一种快速提取生物DNA的样品处理方法技术

技术编号:27271700 阅读:15 留言:0更新日期:2021-02-06 11:36
本发明专利技术提供一种生物样品处理方法,用于生物组织DNA的快速提取,包括:彻底冷却生物组织样品和研磨装置,在制冷后,干燥的状态下反复研磨生物样品组织达到极细小的粉末。把处理后的生物组织样品转入DNA裂解液,加入异丙醇形成纳米DNA,转入DNA微柱,清洗和洗脱。本发明专利技术提供的一种生物样品处理方法,用于生物组织DNA的快速提取,可大大缩短操作时间,简化操作步骤,提高实验效率,且不使用有毒试剂,有利于操作者健康,减少对环境的破坏。减少对环境的破坏。减少对环境的破坏。

【技术实现步骤摘要】
一种快速提取生物DNA的样品处理方法


[0001]本专利技术属于生物工程
,具体地涉及一种生物组织DNA快速提取样品处理方法、 提取试剂盒及提取装置。

技术介绍

[0002]随着基因组测序技术的发展,生物基因组的序列、结构和功能研究飞速发展,而获得高 纯度、高含量和高完整度的生物基因组DNA是基因组测序技术得以应用的首要前提。
[0003]传统的生物基因组DNA提取方法主要有CTAB和SDS法,提取步骤主要包括生物组织在液 氮保护下研磨或者在Protein K处理下,以及之后的细胞裂解、去除杂质、DNA沉淀、漂洗 和洗脱等过程。其主要是以CTAB或SDS等去污剂对细胞进行裂解后,释放出细胞中的基因组 DNA;再通过氯仿和苯酚抽提或高盐沉淀的方法,去除蛋白质、多酚和多糖等杂质;然后在提 取的上清液中加入适量体积的无水乙醇、异丙醇或PEG等有机溶剂将DNA沉淀或吸附在硅胶 柱、离子交换柱等介质上;最后用漂洗液进行漂洗后,用低浓度盐溶液溶解或从介质上洗脱 下来。
[0004]专利文献CN 110592072A公开了一种植物基因组DNA的提取方法及其应用,包括在液氮 保护下进行生物组织的研磨,并将生物组织粉末加入65℃的CTAB裂解液中温育40分钟,之 后进行DNA抽提,全部操作时间超过2.5小时,并且需要用到β-巯基乙醇等有毒物质。
[0005]专利文献CN 110358762A公开了一种提取植物叶片基因组DNA的方法,包括将植物叶片 放入多通道均质器中破碎,在裂解液中65℃温育45分钟,再通过磁珠法提取DNA,全部操作 时间不少于1小时,并且需要β-巯基乙醇和盐酸胍等有毒物质,对于仪器的要求较复杂。
[0006]专利文献CN 110592072 A公开了一种植物基因组DNA的提取方法及其应用,包括在液氮 保护下进行植物组织的研磨,并将植物组织粉末加入含有SDS的裂解液种中,在65℃温育30~ 50分钟。还要在-20℃放置5~10分钟,之后进行DNA抽提,全部操作时间大约2小时,并 且需要用到β-巯基乙醇的有毒物质。
[0007]专利文献CN 106754889 A公开了从一种中药植物组织提取高质量基因组DNA的方法, 包括在低温下对植物组织细胞核反复抽提。然后,加入蛋白酶K和SDS裂解液并37℃消化过 夜,耗时太长。而且使用了酚和氯仿有毒物质。
[0008]专利文献CN 104694530 A公开了一种用96孔板的研磨仪从小麦叶片组织提取高质量基 因组DNA的方法,包括低温样品处理,研磨,然后用提取试剂完成DNA的提取过程。但是样 品处理过程太耗时:20~28h,提取过程也非常费时,超过2h,而且还使用有毒物质,如: 氯仿,苯酚等。
[0009]通过上述专利文献可见,现有的生物组织DNA提取方法普遍存在操作时间长(普遍超过 1小时甚至2小时)、使用有毒物质(酚、氯仿、β-巯基乙醇)等问题,操作时间长会引起 DNA的降解且浪费实验人员的宝贵时间、降低实验效率;使用有毒物质则会对操作者身心健 康造成伤害,且废物排放对环境有不利影响,后期处理成本大,不符合可持续发展的需要。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于克服上述现有技术中存在的不足,提供一种能够快速提取生物组织DNA 的样品处理方法,以及用于实施该方法的试剂盒和提取装置。
[0011]为实现上述目的,本专利技术提供一种生物组织DNA快速提取的样品处理方法,包括以下步 骤:
[0012](a)用制冷液化气体彻底冷却生物样品和研磨装置;
[0013](b)对所述生物组织进行充分的研磨;
[0014](c)把研磨后的生物样品转入DNA提取溶液进行DNA提取。
[0015]所述生物包括随机选取的几种植物组织:马铃薯,卤蕨,山莴苣,四蕊朴,龙葵,花叶 青木,杨树,柳树和月季;几种动物组织:黑鱼的肝脏,鼠肝,鼠肺,鼠脑,人唾液和哺乳 动物细胞;一种微生物:大肠杆菌。
[0016]所述生物DNA提取试剂随机选取四种试剂盒:盐法DNA提取试剂盒,Triton X-100 DNA 试剂盒,PVP40 DNA试剂盒和NP-40 DNA试剂盒。
[0017]所述研磨装置优先地选择本领域常见的研钵,但也可以采用其他能够实现相同目的的装 置。
[0018]所述的制冷液化气体优先地选择相对廉价的液氮作为制冷剂。
[0019]作为一种优选方案,步骤(a)用液氮彻底冷却生物药品和研磨装置;
[0020]作为一种优选方案,步骤(b)捣碎和研磨生物样品组织,尤其在液氮挥发后,研磨生物 样品组织的效果非常好。
[0021]作为一种优选方案,步骤(c)进一步包括:
[0022]i.将处理后的生物组织转移到含有第一包含RNase A的Triton X-100 DNA裂解液(PVP40 DNA裂解液,NP-40 DNA裂解液或盐裂解液)的容器(典型地为EP管)中并混匀(优选地, 涡旋震荡混匀10~30秒),然后放置2~8分钟,如Triton X-100 DNA裂解液和盐DNA裂 解液;如研碎的生物样品组织于PVP40 DNA裂解液和NP-40 DNA裂解液混匀后,再加入第二 溶液,混匀,室温放置2~8分钟;
[0023]ii.离心(优选地,转速12000rpm,约13400g,离心1~2分钟)并保留上清液(优选地, 将上清液转入新的离心管中);
[0024]iii.加入第二溶液并混匀(PVP40 DNA试剂盒和NP-40 DNA试剂盒为第三溶液),转入 吸附柱中,离心(优选地,转速12000rpm,约13400g,离心20~40秒)弃滤液;
[0025]iv.向所述吸附柱加入第三溶液(PVP40 DNA试剂盒和NP-40 DNA试剂盒为第四溶液), 离心(优选地,转速12000rpm,约13400g,离心20~40秒)弃滤液;
[0026]v.将所述吸附柱充分干燥(优选地,室温放置1~3分钟),并转移至新的容器;
[0027]vi.向吸附柱中心滴加第四溶液(PVP40 DNA试剂盒和NP-40 DNA试剂盒为第五溶液), 室温放置(优选地,放置1~3分钟)后离心(优选地,转速12000rpm,约13400g,离心30 秒~2分钟),收集滤液,即得生物组织DNA。
[0028]所述吸附柱选自本领域常用于核酸提取的DNA吸附柱,典型地是二氧化硅膜吸附柱,其 在酸性条件下对DNA具有较强的吸附作用,而在碱性条件下对DNA的吸附作用明显减弱,因 而常用于DNA提取。
[0029]作为一种优选方案,步骤i~vi均在室温环境下完成;为了提高DNA纯度,步骤iv可
重 复若干次,典型地1次、2次或3次;为了增加DNA得率,步骤vi可重复1次,即将滤液再 次加入同一个吸附柱中并离心收取。
[0030]作为一种优选方案,所述第一溶液为裂解液,其包含Triton X-100 DNA裂解液(盐DNA 裂解液,PVP本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物组织样品处理方法,用于DNA的快速提取,其特征在于包括以下步骤:(a)用制冷液化气体彻底冷却生物样品和研磨装置;(b)对所述生物组织进行充分的研磨;(c)把研磨后的生物样品转入DNA提取溶液进行DNA提取。2.根据权利要求1所述的生物样品处理方法,用于DNA的快速提取,其特征在于:步骤(b)捣碎和研磨生物样品组织,尤其在制冷液化气体挥发后,研磨生物样品组织的效果非常好。3.根据权利要求1所述的植物组织DNA提取方法,其特征在于:步骤(c)进一步包括:i.将处理后的生物组织转移到含有RNase A的第一溶液中混匀,并室温放置,有的需要加入相应的第二溶液后混匀在放置;ii.离心并保留上清液;iii.加入第二溶液并混匀,有的需要加入相应的第三溶液混匀后,转入吸附柱中,离心弃滤液;iv.向所述吸附柱加入第三溶液,有的需要加入相应的第四溶液,离心弃滤液;v.将所述吸附柱充分干燥,并转移至新的容器;vi.向吸附柱中心滴加第四溶液,有的需要加入相应的第五溶液,室温放置后离心,收集滤液。4.根据权利要求4所述的植物组织DNA提取方法,其特征在于:步骤i~vi均在室温环境下完成。5.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员:张怀远丁玮云张千禧
申请(专利权)人:汉远化生医国际科技北京有限公司
类型:发明
国别省市:

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