PL2L60蛋白在制备早期筛查或诊断肿瘤试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，提供了PL2L60蛋白作为肿瘤诊断标记物的应用，具体涉及PL2L60蛋白在制备早期筛查或诊断肿瘤试剂盒中的应用，所述的筛查或诊断肿瘤试剂指的是筛查或诊断肿瘤干细胞或肿瘤祖细胞的试剂，所述的肿瘤是指白血病、淋巴癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、胰腺癌、结肠癌或肝癌。研究结果表明，PL2L60蛋白具有肿瘤特异性和肿瘤广谱性，尤其在肿瘤干/祖细胞表面的特异性表达，以PL2L60为靶标，不但可以研发高效抗体药、细胞治疗技术和肿瘤疫苗，而且可以研发出肿瘤早期诊断试剂，为肿瘤诊断和治疗的进步作出贡献，有利于推动临床肿瘤免疫治疗，具有广阔的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
PL2L60蛋白在制备早期筛查或诊断肿瘤试剂盒中的应用
本专利技术属于生物医学检测领域，涉及PL2L60蛋白作为肿瘤标记物的应用，具体涉及PL2L60蛋白抗体制备早期筛查或诊断肿瘤试剂盒中的应用。
技术介绍
目前，免疫疗法是探索肿瘤治疗新方法的热点。越来越多的证据表明，要治愈肿瘤需要免疫疗法的配合。免疫疗法主要包括抗体介导的被动免疫疗法和以激活肿瘤特异性免疫细胞为特征的主动免疫疗法。主动免疫疗法可以包括：(1)特异性肿瘤疫苗，(2)免疫生物调节剂(Immunomodulators)和(3)免疫细胞疗法。目前，临床上免疫疗法比较成功的是以PD-1为靶标的抗体药。其它疗法如免疫细胞疗法等不尽人意。即使CART疗法，也只能是肿瘤免疫治疗的过渡性方案。但是，以PD-1为靶标的免疫疗法有很大的局限性。开始认为抗PD-1抗体阻断抗肿瘤免疫反应中的免疫检查点，可以激活抗肿瘤免疫系统。实践证明，这一假设不成立。事实是，抗PD-1抗体是通过直接识别肿瘤细胞表面表达PD-1，激活ADCC通路而直接杀伤肿瘤细胞，而不是通过阻断PD-1/PD-L1免疫抑制点起作用。由于多数肿瘤不表达PD-1，故抗PD-1抗体药的应用受到很大的限制。此外，2010年4月29日FDA批准的唯一的一个用于治疗晚期前列腺癌的肿瘤疫苗(实为免疫细胞)产品PROVENGE(sipuleucelT)由于其临床效果差而面临失败。总之，由于缺乏肿瘤特异性地广谱肿瘤抗原，无论被动免疫治疗还是主动免疫治疗都遭遇目前难以逾越的瓶颈。要克服目前免疫疗法的瓶颈，需要找到既有肿瘤特异性又有肿瘤广谱性的肿瘤生物标志物(Tumor-specificantigen；TSA)。目前，国内外药企正在研发的肿瘤靶标一般不具有肿瘤特异性和肿瘤广谱性，所以，难以在肿瘤免疫治疗方面有里程碑式的突破。目前，肿瘤免疫治疗的突破需要克服以下几个瓶颈：(1)需要肿瘤特异性和广谱性的靶标(TSA)，特别是这些靶标可表达在肿瘤干/祖细胞；(2)制备相应高效细胞毒性抗体(被动免疫治疗)；(3)具有不受MHC约束并可被抗原递呈细胞(APC)有效递呈的多肽序列；(4)具有培养、扩增免疫功能正常(Immunocmpetent)且不产生免疫耐受(Immunotolerant)的免疫细胞的技术，包括树突状细胞(Dendriticcell；DC)和杀伤细胞(Killer)。如果克服这些瓶颈，肿瘤免疫治疗的时代才会真正到来。但现有技术中，尚无文献对能够在多种肿瘤中特异性表达的基因或蛋白进行记载。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人通过多年潜心研究发现和鉴定了肿瘤干/祖细胞特异性蛋白PL2L60，它是新型肿瘤干细胞标志物。另外，制备了高效抗PL2L60抗体，从PL2L60蛋白筛选了具有较强免疫原性的多肽，并在动物试验中证实PL2L60是肿瘤免疫治疗的重要靶标。基于PL2L60的肿瘤免疫治疗方案可以突破当前免疫治疗的瓶颈，有效解决上述问题。PL2L60是生殖干细胞基因PIWIL2在肿瘤中异化激活的产物PIWIL2一般表达在生殖干细胞中，在精子生成过程中，通过piwi-piRNA通路参与细胞核重编程或染色质重塑(chromatinremodeling)；还可通过DNA甲基化调节反转录转座子的活性。但是，正常情况下在体细胞中不表达。当体细胞暴露在致癌坏境中，DNA受损，PIWIL2基因就会被激活，参与DNA损伤的修复，但是，过表达PIWIL2会诱导肿瘤细胞凋亡。因此，PIWIL2具有肿瘤屏障基因(TBG)的功能。但是，在致癌环境下，当PIWIL2基因内启动子被激活，产生异化激活的蛋白如PL2L60。PL2L60在正常细胞中不表达，主要在转化细胞和肿瘤干/祖细胞中表达，促进肿瘤的发生发展。肿瘤干细胞是肿瘤发生发展的种子细胞，抑制肿瘤干细胞就可以达到抑制甚至治愈肿瘤的目的。肿瘤干细胞可以从正常细胞转化成肿瘤起始干细胞(TIC)，经过癌前干细胞(pCSC)和癌症干细胞(CSC)发展为癌症祖细胞(CPC)，后者成为肿瘤发展的主要种子细胞。PL2L60在癌前干细胞、癌症干细胞、癌症祖细胞和肿瘤细胞株中均有表达，其表达水平与肿瘤细胞增殖能力正相关。更重要的是，PL2L60表达在各种血液肿瘤和实体瘤中，具有肿瘤特异性和广谱性。以PL2L60为靶标设计的免疫治疗方案，可以有效地防治各种血癌和实体瘤。PL2L60在癌前干细胞中高水平表达，是自然抗肿瘤免疫(NATI)的有效靶标。抗PL2L60单抗可同时识别人和小鼠的PL2L60，用抗PL2L60的单抗(KAO2和KAO3克隆)处理癌前干细胞可以有效阻断其在免疫缺陷小鼠中的致瘤能力，所以，从小鼠获得的结果很容易在人重复。最近，我们发现除细胞浆内，PL2L60也可以在部分肿瘤细胞株的表面表达，经鉴定，这些细胞表面表达PL2L60的肿瘤细胞具有肿瘤干/祖细胞的性质，提示单抗KAO2和KAO3对肿瘤的抑制作用可通过靶向肿瘤干/祖细胞起作用。癌前干细胞可以诱导自然抗肿瘤免疫，抑制癌前干细胞自身的致瘤作用。这种功能是免疫系统通过靶向癌前干细胞表达的PL2L60而发挥作用的，因为用PL2L60多肽致敏树突状细胞(DC-PL2L肿瘤疫苗)，可以激活抗肿瘤免疫，获得与癌前干细胞诱导的抗肿瘤免疫一样的效果。因此，PL2L60蛋白具备作为肿瘤标记物和肿瘤靶标的潜力。本专利技术的目的在于提供PL2L60蛋白作为肿瘤的分子标记物的应用，具体在于PL2L60蛋白在制备早期筛查或诊断肿瘤试剂或试剂盒中的应用。本专利技术的第一方面在于提供PL2L60蛋白在制备早期筛查或诊断肿瘤试剂或试剂盒中的应用。所述的筛查或诊断肿瘤试剂指的是筛查或诊断肿瘤干细胞或肿瘤祖细胞的试剂。所述的试剂盒中包括筛查或诊断肿瘤干细胞或肿瘤祖细胞的试剂。所述的肿瘤是指白血病、淋巴癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、胰腺癌、结肠癌或肝癌。进一步，在本专利技术提供的PL2L60蛋白在制备早期筛查或诊断Brachyury阳性肿瘤试剂或试剂盒中的应用中，所述的试剂包括PL2L60蛋白抗体以及对PL2L60蛋白的表达量进行定量或半定量检测的试剂，所述的试剂盒中包括PL2L60蛋白抗体以及对PL2L60蛋白的表达量进行定量或半定量检测的试剂。优选的，抗PL2L60蛋白抗体为KAO3单克隆抗体，KAO3单克隆抗体序列如SEQIDNO:1所示。专利技术的作用与效果本专利技术通过大量实验证实了PL2L60蛋白在正常细胞中不表达，主要在转化细胞和肿瘤干/祖细胞中表达，促进肿瘤的发生发展，而肿瘤干细胞或肿瘤祖细胞是肿瘤发生发展的种子细胞，通过检测PL2L60蛋白的表达量，就可能够实现对早期肿瘤的诊断，通过PL2L60蛋白抗体抑制肿瘤干细胞就可以达到抑制甚至治愈肿瘤的目的。此外，研究结果表明，PL2L60蛋白具有肿瘤特异性和肿瘤广谱性，尤其在肿瘤干/祖细胞表面的特异性表达，以PL2L60为靶标，不但可以研发高效抗体药、细胞治疗技术和肿瘤疫苗，而且可以研发出肿瘤早期诊断试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.PL2L60蛋白抗体在制备早期筛查或诊断肿瘤的试剂或试剂盒中的应用，所述抗体为KAO3单克隆抗体，所述KAO3单克隆抗体序列如SEQ ID NO:1所示，所述的筛查或诊断肿瘤试剂指的是筛查或诊断肿瘤干细胞或肿瘤祖细胞的试剂。/n

【技术特征摘要】
1.PL2L60蛋白抗体在制备早期筛查或诊断肿瘤的试剂或试剂盒中的应用，所述抗体为KAO3单克隆抗体，所述KAO3单克隆抗体序列如SEQIDNO:1所示，所述的筛查或诊断肿瘤试剂指的...

【专利技术属性】
技术研发人员：高建新，李林凤，陆虹旻，
申请(专利权)人：上海易范科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31