一种幽门螺杆菌染色液及其染色方法技术

本发明专利技术公开了一种幽门螺杆菌染色液及其染色方法，所述染色液包括如下重量份的原料：醋酸0.1

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺杆菌染色液及其染色方法


[0001]本专利技术属于医学检测领域，具体是一种幽门螺杆菌染色液及其染色方法。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌包含犬幽门螺杆菌、胃螺杆菌、黑氏螺杆菌、拉普尼螺杆菌和萨洛莫尼螺杆菌等一种革兰氏阴性杆菌，螺旋形、微需氧、对生长条件要求十分苛刻，1983年首次从慢性活动性胃炎的胃粘膜活检组织中分离成功，是所知能够在猕猴、大鼠、猪、犬等动物胃中生存的微生物种类。白色念珠菌和曲霉菌虽然也能在胃部生长，诱发胃真菌病却比较少见。
[0003]研究指出，幽门螺杆菌生存于人体胃幽门部位，是最常见的细菌病原体之一。世界有多半人口受到过幽门螺杆菌的感染，而在有些国家几乎90％的人都感染过这种细菌。人们通常是在幼年时就受到感染，5岁以下达到50％。这种细菌感染首先引起慢性胃炎，并导致胃溃疡和胃萎缩，严重者则发展为胃癌。据统计，初次感染幽门螺杆菌年龄较早的人群萎缩性胃炎及胃癌发生率高，幽门螺杆菌感染与胃癌死亡率的高低呈现平行关系。幽门螺杆菌寄生在胃黏膜组织中，67％～80％的胃溃疡和95％的十二指肠溃疡是由幽门螺杆菌引起的。慢性胃炎和消化道溃疡患者的普遍症状为：食后上腹部饱胀、不适或疼痛，常伴有其他不良症状，如嗳气、腹胀、反酸和食欲减退等。有些患者还可出现反复发作性剧烈腹痛、上消化道少量出血等。及早发现幽门螺杆菌感染者，及时而有效地用抗菌素杀灭幽门螺杆菌，对预防和控制胃癌有重大意义。
[0004]幽门螺旋杆菌感染检测有许多方法，如活组织镜检、幽门螺旋杆菌的分离培养、快速尿素酶试验、尿素呼气试验、尿氨排出试验、血清学试验以及多聚酶链反应等。根据是否需进行胃镜检查，幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)的诊断性检测可分为侵入性和非侵入性两类。非侵入性检测包括尿素呼气试验(urea breath testing,UBT)、大便抗原检测及血清学检测。而侵入性检测包括活检尿素酶检测、组织学检测、细菌培养。而在这些方法里，以病理科组织学检测为金标准方法。组织学检测通常为胃黏膜活检组织通过石蜡包埋处理，切片后进行染色观察，染色方法包括常规HE染色以及吉姆萨染色，银染等特殊染色。但这些染色方法缺点明显，主要为操作繁琐，都为多步操作，检测时间长；非特异性染色，对幽门螺杆菌染色敏感度差，背景着色后反差小，菌体不易发现，当菌量很少时，易造成漏诊。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种幽门螺杆菌染色液及其染色方法，显著缩短染色时间，具有省时省力、菌体颜色深、镜检容易分辨等优势，符合诊断标准。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]本专利技术一方面涉及一种幽门螺杆菌染色液，其特征在于包括如下重量份的原料：醋酸0.1-3份，醋酸钠0.1-5份，硝酸银0.3-4份，明胶3-5份，对苯二酚0.03-1份，酚红0.02-1份，尿素5-15份，医用液体石蜡1-2份，纯化水50-300份，所述染色液任选地包括或者不包括
其它原料成分。
[0008]在本专利技术的一个优选实施方式中，其包括如下重量份的原料：醋酸0.5-1.5份，无水醋酸钠0.5-1.5份，硝酸银1-3份，明胶3-5份，对苯二酚0.2-1.0份，酚红0.2-0.8份，尿素6-15份，医用液体石蜡1-2份，纯化水100-250份。
[0009]在本专利技术的一个优选实施方式中，其包括如下重量份的原料：醋酸1份，无水醋酸钠1份，硝酸银2份，明胶4份，对苯二酚0.5份，酚红0.5份，尿素10份，医用液体石蜡1.5份，纯化水15份。
[0010]本专利技术另一方面还涉及上述幽门螺杆菌染色液在制备诊断幽门螺杆菌的试剂中的应用。
[0011]本专利技术另一方面还涉及一种染色方法，其包括如下步骤：将被检测样品浸入到上述染色液中进行染色。
[0012]在本专利技术的一个优选实施方式中，将被检测样品浸入到上述染色液中不超过20秒，优选不超过12秒。
[0013]在本专利技术的一个优选实施方式中，将染色后的样本组织切片用流水冲洗，然后依次用含水乙醇、无水乙醇、正丁醇、二甲苯浸泡、脱水，脱水后用中性树胶湿封。
[0014]有益效果
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0016]本专利技术研制的染色液染色时间短、菌体颜色深、镜检容易分辨等优势，其诊断结果与胃镜活检结果基本一致，能满足常规诊断需要。
具体实施方式
[0017]为了进一步理解本专利技术，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0018]如无特殊说明，本专利技术实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
[0019]实施例1：切片染色
[0020]1.配制染色液：
[0021]A组(实施例1)：醋酸1份，无水醋酸钠1份，硝酸银2份，明胶4份，对苯二酚0.5份，酚红0.5份，尿素10份，医用液体石蜡1.5份，纯化水150份，充分搅拌混合后避光保存。
[0022]B组(比较例1)：醋酸1份，无水醋酸钠1份，明胶4份，对苯二酚0.5份，酚红0.5份，尿素10份，医用液体石蜡1.5份，纯化水150份，充分搅拌混合后避光保存。
[0023]C组(比较例2)：醋酸1份，无水醋酸钠1份，硝酸银2份，明胶4份，对苯二酚0.5份，酚红0.5份，医用液体石蜡1.5份，纯化水150份，充分搅拌混合后避光保存。
[0024]2.切片样本和染色步骤
[0025]选取温州市中心医院2019年收治并确诊的胃镜活检幽门螺旋杆菌阳性确诊病例3例，每个病例制备3份组织切片，分别采用上述染色液进行染色。具体步骤如下：组织切片上述实施例和比较例的染色液中10s
→
流水洗干净即可2s
→
95％乙醇浸泡2s
→
无水乙醇I浸
泡1s
→
无水乙醇II浸泡3s
→
正丁醇浸泡3s
→
二甲苯I浸泡2s
→
二甲苯II浸泡3s
→
中性树胶湿封2s。(总用时＜30s)
[0026]3.染色结果
[0027]实施例1及比较例1和2经10
×
40倍显微镜下观察，并用数字切片扫描仪扫描整张切片在观察。显色结果：
[0028]A组(实施例1)显色深红色，菌体显示粗大，背景清晰。
[0029]B组(比较例1)显色淡红色，菌体与背景界限模糊，由此说明硝酸银的缺失对于显色效果影响较大。
[0030]C组(比较例2)显色失败，难以看清具体形态，由此说明尿素缺失的情况下，染色稳定性差，容易被后续浸泡过程去除。
[0031]实施例2：临床实验
[0032]1.1一般资料本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌染色液，其特征在于包括如下重量份的原料：醋酸0.1-3份，醋酸钠0.1-5份，硝酸银0.3-4份，明胶3-5份，对苯二酚0.03-1份，酚红0.02-1份，尿素5-15份，医用液体石蜡1-2份，纯化水50-300份。2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌染色液，其包括如下重量份的原料：醋酸0.5-1.5份，无水醋酸钠0.5-1.5份，硝酸银1-3份，明胶3-5份，对苯二酚0.2-1.0份，酚红0.2-0.8份，尿素6-15份，医用液体石蜡1-2份，纯化水100-250份。3.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌染色液，其包括如下重量份的原料：醋酸1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李春波，张腾飞，许可，
申请(专利权)人：浙江甬誉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：