一种快速提取生物DNA的样品处理方法、提取试剂盒及提取装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种生物样品处理方法，用于生物组织DNA的快速提取，包括：样品的简单处理后，经过研磨仪的研磨，把处理后的生物组织样品转入DNA裂解液，加入异丙醇形成纳米DNA，转入DNA微柱，清洗和洗脱。本发明专利技术提供的一种生物样品处理方法，用于生物组织DNA的快速提取，可大大缩短操作时间，简化操作步骤，提高实验效率，且不使用有毒试剂，有利于操作者健康，减少对环境的破坏。对环境的破坏。对环境的破坏。

【技术实现步骤摘要】
一种快速提取生物DNA的样品处理方法、提取试剂盒及提取装置


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体地涉及一种生物组织DNA快速提取样品处理方法、提取试剂盒及提取装置。

技术介绍

[0002]随着基因组测序技术的发展，生物基因组的序列、结构和功能研究飞速发展，而获得高纯度、高含量和高完整度的生物基因组DNA是基因组测序技术得以应用的首要前提。
[0003]传统的生物基因组DNA提取方法主要有CTAB和SDS法，提取步骤主要包括生物组织在液氮保护下研磨或者在Protein K处理下，以及之后的细胞裂解、去除杂质、DNA沉淀、漂洗和洗脱等过程。其主要是以CTAB或SDS等去污剂对细胞进行裂解后，释放出细胞中的基因组 DNA；再通过氯仿和苯酚抽提或高盐沉淀的方法，去除蛋白质、多酚和多糖等杂质；然后在提取的上清液中加入适量体积的无水乙醇、异丙醇或PEG等有机溶剂将DNA沉淀或吸附在硅胶柱、离子交换柱等介质上；最后用漂洗液进行漂洗后，用低浓度盐溶液溶解或从介质上洗脱下来。
[0004]专利文献CN 110592072A公开了一种植物基因组DNA的提取方法及其应用，包括在液氮保护下进行生物组织的研磨，并将生物组织粉末加入65℃的CTAB裂解液中温育40分钟，之后进行DNA抽提，全部操作时间超过2.5小时，并且需要用到β-巯基乙醇等有毒物质。
[0005]专利文献CN 110358762A公开了一种提取植物叶片基因组DNA的方法，包括将植物叶片放入多通道均质器中破碎，在裂解液中65℃温育45分钟，再通过磁珠法提取DNA，全部操作时间不少于1小时，并且需要β-巯基乙醇和盐酸胍等有毒物质，对于仪器的要求较复杂。
[0006]专利文献CN 110592072 A公开了一种植物基因组DNA的提取方法及其应用，包括在液氮保护下进行植物组织的研磨，并将植物组织粉末加入含有SDS的裂解液种中，在65℃温育30～ 50分钟。还要在-20℃放置5～10分钟，之后进行DNA抽提，全部操作时间大约2小时，并且需要用到β-巯基乙醇的有毒物质。
[0007]专利文献CN 106754889 A公开了从一种中药植物组织提取高质量基因组DNA的方法，包括在低温下对植物组织细胞核反复抽提。然后，加入蛋白酶K和SDS裂解液并37℃消化过夜，耗时太长。而且使用了酚和氯仿有毒物质。
[0008]专利文献CN 104694530 A公开了一种用96孔板的研磨仪从小麦叶片组织提取高质量基因组DNA的方法，包括低温样品处理，研磨，然后用提取试剂完成DNA的提取过程。但是样品处理过程太耗时：20～28h，提取过程也非常费时，超过2h，而且还使用有毒物质，如：氯仿，苯酚等。
[0009]通过上述专利文献可见，现有的生物组织DNA提取方法普遍存在操作时间长(普遍超过 1小时甚至2小时)、使用有毒物质(酚、氯仿、β-巯基乙醇)等问题，操作时间长会引起 DNA的降解且浪费实验人员的宝贵时间、降低实验效率；使用有毒物质则会对操作者身心健
康造成伤害，且废物排放对环境有不利影响，后期处理成本大，不符合可持续发展的需要。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于克服上述现有技术中存在的不足，提供一种能够快速提取生物组织DNA 的样品处理方法，以及用于实施该方法的试剂盒和提取装置。
[0011]为实现上述目的，本专利技术提供一种生物组织DNA快速提取的样品处理方法，包括以下步骤：
[0012](a)将将简单处理后的生物组织加入研磨装置或研磨仪；
[0013](b)对所述生物组织进行充分的研磨；
[0014](c)把研磨后的样品转入DNA提取溶液进行DNA提取。
[0015]所述生物包括随机选取的几种植物组织：花叶青木叶片，杨树叶片，柳树叶片和月季叶片；几种动物组织：黑鱼的肝脏，小鼠的肝脏和鼠肺；一种微生物：酵母。
[0016]所述生物DNA提取试剂随机选取三种试剂盒：Triton X-100 DNA试剂盒，涂易乐DNA试剂盒和维克乐DNA试剂盒。
[0017]所述研磨装置选自本领域常用的生物组织破碎装置，典型地优先选择MY-10研磨仪和 MY-20研磨仪，但也可以采用其他能够实现相同目的的装置。
[0018]作为一种优选方案，步骤(a)中所述的生物样品需要简单的前期处理，如：把植物叶片剪成较小的叶片组织。
[0019]作为一种优选方案，步骤(b)中所述用MY-10研磨仪处理植物组织和酵母；用MY-20研磨仪处理动物组织。可以在裂解液的保护下研磨，也可以在液氮保护下研磨，或者两种方法联合使用。
[0020]作为一种优选方案，步骤(c)进一步包括：
[0021]i.将处理后的生物组织转移到含有RNase A的第一Triton X-100 DNA裂解液(涂易乐DNA裂解液或维克乐DNA裂解液)的容器(典型地为EP管)中并混匀(优选地，涡旋震荡混匀10～30秒)，然后放置2-8分钟，如Triton X-100 DNA裂解液和涂易乐DNA裂解液；有的需要再加入第二溶液，混匀，室温放置2～8分钟，如研碎后的生物样品组织转入维克乐 DNA裂解液混匀后，需要加入第二溶液；
[0022]ii.离心(优选地，转速12000rpm，约13400g，离心1～2分钟)并保留上清液(优选地，将上清液转入新的离心管中)；
[0023]iii.加入第二溶液(如维克乐DNA试剂盒需要加入第三溶液)并混匀，转入吸附柱中，离心(优选地，转速12000rpm，约13400g，离心20～40秒)弃滤液；
[0024]iv.向所述吸附柱加入第三溶液(如维克乐DNA试剂盒需要加入第四溶液)，离心(优选地，转速12000rpm，约13400g，离心20～40秒)弃滤液；
[0025]v.将所述吸附柱充分干燥(优选地，室温放置1～3分钟)，并转移至新的容器；
[0026]vi.向吸附柱中心滴加第四溶液(如维克乐DNA试剂盒需要加入第五溶液)，室温放置(优选地，放置1～3分钟)后离心(优选地，转速12000rpm，约13400g，离心30秒～2分钟)，收集滤液，即得生物组织DNA。
[0027]所述吸附柱选自本领域常用于核酸提取的DNA吸附柱，典型地是二氧化硅膜吸附柱，其在酸性条件下对DNA具有较强的吸附作用，而在碱性条件下对DNA的吸附作用明显减
弱，因而常用于DNA提取。
[0028]作为一种优选方案，步骤i～vi均在室温环境下完成；为了提高DNA纯度，步骤iv可重复若干次，典型地1次、2次或3次；为了增加DNA得率，步骤vi可重复1次，即将滤液再次加入同一个吸附柱中并离心收取。
[0029]作为一种优选方案，所述第一溶液为裂解液，含有RNase A的Triton X-100 DNA裂解液 (涂易乐DNA裂解液或维克乐DNA裂解液)，维克乐DNA试剂盒第二溶液为5M NaCl。
[0030]作为一种优选方案，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物组织样品处理方法，用于DNA的快速提取，其特征在于包括以下步骤：(a)将将简单处理后的生物组织加入研磨装置或研磨仪；(b)对所述生物组织进行充分的研磨；(c)把研磨后的样品转入DNA提取溶液进行DNA提取。2.根据权利要求1所述的生物样品处理方法，用于DNA的快速提取，其特征在于：步骤(a)中所述的生物样品需要简单的前期处理，如：把植物叶片剪成较小的叶片组织等。3.根据权利要求1所述的生物样品处理方法，用于DNA的快速提取，其特征在于：步骤(b)在裂解液保护的条件下，用研磨仪把生物组织研碎或者在液氮制冷的条件下，用研磨仪把生物组织研碎。研磨优先在5分钟内完成。4.根据权利要求1所述的植物组织DNA提取方法，其特征在于：步骤(c)进一步包括：i.将处理后的生物组织转移到含有第一溶液中混匀，并室温放置，有的需要加入相应的第二溶液后混匀在放置；离心并保留上清液；ii.加入第二溶液并混匀，有的需要加入相应的第三溶液混匀后，转入吸附柱中，离心弃滤液；iii.向所述吸附柱加入第三溶液，有的需要加入相应的第四溶液，离心弃滤液；iv.将所述吸附柱充分干燥，并转移至新的容器；v.向吸附柱中心滴加第四溶液，有...

【专利技术属性】
技术研发人员：张怀远，张俊峰，丁玮云，
申请(专利权)人：汉远化生医国际科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：