抑制与剪接的病毒mRNA合成的改变有关并且与SRSF10和HIV mRNAs的结合减少有关(Shkreta等，2017)。专利申请WO2015/164956公开了苯并异噻唑衍生物化合物(属于1C8)及其在治疗HIV感染中的用途。

技术实现思路

[0008]在本专利技术中，研究HBV复制机制的专利技术人试图破译HBc的调节功能，通过质谱(MS)分析确定其在人类肝细胞核中的细胞伴侣。该分析鉴定了超过200种蛋白质。功能注释显示，这些因子中约有50％是RNA结合蛋白(RBPs)，并且特别是SR蛋白，其中最相关的功能类别与具有高度相互连接的参与RNA剪接的因子相一致。功能分析确定SRSF10能够强有力地和差异化地调控HBV的复制。此外，靶向SRSF10蛋白活性的小化合物1C8诱导不同株型的HBV(基因型C和D)的病毒复制显著下降。
[0009]因此，本专利技术涉及一种用于治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的SRSF10活性抑制剂。
[0010]在特定的实施方案中，所述抑制剂使SRSF10维持在去磷酸化状态，并防止或降低SFR10的剪接活性。
[0011]在特定的实施方案中，SRSF10活性的抑制剂能够在被感染细胞中减少cccDNA和/或pgRNA。
[0012]本专利技术还涉及一种用于筛选可用于治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的多种候选化合物的方法，该方法包括以下步骤：(a)测试每种候选化合物抑制SRSF10活性的能力，以及(b)并正选择能够抑制所述SRSF10活性的候选化合物。
具体实施方式
[0013]在本研究中，专利技术人证明了SRSF10是存在于HBc核复合物中的主要因子，并且可以在HBV生命周期中发挥作用。由于1C8被证明了能够调节SRSF10的磷酸化状态，专利技术人直接研究了这个已经被证明能够调节HIV复制的分子是否也能够抑制HBV的复制。他们发现，1C8化合物确实能够抑制持续感染的肝细胞中HBV(基因型为D和C)的复制，强烈地将细胞内HBV RNAs减少60-70％(见图5A)，并将细胞培养上清液中病毒抗原(HBs和HBeAg)和HBV病毒粒子的分泌减少60-70％(见图5B)。IC8化合物还能够抑制HBV cccDNA在新生感染环境中的建立：在HBV接种之前和接种过程中(基因型C和D)在肝细胞中添加该分子可强有力地减少cccDNA的建立(分别减少70％和50％)，并且其他病毒标志物(即细胞内RNAs、HBeAg、HBsAg)在1C8处理条件下也减少了(图7A和B以及图8A和B)。
[0014]感染的肝细胞中的HBV cccDNA是所有病毒亚基因组转录本和前基因组RNA(pgRNA)的模板，负责持续的慢性感染和再激活，以确保新合成的病毒后代和cccDNA池通过细胞内核衣壳回收得到补充。在本专利技术的上下文中，首次表明SRSF10活性控制1)慢性感染细胞中细胞内HBV RNA(HBV总RNA和HBV前基因组RNA)的命运；和2)新生感染中cccDNA的建立。这些知识为减少HBV感染对象的新生cccDNA合成提供了机会，从而为彻底治愈慢性感染HBV患者提供了机会。
[0015]总而言之，这些结果表明，对SRSF10磷酸化的抑制可强烈地抑制肝细胞中的HBV感染，并且展现了一种引人注目的HBV感染新疗法。
[0016]因此，本专利技术涉及用于治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的SRSF10活性抑制剂。
[0017]在特定的实施方案中，所述抑制剂将SRSF10维持在去磷酸化状态，并防止或降低SRSF10的剪接活性。
[0018]在特定的实施方案中，SRSF10活性的抑制剂能够在被感染细胞中减少cccDNA和/或pgRNA。
[0019]如本文所使用的，术语“HBV感染”是指本
公知的由乙型肝炎病毒(HBV)引起并影响肝脏的传染病。HBV感染可以是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的SRSF10活性抑制剂。2.根据权利要求1使用的抑制剂，其中，所述HBV感染是慢性感染。3.根据权利要求1或2使用的抑制剂，其中，所述抑制剂使SRSF10维持在去磷酸化状态，并防止或降低SFR10的剪接活性。4.根据权利要求1-3中任意一项使用的所述SRSF10活性抑制剂，其中，所述抑制剂能够在被感染细胞中减少cccDNA和/或pgRNA。5.根据权利要求1-3中任意一项使用的所述SRSF10活性抑制剂，其中，所述活性抑制剂是选自由1C8、E5、D3、C2或SL309化合物所组成的列表的有机小分子。6.根据权利要求5使用的所...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：里昂克罗德，
类型：发明
国别省市：