用于真姬菇担孢子显微观察的固定液、制备方法、固定方法及应用技术

本发明专利技术公开了用于真姬菇担孢子显微观察的固定液、制备方法、固定方法及应用。本方法提供的固定液采用融化的明胶和甘油水合剂混合制备而成，该方法得到的固定液，透光性好、相变温度安全，该方法简便、快捷，既可用于批量生产，也可在急需时，进行临时配置。上述固定液用于固定真姬菇担孢子，既不会影响真姬菇担孢子的其他处理效果，比如染色，又能够延长曝光时间，提高获得的真姬菇担孢子影像数据的质量。提高获得的真姬菇担孢子影像数据的质量。提高获得的真姬菇担孢子影像数据的质量。

【技术实现步骤摘要】
用于真姬菇担孢子显微观察的固定液、制备方法、固定方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物组织学
，具体而言，涉及用于真姬菇担孢子显微观察的固定液、制备方法、固定方法及应用。

技术介绍

[0002]真姬菇(Hypsizygusmarmoreus(Peck)H.E.Bigelow)又名玉蕈、斑玉蕈，属于担子亚门、层菌纲、伞菌目白蘑科、玉蕈属，外形美观，质地脆嫩，味道鲜美，是重要的工厂化栽培食用菌。目前可人工栽培的真姬菇有褐色和纯白两个品系，褐色通常称为“蟹味菇”；纯白称为“海鲜菇”或“白玉菇”。担孢子是食用菌最初的繁殖单位，多数食用菌的生活史都由担孢子经过萌发、融合、结实再形成担孢子的过程组成。因此，对担孢子的形态观察也成为食用菌研究中不可少的研究内容。一般食用菌孢子很小，长直径为10μm左右，肉眼无法鉴别，因此显微镜观察就成了担孢子研究中最主要的研究手段。但由于担孢子极小，在悬浮液或染色缓冲液中极易产生布朗运动现象，即担孢子在显微镜头下一直不停的做无规律移动，导致图像拍摄无法良好的聚焦，这严重影响了孢子观察结果的呈现。其中，尤其以真姬菇担孢子布朗运动最为严重，因其相比其他食用菌担孢子更小，长直径为5μm左右，在显微观察中，尤其是高倍镜头下，其担孢子无规律移动尤其明显，严重影响了真姬菇的担孢子研究工作。因而，需要提供一种能够有效固定真菌担孢子的方法，将真菌担孢子固定后用于显微观察。
[0003]染色是真菌担孢子在显微观察过程中一项重要的处理手段，经过染色，科研人员能够更好地观察到真菌担孢子不同组织结构之间的关系，目前对于真菌担孢子的染色手段已十分成熟，包括荧光染色、普通染料染色等。但由于现有技术中没有对真菌担孢子进行固定的报道，因此，如何设置真菌担孢子的固定和染色步骤，以实现减弱或消除真菌担孢子布朗运动的同时，又不会影响染色结果的技术效果是目前急需解决的难题。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于真菌担孢子显微观察的固定液，以期采用该固定液对真菌担孢子进行固定时不会对真菌担孢子的染色结果造成不良影响。
[0006]本专利技术的另一个目的在于，提供上述固定液的制备方法。
[0007]本专利技术还有一个目的在于，提供上述固定液在真菌担孢子固定中的应用，并提供相应的固定方法。
[0008]本专利技术还有一个目的在于，提供采用上述固定液固定真菌担孢子后形成的含有固定液组分的固定样本。
[0009]本专利技术的最后一个目的在于，提供上述固定样本在真菌担孢子质量评价中的应用。
[0010]本专利技术是这样实现的：
[0011]第一方面，本专利技术实施例提供一种用于真菌担孢子显微观察的固定液，包括明胶和甘油水合剂。
[0012]上述的甘油水合剂是指由甘油和水按照体积进行配比得到的用于溶解高分子组分的溶剂。现有技术中，明胶、甘油和水三种组分组成的溶液具有安全的相变温度，且透光性好，被广泛用作胶囊药品的囊壁的主要组分，但并未见有用于阻碍微米粒子布朗运动的报道。
[0013]在可选的实施方式中，所述固定液由明胶与甘油水合剂组成，且固定液中所述明胶的质量体积浓度为15％～45％。
[0014]在可选的实施方式中，所述固定液中所述明胶的质量体积浓度为20％～40％；进一步优选为30％。
[0015]在可选的实施方式中，所述甘油水合剂包括体积比为1:0.5～2的甘油和水；进一步优选地，所述甘油水合剂包括体积比为1:1的甘油和水。
[0016]第二方面，本专利技术实施例提供前述实施方式任一项所述的固定液的制备方法，所述制备方法包括，使融化的明胶与甘油水合剂混匀得到固定液。
[0017]在可选的实施方式中，所述的制备方法包括将明胶加入到甘油水合剂中加热使明胶融化，混匀得到固定液。该方法将常温下凝固状态的明胶加入到甘油水合剂中，通过加热使明胶融化，在明胶由表及里逐渐融化过程中，能够使得明胶融化后立刻即可被甘油水合剂分散成均匀溶液，而若加入顺序改为向凝固的明胶中甘油水合剂，则会使得贴壁的明胶表面在升温过程中融化后不能及时地被甘油水合剂溶解，导致溶解不均匀。
[0018]优选地，所述加热的温度为50～65℃；进一步优选为60℃。
[0019]第三方面，本专利技术实施例提供前述实施方式所述的固定液或采用前述实施方式所述的制备方法制备得到的固定液在真菌担孢子显微观察固定中的应用。
[0020]优选地，所述真菌包括平菇、草菇或真姬菇。
[0021]第四方面，本专利技术实施例提供一种真菌担孢子的固定方法，所述固定方法的步骤包括，抽取上述固定液与真菌担孢子混合均匀，凝固后得到固定液。
[0022]优选地，所述真菌担孢子在固定之前，还包括染色步骤。
[0023]优选地，所述染色步骤包括向真菌担孢子中加入染色剂，避光保存。
[0024]优选地，所述染色剂包括VBL、苯胺蓝或calcofluor white。
[0025]优选地，所述真菌担孢子在染色之后经过清洗。
[0026]优选地，所述清洗步骤包括使用无菌水和/或PBS缓冲液洗涤后离心，去除上清液。
[0027]优选地，所述固定有真菌担孢子的固定液中，真菌担孢子浓度为10
3-106个/ml。
[0028]第五方面，本专利技术实施例提供采用前述实施方式所述的固定方法得到的含有真菌担孢子的固定样本。
[0029]最后一个方面，本专利技术实施例还提供了将上述固定样本在真菌担孢子质量评价中的应用。
[0030]本专利技术具有以下有益效果：
[0031]本方法采用明胶与甘油水合剂两种试剂，对真菌担孢子进行快速凝固，在不影响真菌担孢子其他处理方式取得效果的同时，可在照相设备长时间曝光和扫描的状态下获得清晰的真菌担孢子图像。
[0032]本专利技术提供了固定液的制备方法，该方法将融化的明胶与甘油水合剂混匀得到固定液，形成透光性好、相变温度安全的固定液，方法简便、快捷，既可用于批量生产，也可在急需时，进行临时配置。
[0033]本专利技术还提供了上述固定液在真菌担孢子显微观察中的应用，上述固定液用于固定真菌担孢子，既不会影响真菌担孢子的其他处理效果，比如染色，又能够延长曝光时间，提高获得的真菌担孢子影像数据的质量。
[0034]本专利技术还提供了应用上述固定液的固定方法，该固定方法为将固定液与真菌担孢子混合至均匀即可，操作简单，便于实验人员掌握，由于操作简单，使得不同实验人员进行固定操作，取得的固定效果差异小，适于推广。
[0035]本专利技术还提供了采用上述固定方法固定得到的真菌担孢子固定样本，该固定样本由上述固定液包裹真菌担孢子后形成，该固定液凝固后透光性好，并能够延长曝光时间，使得得到的固定样本适合显微观察。
[0036]本专利技术还提供了上述固定样本在真菌担孢子质量评价中的应用，合适放大倍数的显微镜下，上述固定样本中能够清晰观察到真菌担孢子的组织结构，并且避免了布朗运动带来的像散问题本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于真菌担孢子显微观察的固定液，其特征在于，包括明胶和甘油水合剂。2.根据权利要求1所述的固定液，其特征在于，所述固定液由明胶与甘油水合剂组成，且固定液中所述明胶的质量体积浓度为15％～45％。3.根据权利要求2所述的固定液，其特征在于，所述固定液中所述明胶的质量体积浓度为20％～40％；进一步优选为30％。4.根据权利要求1～3任一项所述的固定液，其特征在于，所述甘油水合剂包括体积比为1:0.5～2的甘油和水；优选地，所述甘油水合剂包括体积比为1:1的甘油和水。5.权利要求1～4任一项所述的固定液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括，使融化的明胶与甘油水合剂混匀得到固定液。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括将明胶加入到甘油水合剂中加热使明胶融化，而后混匀得到固定液；优选地，所述加热的温度为50～65℃；进一步优选为60℃。7.权利要求1～4任一项所述的固定液或采用权利要求5或6...

【专利技术属性】
技术研发人员：万佳宁，周陈力，鲍大鹏，杨瑞恒，李燕，龚明，王莹，陈洪雨，候娣，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：