本发明专利技术提供新颖的免疫毒素和治疗肿瘤疾病的方法。这些免疫毒素包含对ＣＤ３３蛋白质显示结合特异性的抗原结合区与细胞生长调节剂的结合物。本发明专利技术的免疫毒素特异地选择性杀死以ＣＤ３３抗原表达为特征的肿瘤细胞。因而，该新颖免疫毒素对治疗急性和慢性人类白血病，及其它脊髓发育不良综合症是有用的。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术大体而论涉及肿瘤疾病治疗的领域。具体地，本专利技术涉及新颖免疫结合剂及它们在肿瘤疾病治疗中的运用。更具体地，本专利技术涉及对以CD33抗原表达为特征的白血病细胞具有细胞毒性的新颖免疫结合剂。在西方世界，肿瘤疾病是死亡及发病的首要原因之一。所有的肿瘤疾病或“癌症”至少具有一个特征，即，在细胞生长调节过程中含有缺陷。位于癌细胞表面上的抗原已被用于从非淋巴细胞性白血病中区分出淋巴细胞性白血病，将急性骨髓性粒细胞性白血病分成亚型，预测治疗结果，和在体内治疗或在体外通过骨髓净化治疗。特定于急性非淋巴细胞性细胞的抗原也可识别处于它们发育早期的正常造血细胞。CD33抗原是一种67千道尔顿糖蛋白，它可在正常的粒细胞一单核细胞集落形成单位，(CFU-GM)，在部分爆式红细胞集落形成单位(BFU-E)，及在粒细胞，红细胞，单核细胞，巨核细胞集落形成单位(CFU-GEMM)被发现，在正常多能干细胞中缺乏。抗体是由动物的免疫系统对抗原决定簇作出应答时正常生成的蛋白质。抗体与它们所对应的抗原结合。特异性单克隆抗体的发展为研究者提供了过度表达肿瘤相关抗原的细胞选择性靶向化学治疗剂可能的手段。免疫毒素是含有共价结合至毒素上的单克隆抗体的杂合分子。免疫毒素可能具有几个优于传统抗肿瘤剂之处，包括对肿瘤细胞的选择性和极强烈的毒素的潜在释放。CD33抗原在急性非淋巴细胞性白血病细胞和急性骨髓性粒细胞性白血病细胞上的存在为研究选择性免疫毒素提供了机会。目前，尚无这种有效的免疫毒素存在。因此，在本
中仍十分需要寻求选择性杀死白血病细胞的化合物和方法。本专利技术提供了一种新颖的组合物，包括将能结合对CD33蛋白质显示有结合特异性的区域的抗原与细胞生长调节剂相结合。这种组合物可作为免疫毒素以专一地杀死以表达CD33蛋白质为特征的肿瘤细胞。因此，在本专利技术的一个实施例中提供了一种新颖的组合物，包括将能结合对CD33蛋白质显示有结合特异性的区域的抗原与细胞生长调节剂相结合。细胞生长调节剂可以是毒素，杀细胞药物，抑制细胞生长的药物，或生物应答修饰因子。优选地，细胞生长调节剂是gelonin。在本专利技术的另一个实施例中，提供了一种治疗肿瘤疾病的方法，包括对需要这种治疗的个体施用杀细胞有效剂量的本专利技术免疫毒素。在本专利技术的再一个实施例中，提供了一种杀死骨髓中肿瘤细胞的方法，包括从患有肿瘤疾病的个体中取出骨髓，用本专利技术组合物处理骨髓，并将处理后的骨髓回输进该个体内。在本专利技术的另一个实施例中，提供了一种防止肿瘤疾病复发的方法，其中该疾病是以CD33蛋白质表达为特征的。复发的防止是通过施用本专利技术免疫毒素的杀细胞有效剂量进行治疗。在本专利技术的还有一个实施例中，提供了一种新颖的组合物，包括将CD33抗原结合区与细胞生长调节剂融合而形成的一种融合蛋白。较好的细胞生长调节剂是gelonin。在本专利技术的进一步实施例中，提供了通过对此哺乳动物施用本专利技术的免疫毒素延长患肿瘤的哺乳动物生存时间的方法。在进一步实施例中，提供了通过施用本专利技术的免疫毒素延缓肿瘤生长速率的方法。更进一步，提供了一种含有本专利技术免疫毒素的药物组合物。附图说明图1描绘了gelonin和M195免疫毒素对HL60细胞蛋白质合成的抑制作用。图2说明了gelonin和M195 gelonin对SKLY16和HL60细胞系蛋白质合成的抑制作用。图3说明了M195免疫毒素与HL60三天培养对蛋白质合成的抑制作用。图4描绘了M195-IT五天培养对HL60细胞蛋白质合成的抑制作用。图5说明了HuGl和HuGl-IT与HL60，U937，MOLT4细胞的结合。图6说明了由HuGl-IT导致的对HL60细胞DNA合成的抑制作用。图7描绘了在HuGl-IT和HuGl或FD79间的竞争。图8说明了单独的M195，反应混合物，单独的gelonin，或经纯化的M195 gelonin的电泳模式。正如在此所用的，术语“嵌合性(chimeric)抗体”或“嵌合性多肽”指那些抗体或抗体多肽，其中多肽的一部分具有一个氨基酸序列，该序列得自于或同源于，得自第一基因源的抗体或多肽中的相应序列，而链(一条或多条)中其余部分同源于另一基因源的相应序列。例如，嵌合性重链抗体多肽可含有一个鼠的可变区和一个人的稳定区。这二种基因源典型地是分属二个分隔的种，但偶然地会属于一个种。典型地，嵌合性抗体或多肽的制备是通过重组分子和/或细胞技术。在许多情况中，嵌合性抗体具有模拟得自一哺乳动物种的抗体可变区的轻和重链的可变区，同时稳定区和/或框架部分则同源于得自第二个不同哺乳动物种的抗体序列。正如在此所用的，然而对嵌合性抗体的定义并不限于此例。嵌合性抗体是任一种抗体重链或轻链或两条链均由模拟不同来源抗体中的序列的序列结合形成的，这些来源可以是来自不同的纲。具有不同的抗原反应，或者具有不同的起源种类，融合点不管如何均是在可变区/稳定区的界线上。例如，嵌合性抗体可以包括框架和互补决定区(CORs)得自不同来源的抗体。例如，将非人类CDRs整合入连接于人类稳定区的框架区以制成“人类化抗体”。参见，例如，PCT申请公告No.WO 87/02671;美国专利No.4，816，567;欧州专利申请0173494;Jones，et al.，Nature，321522-525(1986);and Verhoeyen，et al.，Science，2391534-1536(1988)，所有这些在此引入作为参考。正如在此所用的，术语“人样的框架区”是每一条抗体链的框架区，它通常含有至少约70或更多氨基酸残基。典型地含有75-85或更多残基。人样的框架区的氨基酸残基至少约80%，更优选的是约80-85%，而最优选的是超过85%与人类免疫球蛋白的氨基酸残基同源。这与其它endergenous抗体共有的特征，在生成靶标部分是有用的，它只引发很小免疫反应时，例如，减小对“自身”标志反应的机制。正如在此所用的，术语“人类化”或“人样免疫球蛋白”指一种免疫球蛋白，含有人样框架区和基本与人类免疫球蛋白稳定区实质上同源的稳定区，即，含有至少约80%或更多，优选的是约85-90%或更多，最优选有约95%或更多同源。因此，人样免疫球蛋白在大部分，可能除了CDRs，基本上与一个或更多天然的人免疫球蛋白序列的相应部分实质上是同源。正如在此所用的，术语“杂合抗体”指一种抗体，其中每条链分别与哺乳动物抗体链同源，但其结合代表了一种新颖的集合，以使该抗体识别两种不同的抗原。在杂合抗体中，重链和轻链对是与抗抗原识别特征即表面决定簇的抗体的重链和轻链对同源，而其它对重链和轻链对则与抗另一表面决定簇的抗体中所发现的一对同源。这导致了多功能价的性质。即能同时结合至少两个不同的表面决定簇。这些杂合子当然可以用嵌合链生成。正如在此所用的，术语“单克隆抗体”指识别分隔的抗原决定簇。考虑抗体的来源或其制备方法并不应作为对它的限定。对于本专利技术，如果抗体或多肽结合或能够结合CD33(用标准抗体-抗原或配体-受体试验，例如竞争试验，饱和试验，或标准免疫试验如ELISA或RIA测量或测定的蛋白质)，该抗体或多肽对CD33具特异性。这种特异性的定义也用于单条重和/或轻链，CDRs，融合蛋白或重和/或轻链的片断，如果它们本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种组合物，其特征在于含有对ＣＤ３３蛋白的抗原区显示结合特异性的蛋白质与细胞生长调节剂的结合物。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：MG罗森布拉姆，
申请(专利权)人：研究发展基金会，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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