一种发酵法生产腺嘌呤的方法技术

本发明专利技术公开了一种发酵法生产腺嘌呤的方法，它包括配制种子培养基、配制发酵培养基、配制一号补料培养基、配制二号补料培养基和发酵培养，所述的一号补料培养基是含量为400

【技术实现步骤摘要】
一种发酵法生产腺嘌呤的方法


[0001]本专利技术属于生物制药
，尤其是一种发酵法生产腺嘌呤的方法。

技术介绍

[0002]腺嘌呤，用作医药中间体， 主要用于参加DNA和RNA的合成，用于放射治疗、苯中毒和抗肿瘤等引起的白细胞减少症，用于急性粒细胞减少症，医药及生化研究。我公司于2014年开始进行腺嘌呤产品发酵法研究，并于2017年完成车间放大生产推广，发酵法生产水平、产量全国领先。
[0003]目前发酵法生产成本与合成法接近，没有体现出成本优势，且发酵法受公用工程配套设备限制，动力、设备折旧成本偏高。因此，优化发酵工艺、提高发酵水平是解决发酵法主导地位的出路。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述现有技术中的不足，提供一种发酵法生产腺嘌呤的方法，该方法培养基配方合理，解决了原工艺中迟效氮源前期累积过剩、菌体生长过快、溶氧不足，发酵后期氮源缺乏、菌体过早衰老自溶等现象。
[0005]本专利技术的目的是这样实现的：一种发酵法生产腺嘌呤的方法，它包括配制种子培养基、配制发酵培养基、配制一号补料培养基、配制二号补料培养基和发酵培养，其特征在于：所述的种子培养基包含如下组分：葡萄糖15-25g/L、废糖蜜5-10g/L、酵母粉10-20g/L、尿素1-5g/L、磷酸二氢钾1-5g/L、氯化钙1-5g/L、硫酸镁1-5g/L、微量元素0.02-0.05g/L、消泡剂0.1-0.6ml/L。
[0006]所述的发酵培养基包含如下组分：葡萄糖10-20g/L、酵母粉10-20g/L、豆饼粉20-50g/L、玉米浆20-50g/L、尿素1-5g/L、磷酸氢二钾1-5g/L、甘氨酸1-5g/L、氯化钙1-5g/L、硫酸镁1-3g/L、谷氨酸钠5-10g/L、微量元素0.05-0.1g/L、消泡剂0.1-0.6ml/L。
[0007]所述的一号补料培养基是含量为400-600g/L的葡萄糖水溶液；所述的二号补料培养基包含如下组分：酵母粉5-15g/L、玉米浆20-50g/L、微量元素0.05-0.1g/L、消泡剂0.1-0.6ml/L。
[0008]所述的微量元素包含如下组分：硫酸亚铁（FeSO4•
7H2O）10-50mg/L、氯化钴（CoCl2·
6H2O）0.01-0.05mg/L、硫酸锌（ZnSO4·
7H2O）0.01-0.05mg/L、硫酸锰（MnSO4·
4H2O）0.01-0.05mg/L。
[0009]所述的发酵培养包括如下步骤：（1）按比例将种子培养基投入一级种子罐内，灭菌完成后接入摇瓶培养液进行通气搅拌培养，控制温度为34-38℃、溶解氧饱和度为30-50%，培养时间5-10小时，制得一级种子液；（2）按比例将种子培养基投入二级种子罐内，灭菌完成后接入一级种子液，在温度为
34-38℃、溶解氧饱和度为30-50%的条件下通气搅拌培养5-10小时，制得二级种子液；（2）按比例将发酵培养基投入发酵罐内灭菌，其中，发酵培养基的葡萄糖单独灭菌加入，用氨水调pH值6.0-7.0，移入培养好的二级种子液进行通气搅拌培养，控制温度为35-40℃、溶解氧饱和度为20-30%；在发酵过程中，根据发酵液中葡萄糖浓度自动流加入一号补料培养基，控制发酵液中葡萄糖浓度为3-10g/L，放罐前2小时停止补料，控制葡萄糖浓度为0g/L放罐；在发酵过程中，在发酵8小时之后至放罐前10小时自动流加入二号补料培养基，二号补料培养基加入体积量为发酵培养基体积量的5-6%。
[0010]优选的，所述的一级种子罐为500L种子罐，所述的二级种子罐为15m3种子罐，所述的发酵罐为100m3发酵罐。
[0011]优选的，一级种子培养步骤中搅拌机的转速为200-300rpm，二级种子培养步骤中搅拌机的转速为150-200rpm，发酵培养步骤中搅拌机的转速为100-150rpm。
[0012]优选的，一级种子培养步骤中的通气量为1-2V/V
•
min，二级种子培养步骤中的通气量为1-2V/V
•
min，发酵培养步骤中的通气量为1-1.5V/V
•
min。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：（1）本专利技术的方法是改变原有发酵过程单一分批补加葡萄糖，且需控制残糖10g/L以上工艺，新专利技术葡萄糖流加补入工艺，控制残糖0-5g/L，使糖点控制处于菌体生长微饥饿的临界点，发酵过程溶氧水平得到有效控制。
[0014]（2）本专利技术的方法是增加发酵过程氮源流加补入工艺，发酵过程8小时至放罐前10小时分批将培养基二中物料补入发酵罐；解决了原工艺中迟效氮源前期累积过剩、菌体生长过快、溶氧不足，发酵后期氮源缺乏、菌体过早衰老自溶等现象；使腺嘌呤发酵水平大幅度提高，降低了生产成本。
具体实施方式
[0015]下面通过实施例对本专利技术技术方案进行详细的描述。以下具体实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0016]实施例1：按葡萄糖20g/L、废糖蜜7.5g/L、酵母粉15g/L、尿素3g/L、磷酸二氢钾3g/L、氯化钙3g/L、硫酸镁3g/L、微量元素0.03g/L、泡敌0.5ml/L和余量水的比例配制种子培养基，其中，所述的微量元素按硫酸亚铁（FeSO4•
7H2O）30mg/L、氯化钴（CoCl2·
6H2O）0.03mg/L、硫酸锌（ZnSO4·
7H2）0.03mg/L、硫酸锰（MnSO4·
4H2O）0.03mg/L和余量的水的比例配制。
[0017]实施例2：按葡萄糖15g/L，酵母粉15g/L，豆饼粉35g/L，玉米浆35g/L，尿素3g/L，磷酸氢二钾3g/L，甘氨酸3g/L，氯化钙3g/L，硫酸镁2g/L，谷氨酸钠7.5g/L，微量元素0.075g/L，泡敌0.5ml/L和余量水的比例配置发酵培养基，其中，所述的微量元素按硫酸亚铁（FeSO4•
7H2O）30mg/L、氯化钴（CoCl2·
6H2O）0.03mg/L、硫酸锌（ZnSO4·
7H2）0.03mg/L、硫酸锰（MnSO4·
4H2O）0.03mg/L和余量的水的比例配制。
[0018]实施例3：按葡萄糖浓度为500g/L和余量水的比例配制一号补料养基。
[0019]实施例4：按酵母粉10g/L，玉米浆35g/L，微量元素0.075g/L，泡敌0.2ml/L和余量水的比例配制二号补料养基，其中，所述的微量元素按硫酸亚铁（FeSO4•
7H2O）30mg/L、氯化钴（CoCl2·
6H2O）0.03mg/L、硫酸锌（ZnSO4·
7H2）0.03mg/L、硫酸锰（MnSO4·
4H2O）0.03mg/L
和余量的水的比例配制。
[0020]实施例5：一种发酵法生产腺嘌呤的方法，按实施例1的比例配制种子培养基，按本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵法生产腺嘌呤的方法，它包括配制种子培养基、配制发酵培养基、配制一号补料培养基、配制二号补料培养基和发酵培养，其特征在于：所述的种子培养基包含如下组分：葡萄糖15-25g/L、废糖蜜5-10g/L、酵母粉10-20g/L、尿素1-5g/L、磷酸二氢钾1-5g/L、氯化钙1-5g/L、硫酸镁1-5g/L、微量元素0.02-0.05g/L、消泡剂0.1-0.6ml/L；所述的发酵培养基包含如下组分：葡萄糖10-20g/L、酵母粉10-20g/L、豆饼粉20-50g/L、玉米浆20-50g/L、尿素1-5g/L、磷酸氢二钾1-5g/L、甘氨酸1-5g/L、氯化钙1-5g/L、硫酸镁1-3g/L、谷氨酸钠5-10g/L、微量元素0.05-0.1g/L、消泡剂0.1-0.6ml/L；所述的一号补料培养基是含量为400-600g/L的葡萄糖水溶液；所述的二号补料培养基包含如下组分：酵母粉5-15g/L、玉米浆20-50g/L、微量元素0.05-0.1g/L、消泡剂0.1-0.6ml/L；所述的微量元素包含如下组分：硫酸亚铁（FeSO4•
7H2O）10-50mg/L、氯化钴（CoCl2·
6H2O）0.01-0.05mg/L、硫酸锌（ZnSO4·
7H2O）0.01-0.05mg/L、硫酸锰（MnSO4·
4H2O）0.01-0.05mg/L。2.所述的发酵培养包括如下步骤：（1）按比例将种子培养基投入一级种子罐内，灭菌完成后接入摇瓶培养液进行通气搅拌培养，控制温度为34-38℃、溶解氧饱和度为30-50%...

【专利技术属性】
技术研发人员：丛立双，张国银，巴一峰，曹凤娟，高峰，王海龙，
申请(专利权)人：赤峰蒙广生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：