一种改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法，包括：选用适合于改性透明质酸烷氧基取代度试验的反应条件；使用气相色谱对待测样品进行检测；基于检测结果计算待测样品中改性透明质酸烷氧基取代度。本发明专利技术所述的改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法响应灵敏，安全性好，检测结果稳定性高，能够用于高效检测改性透明质酸烷氧基取代度。检测改性透明质酸烷氧基取代度。检测改性透明质酸烷氧基取代度。

【技术实现步骤摘要】
一种改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法


[0001]本申请涉及透明质酸的检测领域，且更为具体地涉及一种改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法。

技术介绍

[0002]透明质酸(Hyaluronic acid，简称HA)又名玻璃酸，是由(1-3)-2-乙酸氨基-2-脱氧-D-葡萄糖(1-4)-D-葡萄醛酸双糖重复单位所组成的高分子量的直链粘多糖。1934年由Meyer等人从牛玻璃球眼中首次提取获得。透明质酸由于拥有独特的分子结构和理化性质，因此在机体内显示出多种重要的生理功能，由于HA具有良好的保湿性、粘弹性、渗透性和延展性，同时无任何免疫原性和毒性，被广泛应用于化妆品、食品、医药和临床治疗等行业领域。
[0003]透明质酸因为本来就存在皮肤中，作为天然的保湿因子有很强的保湿效果，透明质酸在化妆品、医药等领域的应用也越来越广泛，比如作为眼用制剂的媒介广泛应用于眼用制剂中，也是皮下填充注射的热门材料，但是天然透明质酸在组织中吸收迅速，停留时间短，不适用于对材料硬度、机械强度和稳定性有一定要求的场合，因此需要对透明质酸进行修饰改性，或者与其它材料复合，拓宽其应用领域。为了使改性透明质酸适用于各领域，需要精确调节改性透明质酸的修饰度，与之相对应的，需要对改性透明质酸的修饰程度有稳定可靠的检测手段，为后续的生产研发试验提供技术支持。
[0004]改性透明质酸烷氧基取代度检测目前尚没有统一的标准，改性纤维素烷氧基取代度的检测方法并不适用于改性透明质酸，易出现爆瓶、杂质峰干扰检测等问题。
[0005]中国专利CN105784891A中公开了一种羟乙基纤维素的检测方法，公开的方法中使用的反应容器为顶空瓶，在150℃条件下，邻二甲苯汽化(沸点144.4℃)，顶空瓶与瓶塞结合处极易出现爆塞现象，使有机蒸汽暴露在加热箱的150℃高温环境下，存在极大的安全隐患；而且其检测对象为纤维素，并没有涉及透明质酸类物质的检测，未涉及干扰杂质如乙醇等对透明质酸羟乙氧基取代度检测的影响，因透明质酸原料生产过程中会引入乙醇残留，因为乙醇上含有醇羟基，会直接与氢碘酸中的卤素离子发生亲核取代反应，生成碘乙烷，对最终的试验结果产生影响，且在150℃条件下，按照公开的方法进行改性透明质酸羟乙氧基取代度试验后，色谱图中存在杂峰，且与目标峰大部分重叠，严重影响试验精确度。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术人在日常分析工作中，通过大量的试验，建立了一种适合于改性透明质酸烷氧基取代度检测的方法。
[0007]本专利技术采用如下技术方案。
[0008]本专利技术提供一种改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法，包括以下步骤：
[0009]第一步：提取反应体系中的烷氧基改性透明质酸样品，得到烷氧基改性透明质酸纯品；
[0010]第二步：将烷氧基改性透明质酸纯品进行烷氧基反应，得到用于检测烷氧基取代度的供试品溶液；
[0011]第三步：利用气相色谱法检测供试品溶液，通过反应产物的量测定改性透明质酸烷氧基取代度。
[0012]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述改性透明质酸为含有烷氧基官能团的透明质酸，取代度为0.1％～40％；所述烷氧基官能团为甲氧基，乙氧基，羟丙氧基、羟乙氧基，优选为羟乙氧基。
[0013]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述第一步反应体系中的烷氧基改性透明质酸的提取方法为醇沉法或冻干法。
[0014]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述第二步中烷氧基改性透明质酸的烷氧基反应，步骤为：选择带橡胶环的玻璃密封瓶，取烷氧基改性透明质酸纯品精密称定，置于玻璃密封瓶中，加入己二酸，然后加入分析纯邻二甲苯与氢碘酸溶液，用带橡胶环的聚四氟乙烯瓶塞密封，精密称定，于烘箱中加热，冷却，反应完全后，取反应瓶中上清液作为供试品溶液。
[0015]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述玻璃密封瓶的耐受压力应不小于50psi，玻璃密封瓶精密称定，减重小于反应瓶中内容物的0.1％，且无渗漏；烘箱温度为75～100℃，反应时间为18～30h。
[0016]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述邻二甲苯的加入量为2ml，己二酸加入量为0.20～0.47mg/mg供试品，优选为0.24～0.36mg/mg供试品，所述氢碘酸溶液氢碘酸含量为57％，氢碘酸溶液的加入量为0.005～0.016mL/mg供试品，优选为0.0075～0.01mL/mg供试品。
[0017]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述第三步中气相色谱法所使用的色谱柱固定相为6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷，优选的色谱柱为DB-624。
[0018]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述色谱柱的初始柱温为40℃，维持两分钟，以2.5℃/min的升温速率升至60℃，维持两分钟，以50℃/min的升温速率升至210℃，维持两分钟；载气流速1.5～3ml/min；进样口温度150℃；检测器FID温度250℃。
[0019]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述通过气相色谱法检测供试品溶液，再将检测出来的数值通过外标法计算得到烷氧基取代度。
[0020]作为本专利技术的一种优选技术方案：通过外标法计算烷氧基取代度时，以10μl～30μl碘代烷作为对照品溶液，所述对照品溶液还包括与权利要求4反应体系等量的己二酸、分析纯邻二甲苯与氢碘酸溶液，密封、摇匀取上清液。
[0021]有益效果
[0022]本专利技术具有如下有益效果：
[0023]1、本专利技术在特定的温度范围内，改性透明质酸在特定含量的氢碘酸和己二酸存在下发生烷氧基反应，生成碘代烷，用于检测烷氧基取代度，反应过程可控，不会出现爆瓶等现象，用气相色谱对反应产物进行取代度检测时，结果稳定性高，排除了杂峰对检测结果的干扰。建立了一种适用于改性透明质酸烷氧基取代度检测的方法。
[0024]2、本专利技术所述的改性透明质酸烷氧基取代度的检测迅速、结果稳定性高，能够用于快速检测改性透明质酸烷氧基取代度。
[0025]3、从图1图2中我们可以看出，对照组出峰时间在12.02min左右，无拖尾，色谱条件良好，无空白干扰。图3为实施例1色谱图，图4为对比例1色谱图，目标峰出峰时间与对照品符合，可以确定12.02min左右的目标峰为碘乙烷目标峰，图3目标峰处无干扰，图4目标峰处出现难以分离的杂质峰，无法准确读出峰面积，进而影响试验准确度。
[0026]综上所述，采用本专利技术的反应条件可以大大增强试验的安全性和准确性，杜绝了爆瓶等危险因素对实验安全带来的风险，同时减少反应杂质的生成，大大提高试验准确性。
附图说明
[0027]图1为实施例1中的对照品色谱图。
[0028]图2为实施例1中的空白色谱图。
[0029]图3为实施例1中的样品色谱图。
[0030]图4为对比例1中的样品色谱图。
具体实施方式
[0031]外标法是仪器分析常用的方法之一，是比较法的一种。与内标法相比，外标法不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：提取反应体系中的烷氧基改性透明质酸样品，得到烷氧基改性透明质酸纯品；第二步：将烷氧基改性透明质酸纯品进行烷氧基反应，得到用于检测烷氧基取代度的供试品溶液；第三步：利用气相色谱法检测供试品溶液，通过反应产物的量测定改性透明质酸烷氧基取代度。2.根据权利要求1所述的改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法，其特征在于，所述改性透明质酸为含有烷氧基官能团的透明质酸，取代度为0.1％～40％；所述烷氧基官能团为甲氧基，乙氧基，羟丙氧基、羟乙氧基，优选为羟乙氧基。3.根据权利要求1所述的改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法，其特征在于，所述第一步反应体系中的烷氧基改性透明质酸的提取方法为醇沉法或冻干法。4.根据权利要求1所述的改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法，其特征在于，所述第二步中烷氧基改性透明质酸的烷氧基反应，步骤为：选择带橡胶环的玻璃密封瓶，取烷氧基改性透明质酸纯品精密称定，置于玻璃密封瓶中，加入己二酸，然后加入分析纯邻二甲苯与氢碘酸溶液，用带橡胶环的聚四氟乙烯瓶塞密封，精密称定，于烘箱中加热，冷却，反应完全后，取反应瓶中上清液作为供试品溶液。5.根据权利要求4所述的改性透明质酸烷氧基取代度的检测方法，其特征在于，所述玻璃密封瓶的耐受压力应不小于50psi，玻璃密封瓶精密称定，减重小于反应瓶中内容物的0.1％，且无渗漏；烘箱温度为75～100℃，反应时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈延臻，魏健，陈玉娟，陈雯雯，万金玉，刘英，李芸，左丽婷，刘昌荣，刘建建，郭学平，
申请(专利权)人：山东华熙海御生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：