GM-CSF因子作为生物标志物在筛选辅助生殖移植胚胎中的应用及方法技术

本发明专利技术涉及GM‑CSF因子作为生物标志物在筛选辅助生殖移植胚胎中的应用及方法，该方法以GM‑CSF因子作为生物标志物，胚胎的囊胚培养液中所述GM‑CSF因子浓度的高低与所述胚胎的移植成功率正相关。移植成功是指筛选出的胚胎移植后能够妊娠，所述妊娠包括HCG阳性、临床妊娠、继续妊娠。所述HCG阳性为移植后11天检测血清或尿液中妊娠标志物HCG为阳性。所述临床妊娠指移植后30天经阴道超声发现宫内妊娠囊。所述继续妊娠为，妊娠超过3个月。该方法还可以与形态学评分结合，GM‑CSF因子的浓度越高且形态学评分质量越优的胚胎移植成功率越高。

【技术实现步骤摘要】
GM-CSF因子作为生物标志物在筛选辅助生殖移植胚胎中的应用及方法
本专利技术涉及辅助生殖领域，具体而言，涉及GM-CSF因子作为生物标志物在筛选辅助生殖移植胚胎中的应用及方法。
技术介绍
不孕不育已成为当下十分严峻的重大社会问题，人类辅助生殖技术(AssistedReproductiveTechnology，ART)是目前治疗不孕不育症最有效的治疗方法。尽管ART技术日趋成熟，但依然存在一些急需解决的难题，如卵子利用率偏低、多胎妊娠率高、平均移植周期数多等。这些问题产生的一个重要原因在于目前ART技术中基于胚胎的形态学评分的移植胚胎挑选方法比较单一，存在主观性强、标准不统一、准确性差等问题。所以据此选择的“优质”胚胎种植率仍较低，仅35％左右，流产率达到15％左右。低的胚胎种植率会增加患者的平均移植周期数，给患者带来巨大的经济和精神压力。与此同时，为提高患者妊娠率，临床医生往往会选择移植2-3个胚胎，这势必会导致多胎妊娠率的提高，目前国内各中心的多胎妊娠率约为30％，众所周知，多胎妊娠对孕妇和子代均存在安全隐患。找到与妊娠结局相关的因子，作为移植胚胎挑选的生物标志物，开展基于生物标志物的移植胚胎无创优选方法，有助于推动目前辅助生殖技术的发展，为患者带来更加精确和优质的治疗。胚胎生长发育过程中存在普遍的蛋白分泌现象，胚胎分泌蛋白与胚胎的相关功能密切相关。通过对胚胎分泌蛋白进行分析，能够真实客观地反映胚胎的相关功能是否健全。巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种多功能的细胞因子，研究表明在早期胚胎中GM-CSF已有表达，并起到促进囊胚形成，阻止内细胞团凋亡等作用，除此之外GM-CSF还与胚胎植入密切相关，参与妊娠过程母体免疫环境的建立和维持。Logit模型又称逻辑回归，是离散选择法模型之一。受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve，简称ROC曲线)，又称为感受性曲线(sensitivitycurve)，是以真灵敏性为纵坐标，特异性为横坐标绘制的曲线。而ROC的曲线下面积AUC(AreaUnderRocCurve)是一种用来度量分类模型好坏的一个标准。采用上述两种方式评价一个因子的预测价值，其结果客观有效。尽管GM-CSF因子与妊娠结局的关系已有报道，但目前尚无研究对胚胎条件培养液(embryonicconditionedmedium，ECM)GM-CSF浓度进行定量检测，ECM中GM-CSF与妊娠结局的关系尚未建立，也并无研究对ECM中GM-CSF作为生物标志物用于妊娠结局预测或移植胚胎挑选进行报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供GM-CSF因子作为生物标志物在筛选辅助生殖移植胚胎中的应用及方法。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种用于筛选辅助生殖移植胚胎的生物标志物，所述生物标志物为GM-CSF因子，所述GM-CSF因子的浓度与辅助生殖胚胎的移植成功率正相关。进一步，所述GM-CSF因子浓度范围在其最低检出限至487.59fg/mL之间，其浓度与辅助生殖胚胎的移植成功率正相关。本专利技术提供一种筛选辅助生殖移植胚胎的方法，所述方法使用如上述的GM-CSF因子作为生物标志物，筛选出胚胎囊胚培养液中GM-CSF因子浓度在高浓度范围内的胚胎，筛选出的所述胚胎具有高的移植成功率。进一步，所述移植成功指胚胎移植后能够实现妊娠；所述妊娠包括HCG呈阳性、实现临床妊娠以及实现继续妊娠；所述HCG呈阳性为移植后11天检测血清或尿液中妊娠标志物HCG为阳性；所述实现临床妊娠指移植后30天经阴道超声发现宫内妊娠囊；所述实现继续妊娠为，妊娠超过3个月。进一步，所述GM-CSF因子的高浓度范围为3.72fg/mL～487.59fg/mL。。进一步，包括如下步骤：1)收集囊胚培养液：卵子取出后实施受精操作，观察受精情况，将受精卵转移至卵裂期培养液滴中培养，随后被转移至囊胚培养液滴中，胚胎在囊胚培养滴中培养直至形成囊胚，囊胚移植或冷冻后收集囊胚培养液滴；2)检测所述步骤1)中的囊胚培养液滴中的GM-CSF因子浓度；3)筛选所述步骤2)中检测的GM-CSF因子浓度在高浓度范围内的胚胎。进一步，所述步骤1)中，所述受精操作后，等待16～18小时再观察受精情况。进一步，所述步骤1)中，所述受精卵在卵裂期培养液滴中培养三天，第三天形成D3卵裂期胚胎。进一步，其特征在于，将所述GM-CSF因子的浓度与形态学评分结合，分别检测胚胎囊胚培养液中GM-CSF因子的浓度和胚胎形态学评分，筛选同时具有高浓度的GM-CSF因子以及高得分的形态学评分的胚胎。本专利技术提供一种如上所述的生物标志物的应用，所述GM-CSF因子的浓度用于筛选具有高移植成功率的的胚胎。本专利技术的有益效果在于，通过定量检测胚胎囊胚培养液中的GM-CSF因子的浓度，直接预测该胚胎的移植成功率，通过ROC分析评价GM-CSF因子的浓度具有高于现有技术中的形态学评分的预测方法的准确性，因此能够有效预测妊娠结局，并且更具客观性。同时将GM-CSF因子的浓度与现有技术中的形态学评分的预测方法相结合，能够使预测结果更加准确可靠。本专利技术通过具体的概率统计方法评估了以GM-CSF因子的浓度作为重要指标的预测方法具有高的预测价值。附图说明图1为本专利技术囊胚培养液中不同GM-CSF因子浓度分组的样品所对应的胚胎的HCG阳性率的柱形图；图2为本专利技术囊胚培养液中不同GM-CSF因子浓度分组的样品所对应的胚胎的临床妊娠率的柱形图；图3为本专利技术囊胚培养液中不同GM-CSF因子浓度分组的样品所对应的胚胎的继续妊娠率的柱形图；图4为本专利技术采用囊胚培养液中GM-CSF浓度预测所对应的胚胎HCG为阳性的ROC曲线；图5为本专利技术采用囊胚培养液中GM-CSF浓度预测所对应的胚胎临床妊娠的ROC曲线；图6为本专利技术采用囊胚培养液中GM-CSF浓度预测所对应的胚胎继续妊娠的ROC曲线；图7为本专利技术采用形态学评分预测所对应的胚胎HCG为阳性的ROC曲线；图8为本专利技术采用形态学评分预测所对应的胚胎临床妊娠的ROC曲线；图9为本专利技术采用形态学评分预测所对应的胚胎继续妊娠的ROC曲线；图10本专利技术采用囊胚培养液中GM-CSF浓度结合形态学评分预测所对应的胚胎HCG为阳性的ROC曲线；图11为本专利技术采用囊胚培养液中GM-CSF浓度结合形态学评分预测所对应的胚胎临床妊娠的ROC曲线；图12为本专利技术采用囊胚培养液中GM-CSF浓度结合形态学评分预测所对应的胚胎继续妊娠的ROC曲线。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。本专利技术的一种GM-CSF因子作为生物标志物在筛选辅助生殖移植胚胎中的应用及方法，包括如下步骤：1)收集囊胚培养液：根据患者自身情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于筛选辅助生殖移植胚胎的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为GM-CSF因子，所述GM-CSF因子的浓度与辅助生殖胚胎移植成功率正相关。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于筛选辅助生殖移植胚胎的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为GM-CSF因子，所述GM-CSF因子的浓度与辅助生殖胚胎移植成功率正相关。


2.根据权利要求1一种用于筛选辅助生殖移植胚胎的生物标志物，其特征在于，所述GM-CSF因子浓度范围在其最低检出限至487.59fg/mL之间，其浓度与辅助生殖胚胎移植成功率正相关。


3.一种筛选辅助生殖移植胚胎的方法，其特征在于，所述方法使用如权利要求1所述的GM-CSF因子作为生物标志物，筛选出胚胎囊胚培养液中GM-CSF因子浓度在高浓度范围内的胚胎，筛选出的所述胚胎具有高的移植成功率。


4.根据权利要求3所述一种筛选辅助生殖移植胚胎的方法，其特征在于，所述移植成功率高是指，筛选出的胚胎移植后能够实现妊娠的可能性大；其中，所述妊娠包括HCG呈阳性、实现临床妊娠以及实现继续妊娠；
所述HCG呈阳性为移植后11天检测血清或尿液中妊娠标志物HCG为阳性；
所述实现临床妊娠指移植后30天经阴道超声发现宫内妊娠囊；
所述实现继续妊娠为，妊娠超过3个月。


5.根据权利要求3所述一种筛选辅助生殖移植胚胎的方法，其特征在于，所述GM-CSF因子的高浓度范围为3.72fg/mL～487.59fg/mL。

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【专利技术属性】
技术研发人员：陈培林，孙青，刁梁辉，黄春宇，钟惠娴，熊风，刘苏，姚志鸿，李玉叶，李龙飞，曾勇，
申请(专利权)人：深圳中山泌尿外科医院，
类型：发明
国别省市：广东;44