一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡制造技术

本实用新型专利技术公开了一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡，包括外壳，设置在外壳上的观察孔、加样孔，以及设置在外壳内的检测试纸条，所述检测试纸条包括底板，所述底板上依次衔接有虑血膜、样品垫、金标垫、NC膜和吸水垫，所述金标垫上喷涂有胶体金‑SPA探针，胶体金‑羊抗人IgM探针，胶体金‑羊抗人IgG探针，所述NC膜上依次设置有检测线T和质控线C，所述检测线T上包被有基因工程表达的新型冠状病毒S蛋白、N蛋白。相较于现有技术本实用新型专利技术的灵敏度高、操作简便、结果判读直观、特异性好以及成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡
本技术涉及病毒抗体检测领域，具体涉及一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡。
技术介绍
新型冠状病毒肺炎是一种由新型冠状病毒(COVID-19)引起的传染较强的肺炎，部分重症患者可出现呼吸窘迫综合征或脓毒症休克，甚至死亡。胶体金免疫层析技术是一种较为成熟的免疫学检测技术，目前已经广泛应用于临床的一种检测手段另外在食品安全领域对于农兽药的检测、宠物、动物的疾病诊断中也有很广泛的应用。该技术操作简便、整个检测过程耗费时间短、判读结果肉眼可视直观、不需要检测设备和较专业的检测人员。新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡可以一次采样加样后可同时检测血液样本中是否含有新型冠状病毒IgG/IgM抗体，其可作为临床医生的重要参考。可在目前快速增长的大量疑似患者、无症状感染者的排查中发挥重要作用。
技术实现思路
本技术提供了一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡，具有检测时间短、操作简单、无需其他仪器和专业操作的人员，结果判断直观可靠，适合用于基层医疗机构和疾控部门大批量样本的检测。本技术采用的技术方案如下：一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡，包括外壳，设置在外壳上的观察孔、加样孔，以及设置在外壳内的检测试纸条，所述检测试纸条包括底板，所述底板上依次衔接有虑血膜、样品垫、金标垫、NC膜和吸水垫，所述金标垫上喷涂有胶体金-SPA探针，胶体金-羊抗人IgM探针，胶体金-羊抗人IgG探针，所述NC膜(NC膜即硝酸纤维素膜)上依次设置有检测线T和质控线C，所述检测线T上包被有基因工程表达的新型冠状病毒(COVID-19)S蛋白、N蛋白。优选的，所述外壳内平行设置有至少2条检测试纸条。优选的，所述底板上依次衔接的虑血膜、样品垫、金标垫、NC膜和吸水垫中的相邻部分依次重叠2-3mm。优选的，所述质控线C上包被有兔抗羊二抗质。优选的，所述检测线T和质控线C平行设置。优选地，所述的底板为PVC底板接下来对本技术的胶体金-SPA探针的制备、胶体金-鼠抗人IgG探针的制备、胶体金-鼠抗人IgM探针的制备、检测线T、质控线C的制备、金标垫的制备、样品垫的制备以及检测卡的组装的方式进行详细的阐述：1：胶体金探针的制备洗干净的300ml三角瓶中加100ml超纯水置恒温加热磁力搅拌器上加热至沸腾，加入1ml2％的氯金酸溶液，重新沸腾后再快速的加入1.5ml2％的二水柠檬酸三钠溶液，继续加热至沸腾后15min停止加热，恢复至室温后加入超纯水恢复至原体积，4℃保存备用。2：胶体金-SPA探针的制备胶体金溶液在磁力搅拌器的搅拌下用0.2mol/L的碳酸钾把胶体金溶液的pH调至6.0。按每毫升胶体金溶液中加入16微克的量加入SPA，室温搅拌60min后加入10％的BSA溶液至终浓度为1％，室温下继续搅拌60min。搅拌停止后4℃以5000r/min的转速离心10min，收集离心管底部沉淀，上层胶体金溶液4℃以8500r/min的转速离心20min，收集离心管底部沉淀，弃上清。两次收集的胶体金沉淀用复溶液按照标记时胶体金溶液体积的1/25复溶。4℃保存备用。复溶液为20mMpH为7.4的PB缓冲液，其中BSA含量为1％，吐温-20为0.5％，PVP-40为1.5％，海藻糖为2％，蔗糖为5％。3：胶体金-鼠抗人IgG探针的制备胶体金溶液在磁力搅拌器的搅拌下用0.2mol/L的碳酸钾把胶体金溶液的pH调至8.0。按每毫升胶体金溶液中加入16微克的量加入鼠抗人IgG单克隆抗体。室温搅拌60min后加入10％的BSA溶液至终浓度为1％，室温下继续搅拌60min。搅拌停止后4℃以5000r/min的转速离心10min，收集离心管底部沉淀，上层胶体金溶液4℃以8500r/min的转速离心20min，收集离心管底部沉淀，弃上清。两次收集的胶体金沉淀用复溶液按照标记时胶体金溶液体积的1/25复溶。4℃保存备用。复溶液为20mMpH为7.4的PB缓冲液，其中BSA含量为1％，吐温-20为0.5％，PVP-40为1.5％，海藻糖为2％，蔗糖为5％。4：胶体金-鼠抗人IgM探针的制备胶体金溶液在磁力搅拌器的搅拌下用0.2mol/L的碳酸钾把胶体金溶液的pH调至8.0。按每毫升胶体金溶液中加入16微克的量加入鼠抗人IgM单克隆抗体。室温搅拌60min后加入10％的BSA溶液至终浓度为1％，室温下继续搅拌60min。搅拌停止后4℃以5000r/min的转速离心10min，收集离心管底部沉淀，上层胶体金溶液4℃以8500r/min的转速离心20min，收集离心管底部沉淀，弃上清。两次收集的胶体金沉淀用复溶液按照标记时胶体金溶液体积的1/25复溶。4℃保存备用。复溶液为20mMpH为7.4的PB缓冲液，其中BSA含量为1％，吐温-20为0.5％，PVP-40为1.5％，海藻糖为2％，蔗糖为5％。5：检测线T、质控线C的制备检测线T包被液中新型冠状病毒S蛋白和N蛋白的浓度均为0.5mg/ml。用划膜仪按照1ul/cm的参数包被于硝酸纤维素膜上。质控线C包被液中含有羊抗鼠二抗浓度为1mg/ml。用划膜仪按照1ul/cm的参数包被于硝酸纤维素膜上，包被液为含有2％蔗糖的0.01MPBS磷酸盐缓冲液。6：金标垫的制备用金标垫处理液浸泡后的玻璃纤维于37℃鼓风干燥箱中烘干，烘干后的金标垫密封干燥保存备用。金标垫处理液中为0.02MpH8.5的Tris-HCL缓冲液，其中含有1％BSA、0.5％PVP-40、蔗糖1.5％、0.3％吐温-20。将制备好的胶体金-SPA探针，和胶体金-鼠抗人IgG按照1:1的比例混合后用喷金仪按照2.0ul/cm的喷金参数喷涂于处理好的玻璃纤维上。将制备好的胶体金-鼠抗人IgM探针用喷金仪按照2.0ul/cm的喷金参数喷涂于处理好的玻璃纤维上。喷涂好的金标垫置于37℃鼓风干燥箱中烘干，烘干后的金标垫干燥密封保存。7：样品垫的制备用样品垫处理液浸泡后的玻璃纤维于37℃鼓风干燥箱中烘干，烘干后的样品垫密封干燥保存备用。8：检测卡的组装在湿度低于30％的环境下将制备好的金标垫、样品垫、虑血膜依次粘贴到PVC底板上。用切条机按照4mm/条的参数切条，并装在相应的检测卡中。相较于现有技术，本技术的有益效果是：(1)灵敏度高：检测线T线上同时包被有基因工程表达的新型冠状病毒(COVID-19)S蛋白和N蛋白提高了目标抗体的结合能力，另外在IgG的检测条的金标垫上喷涂有胶体金-羊抗人IgG探针和胶体金-SPA(StaphylococalProteinA)探针提高了样本中抗体的捕获能力；(2)操作简便：只需要10ul的全血或血清、血浆样本，加入到稀释液中充分混匀，然后取80ul混匀好的样本加入加样空中，检测卡放平10分钟后判读结果；(3)结果判读直观：当检测线T和质控本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡，包括外壳(1)，设置在外壳(1)上的观察孔(3)、加样孔(2)，以及设置在外壳(1)内的检测试纸条(4)，所述检测试纸条(4)包括底板(401)，其特征在于，所述底板(401)上依次衔接有虑血膜(402)、样品垫(403)、金标垫(404)、NC膜和吸水垫(408)，所述金标垫(404)上喷涂有胶体金-SPA探针，胶体金-羊抗人IgM探针，胶体金-羊抗人IgG探针，所述NC膜(407)上依次设置有检测线T(405)和质控线C(406)，所述检测线T(405)上包被有基因工程表达的新型冠状病毒S蛋白、N蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡，包括外壳(1)，设置在外壳(1)上的观察孔(3)、加样孔(2)，以及设置在外壳(1)内的检测试纸条(4)，所述检测试纸条(4)包括底板(401)，其特征在于，所述底板(401)上依次衔接有虑血膜(402)、样品垫(403)、金标垫(404)、NC膜和吸水垫(408)，所述金标垫(404)上喷涂有胶体金-SPA探针，胶体金-羊抗人IgM探针，胶体金-羊抗人IgG探针，所述NC膜(407)上依次设置有检测线T(405)和质控线C(406)，所述检测线T(405)上包被有基因工程表达的新型冠状病毒S蛋白、N蛋白。


2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgG/IgM二联胶体金抗体检测卡，其特征在于，所述外壳(1)内平行设置有至少2条检测试纸条(4)。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘海森，宁波，蒋永青，张金超，黄英霞，周卓，
申请(专利权)人：深圳市绿诗源生物技术有限公司，东莞市森迈德生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：广东;44