提供了用于治疗一或多个需要血浆因子VIII的受试者、特别是具有预先存在的抗FVIII抑制性抗体的受试者的方法、组合物和系统。所述方法涉及向所述受试者施用治疗有效量的炎症抑制剂、治疗有效量的CD8+T细胞耗竭剂和治疗有效量的组合物，所述组合物包括慢病毒载体LV，所述LV包括与巨核细胞特异性启动子以可表达的方式连接的经优化FVIII表达盒。此类方法、组合物和系统可用于治疗患有如A型血友病等一或多种血液凝结病症的受试者。或多种血液凝结病症的受试者。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】FVIII的基因中以增加其分泌，如具有226aa的B结构域变体序列的F8/N6(苗(Miao)等人,血液(Blood)103:3412-3419,2004)、密码子优化的BDD-FVIII和F8/N6(沃德(Ward)等人,血液117:798-807,2011)、具有取代F8/N6中的226aa/N6的17-aa肽编码序列的F8-V3(麦金托什(McIntosh)等人,血液121:3335-3344,2013)以及编码具有R1645H的BDD-FVIII变体的F8-RH(赛纳(Siner)等人,血液121:4396-4403,2013)。与BDD-FVIII相比，一些FVIII变体(如FVIII-RH和弗林蛋白酶切割位点缺失的BDD-FVIII变体(阮(Nguyen)等人,血栓形成与止血杂志(J Thromb Haemostas.)15:110-121,2017))表现出生物活性增加，这可能是由于凝血酶活化时A2结构域的解离较慢。
[0010]美国专利第5,779,708号描述了一种穿透硬组织并提供进入下面的组织的药物递送通道的骨内和/或硬组织药物递送装置和方法。所述装置包含中空钻头和可移除地插入中空钻头的管心针。在钻孔期间防止中空钻头的孔堵塞的管心针在钻孔后被移除，以允许操作者通过中空钻头的孔注射药物。
[0011]尽管有先前的研究，但是仍然需要替代或补充受试者的功能性FVIII的安全且可靠的方法。特别需要不依赖于预先调理或清髓治疗并且尽管在待治疗的受试者中存在抑制性抗FVIII抗体但仍能提供治疗益处(如适当的凝结功能)的方法。
专利
技术实现思路
[0012]本文描述了用于治疗HemA的临床相关策略的改进方案。在这些策略的实例中，在不进行预先调理的情况下将携带由血小板特异性启动子Gp1bα(G)驱动的各种不同FVIII变体转基因(包含针对在此系统中表达而优化的变体)的自失活慢病毒载体(LV)递送到HemA受试者体内。在一些实施例中，这种转基因通过骨内(IO)施用(例如施用到胫骨或髂骨中)进行递送。在其它实施例中，递送为鼻内递送(或以其它方式递送至肺)或静脉内递送。所提供的FVIII转基因可以有效地转导造血干细胞(HSC)，而基本上不会引发抗FVIII抑制性抗体(抗FVIII抑制剂)。所产生的FVIII表达并储存在血小板α-颗粒中，并且即使在存在预先存在的抗FVIII抑制剂的情况下，也能至少部分校正免疫活性HemA受试者的出血表型。
[0013]本公开的实施例描述了实现包含用于治疗血友病的表达血小板靶向的经过修饰的FVIII基因的LV的IO递送的组合治疗的组合物和方法。用于在体内有效转导HSC的IO递送的使用使得受试者的炎性应答和/或免疫应答较低，同时伴随的全身毒性较低。这对某些受试者尤其有益，包含例如患有如血友病等出血性病症的受试者。
[0014]另外的实施例提供了一种治疗需要血浆因子VIII的受试者的方法，所述方法包含：向所述受试者施用治疗有效量的炎症抑制剂(如地塞米松(Dex))；向所述受试者施用治疗有效量的CD8+ T细胞耗竭剂；以及向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含慢病毒载体，所述慢病毒载体包含与巨核细胞特异性启动子以可表达的方式连接的经优化FVIII表达盒，其中施用通过以下方式进行：骨内(IO)输注；静脉(IV)递送；或鼻内(IN)或吸入递送。
[0015]在此治疗方法的实施例的实例中，所述地塞米松在施用LV前24小时、施用前4小时、施用后4小时和施用后24小时以100mg/kg的剂量施用。
[0016]在所提供的实施例的实例中，所述CD8+ T细胞耗竭剂包含抗CD8抗体。例如，在实例中，所述CD8+ T细胞耗竭剂是抗CD8αmAb，所述抗CD8αmAb在LV递送前1天、递送后4天和递
送后11天以4mg/kg的剂量施用。
[0017]在所提供的实施例的其它实例中，所述巨核细胞特异性启动子是GP1b-α启动子。
[0018]在所提供的实施例的实例中具体设想的是不包含对受试者进行预先调理或清髓治疗的方法。
[0019]在所提供的实施例的更多实例中，所述IO输注以2μL/min到15μL/min、5μL/min到12μL/min或不超过10μL/min的速率进行。例如，在一些实例中，所述IO输注以0.01mL/min到0.5mL/min、0.05mL/min到0.3mL/min、0.1mL/min到0.25mL/min或不超过0.4mL/min的速率进行。任选地，所述IO输注在不超过45分钟的时段内进行。
[0020]在又另外的实例中，所述经优化FVIII表达盒包含hF8X10 K12(SEQ ID NO:1)或hF8/N6K12RH(SEQ ID NO:2)。在所提供的实施例中的任何一个实施例中，所述慢病毒载体可以包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4或其功能变体。
[0021]还提供了本文提供的方法的实例，所述方法是用于治疗受试者的止血相关病症的方法，并且所述受试者需要此类治疗。举例来说，所述受试者可能患有A型血友病(hemA)、血管性血友病、与创伤或损伤相关的出血、血栓形成、血小板减少症、中风、凝血病、弥散性血管凝固(DIC)或过度抗凝治疗病症。
[0022]在所提供的治疗方法的又另一个实施例中，所述受试者是具有预先存在的抗FVIII抑制性抗体的HemA受试者。
[0023]还提供了治疗需要血浆因子VIII的受试者的方法，所述方法基本上如本文所述。
附图说明
[0024]与本文一起提交的附图中的至少一个附图可以以彩色形式更好地理解。申请人将一或多个附图的彩色版本视为原始提交的一部分，并保留在后续程序中呈现附图彩色图像的权利。
[0025]图1A-1B：在免疫活性和免疫缺陷小鼠中IO输注M-GFP-LV后骨髓细胞中的GFP表达。在第0天，在经过修饰的骨髓增生性肉瘤病毒启动子(MND)(M-GFP-LV)(1.1
×
108ifu/动物)或无菌PBS(20μl/动物，模拟(mock))的控制下，向C57BL/6J(BL6)和B6(Cg)-Rag2
tm1.1Cgn
/J(Rag2-/-)小鼠骨内输注编码GFP的自失活LV。在第7天、第28天和第84天处死实验小鼠。然后分离骨髓细胞，并且通过流式细胞术检测总骨髓细胞(图1A和1B中的左图区)和骨髓造血干细胞(HSC，Lin-C-Kit
+
Sca1
+
)(a和b中的右图区)中的GFP表达水平。数据示出为代表性流动图像(图1A)和随时间变化的汇总图(图1B)。每种符号表示单独的动物。数据以平均值
±
SED表示。差异在p<0.01(**)和p<0.001(***)时被认为是显著的。示出的数据来自两个独立的实验。
[0026]图2A-2E：用于提高IO输注M-GFP-LV后骨髓细胞的原位转导效率的短暂免疫抑制。(图2A)向通过腹腔注射地塞米松(De本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗需要血浆因子VIII的受试者的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的炎症抑制剂；向所述受试者施用治疗有效量的CD8+ T细胞耗竭剂；以及向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包括慢病毒载体，所述慢病毒载体包括与巨核细胞特异性启动子以可表达的方式连接的经优化FVIII表达盒，其中施用通过以下方式进行：骨内(IO)输注；静脉(IV)递送；或鼻内(IN)或吸入递送。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述炎症抑制剂包括地塞米松(Dex)。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述地塞米松在施用LV前24小时、施用前4小时、施用后4小时和施用后24小时以100mg/kg的剂量施用。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述CD8+ T细胞耗竭剂包括抗CD8抗体。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述CD8+ T细胞耗竭剂是抗CD8α mAb，所述抗CD8α mAb在递送LV前1天、递送后4天和递送后11天以4mg/kg的剂量施用。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述巨核细胞特异性启动子是GP1b-α启动子。7.根据权利要求1所述的方法，所述方法不包括对所述受试者进行预先调理或清髓治疗。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述IO输注以2μL/min到15μL/min、5μL/min到12μL/min或不超过...
【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：西雅图儿童医院以西雅图儿童研究机构名义经营，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。