一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒。所述检测试剂盒包括：链霉亲和素磁微粒、生物素标记的新型冠状病毒抗原、吖啶磺酰胺标记的二抗、样本稀释液和质控品；所述生物素标记的新型冠状病毒抗原包括重组核衣壳蛋白和重组棘突蛋白S1。将待检样本、生物素标记抗原与链霉亲和素磁微粒混合，孵育和洗涤，再加入吖啶磺酰胺标记的抗体，形成磁微粒‑链霉亲和素‑生物素‑抗原‑新型冠状病毒抗体‑二抗复合物，进而检测发光强度实现对待测样品的定性。

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒
本专利技术属于免疫分析检测
，涉及一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒。
技术介绍
冠状病毒是一类具外套膜（envelope）的单股正链RNA病毒，直径约60~220nm，广泛存在与人和其它哺乳动物之间。大多数冠状病毒感染为轻症感染，但仍有两种冠状病毒曾爆发肆虐，引起严重后果：重症急性呼吸道综合征冠状病毒（SARS-CoV）和中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）。新型冠状病毒（2019-nCoV）可经呼吸道飞沫、接触等传播，具有较强的人与人传染能力，其基本再生数R0约为2.2（90%高密度区间1.4-3.8）。该病毒感染最常见的症状为发烧、咳嗽、肌痛或疲劳，所有患者均并发肺炎，胸部CT检查发现异常。部分患者在一周后出现呼吸困难，严重者病情进展迅速，数日内即可出现急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。总体而言，新型冠状病毒引起的严重呼吸系统疾病。目前，新型冠状病毒肺炎诊断方法主要包括影像学诊断、分子诊断和血清学诊断，血清学诊断方法包括胶体金法、酶联免疫法和化学发光法。然而，影像学诊断存在异病同影问题，特异度低，易出现假阳性结果；分子诊断特异度高，但灵敏度低，易出现假阴。对于血清学诊断方法，胶体金法灵敏度高，但特异度低，易出现假阳性；酶联免疫法需要手工操作，存在生物安全风险。因此，利用化学发光法提供一种检测准确度高、特异性好且减少生物安全风险的检测试剂盒，对新型冠状病毒的检测和诊断具有重要的意义。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，同时还提供了所述检测试剂盒的制备方法和使用方法。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，包括：链霉亲和素磁微粒、生物素标记的新型冠状病毒抗原、吖啶磺酰胺标记的二抗、样本稀释液和质控品；所述生物素标记的新型冠状病毒抗原包括重组核衣壳蛋白和重组棘突蛋白S1。所述重组核衣壳蛋白中利用寡聚脯氨酸残基连接原始核衣壳蛋白的优势表位，并利用寡聚赖氨酸残基形成C端；所述重组棘突蛋白S1中利用寡聚脯氨酸残基连接原始棘突蛋白S1的优势表位，并利用寡聚赖氨酸残基形成C端。本专利技术中，所述检测试剂盒的检测原理为：基于链霉亲和素磁微粒的化学发光，将待检样本、生物素标记抗原与链霉亲和素磁微粒混合，孵育和洗涤，再加入信号物标记二抗，进行二次孵育和洗涤。若如样本中存在新型冠状病毒IgM抗体，则形成磁微粒-链霉亲和素-生物素-抗原-新型冠状病毒IgM抗体-二抗复合物，通过二抗上标记的信号物读取待测样本的发光强度数值。所述信号物可以是吖啶酯、吖啶磺酰胺、碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶，本专利技术中优选吖啶磺酰胺。本专利技术使用寡聚脯氨酸残基-(P)n-连接这些优势表位，形成一条串联预测优势表位且易伸展弯曲的重组抗原，利于抗体对优势表位的结合，提高检测灵敏度。以寡聚赖氨酸残基-(K)n-形成C端，由于赖氨酸残基有1个多余的氨基，便于与生物素、吖啶酯、羧基磁微粒等标记物的偶联，一方面能增大重组抗原与标记物的结合概率，同时当重组抗原通过C端寡聚赖氨酸残基与固相载体结合时，N端的抗原表位更容易与抗体接触；另一方面能够降低重组抗原中优势表位与标记物的结合概率，防止表位被标记物遮挡，导致抗体识别困难。本专利技术中，所述检测试剂盒能够检测新型冠状病毒IgM和IgG抗体，可根据需要检测的抗体类型调整二抗的种类，例如检测IgM时，可选用羊抗人IgM抗体作为二抗，检测IgG时，可选用羊抗人IgG抗体作为二抗。同时，本专利技术选择以生物素标记抗原、以吖啶磺酰胺标记二抗，检测时采用的是间接法而非捕获法（捕获法：以生物素标记二抗，以吖啶磺酰胺标记抗原），该方法能提高所得试剂盒检测结果的准确度。本专利技术中，将核衣壳蛋白和棘突蛋白S1的质量比设置为(1~3):1，其中最优选为1.5:1，相比于单独使用核衣壳蛋白或棘突蛋白S1，或使用其他比例，例如分别按照4:1、2:3、1:4的比例混合，核衣壳蛋白和棘突蛋白S1比例为3:2时样本之间的区分度较大。作为本专利技术优选的技术方案，所述生物素标记的新型冠状病毒抗原中，活化生物素（Sulfo-NHS-LC-Biotin）与新型冠状病毒抗原的质量比为(0.06~0.48):1；例如可以是0.06:1、0.1:1、0.12:1、0.15:1、0.2:1、0.25:1、0.3:1、0.4:1或0.48:1等，优选为0.24:1。在制备过程中，取新型冠状病毒核衣壳蛋白和棘突蛋白S1置于玻璃器皿内，用0.02MPBS缓冲液将新型冠状病毒核衣壳蛋白和棘突蛋白S1稀释；取12μL的10mg/mL的Sulfo-NHS-LC-Biotin溶液加入到上述抗原缓冲液中，混匀，避光置于室温2小时；用0.02MPBS缓冲液在2~8℃环境中过夜透析，得到生物素标记抗原母液；添加12μL的样品相对于添加3、6和24μL的样品，其筛选区分度较大。优选地，所述重组核衣壳蛋白包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。SEQIDNO.1为：GGPSDSTGSNQNGERSGARSKQRRPQGLPNNTPPPALNTPKDHIGTRNPANNPPPGFYAEGSRGGSQASSRSSSRSRNSSRNSTPGSSRGTSPARMAGNGGDPPPLESKMSGKGQQQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKPPPAFGRRGPEQTQGNFGDQELIRQGTDYKHWPPPKLDDKDPNFKDQPPPTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVPPPLDDFSKQLQQSMSSADSTQAKKK；其中，下划线所示均为重组核衣壳蛋白的优势表位。原始核衣壳蛋白的序列如SEQIDNO.2所示：MSDNGPQNQRNAPRITFGGPSDSTGSNQNGERSGARSKQRRPQGLPNNTASWFTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRATRRIRGGDGKMKDLSPRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTPKDHIGTRNPANNAAIVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQASSRSSSRSRNSSRNSTPGSSRGTSPARMAGNGGDAALALLLLDRLNQLESKMSGKGQQQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKAYNVTQAFGRRGPEQTQGNFGDQELIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGTWLTYTGAIKLDDKDPNFKDQVILLNKHIDAYKTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDFSKQLQQSMSSADSTQA。用DNAStarProtean软件分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，包括：/n链霉亲和素磁微粒、生物素标记的新型冠状病毒抗原、吖啶磺酰胺标记的二抗、样本稀释液和质控品，所述生物素标记的新型冠状病毒抗原中包括重组核衣壳蛋白和重组棘突蛋白S1；/n所述重组核衣壳蛋白中利用寡聚脯氨酸残基连接原始核衣壳蛋白的优势表位，并利用寡聚赖氨酸残基形成C端；/n所述重组棘突蛋白S1中利用寡聚脯氨酸残基连接原始棘突蛋白S1的优势表位，并利用寡聚赖氨酸残基形成C端；/n所述重组核衣壳蛋白包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；/n所述重组棘突蛋白S1包括如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，包括：
链霉亲和素磁微粒、生物素标记的新型冠状病毒抗原、吖啶磺酰胺标记的二抗、样本稀释液和质控品，所述生物素标记的新型冠状病毒抗原中包括重组核衣壳蛋白和重组棘突蛋白S1；
所述重组核衣壳蛋白中利用寡聚脯氨酸残基连接原始核衣壳蛋白的优势表位，并利用寡聚赖氨酸残基形成C端；
所述重组棘突蛋白S1中利用寡聚脯氨酸残基连接原始棘突蛋白S1的优势表位，并利用寡聚赖氨酸残基形成C端；
所述重组核衣壳蛋白包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；
所述重组棘突蛋白S1包括如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述重组核衣壳蛋白与重组棘突蛋白S1的质量比为(1~3):1；
所述生物素标记的新型冠状病毒抗原中，生物素与新型冠状病毒抗原的质量比为(0.06~0.48):1。


3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液中包含牛血清白蛋白、类风湿因子吸附剂、抑菌剂、尿素或阻断剂中的任意一种或至少两种的组合。


4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述质控品包括阳性质控品和阴性质控品；
所述阳性质控品为含新型冠状病毒抗体的缓冲液。


5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒抗体检测试剂盒中还包括激发液和洗涤液。


6.一种如权利要求1~5任一项所述的新型冠状病毒抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春龙，张舟，马少华，王家顺，粟艳，周泽奇，
申请(专利权)人：丹娜天津生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12