一种检测干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开一种检测干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒，包含：霉酚酸干血斑提取试剂、霉酚酸干血斑校准品和霉酚酸干血斑质控品。本发明专利技术还提供利用该试剂盒检测干血斑中霉酚酸药物浓度的检测方法。本发明专利技术的试剂盒具有试剂制备简单，样品所需量较少且便于储存运输，前处理快速，分析周期短，成本较低等优点，适合在临床常规检测中推广。

【技术实现步骤摘要】
一种检测干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒及检测方法
本专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种检测干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒及应用。
技术介绍
霉酚酸(mycophenolicacid，MPA)，也称麦考酚酸，是霉酚酸酯(Mycophenolatemofetil)的前体，霉酚酸酯口服后吸收迅速，绝对生物利用度高，在体内可迅速水解转化为霉酚酸，并分布于全身。MPA在体内可高效、选择性、非竞争性、可逆性地抑制次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)，从而阻断鸟嘌呤核苷酸的起始合成途径，使鸟嘌呤核苷酸耗竭，进而阻断DNA的合成。MPA选择性地作用于T、B淋巴细胞，抑制其增殖。在动物肾移植实验及临床肾移植中已证实麦考酚酯在肾移植后排斥反应的预防和难治性排斥的治疗中起着重要作用。作为抗代谢免疫抑制剂，霉酚酸酯以其低毒副作用的优点已经在实体器官移植中得到广泛应用。血药浓度监测会涉及到大量血样，目前在市售的检测霉酚酸含量的试剂盒都是以人血清或血浆作为检测样本，但常规的血浆、血清样本提取方式会存在较大的污染风险，而且所需样品量较大，储藏和运输条件要求也较高。目前已有的霉酚酸测定方法以比浊法、酶免疫法、荧光检测法、高效液相色谱法居多，这些方法自动化程度高、比较适合批量处理样品，但也存在内源性干扰较大、灵敏度较低的问题，代谢物会产生免疫交叉反应，导致结果正偏离。也有一些文献报道的液相色谱-质谱联用法虽然可以满足更低定量下限的要求，但前处理方法比较繁琐复杂，不适合广泛开展。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种快速灵敏的测定人干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒，以克服现有技术中污染风险较大、所需样品量较大、储藏和运输条件要求高、内源性干扰较大、灵敏度较低、前处理方法比较繁琐复杂、不适合广泛开展等缺陷。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种检测干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒，包含：霉酚酸干血斑提取试剂、霉酚酸干血斑校准品和霉酚酸干血斑质控品；所述霉酚酸干血斑提取试剂采用同位素取代的霉酚酸作为内标物；所述霉酚酸干血斑校准品为一组具有不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本，所述干血斑样本的数量为至少6个，所述干血斑样本固定于血斑采集卡；所述浓度梯度的浓度范围为500-15000ng/mL；所述霉酚酸干血斑质控品包括至少一组具有三个不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本，所述干血斑样本固定于血斑采集卡；所述三个不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本分别为低浓度质控样本(LQC样本)、中浓度质控样本(MQC样本)和高浓度质控样本(HQC样本)；其中，LQC样本中霉酚酸浓度为500～1500ng/mL，MQC样本中霉酚酸浓度为6000～9000ng/mL，HQC样本中霉酚酸浓度为10500～15000ng/mL。具体的，所述试剂盒还包括空白对照干血斑质控样本。所述空白对照干血斑质控样本为空白全血，其中不含有霉酚酸。预先点制于血斑采集卡上形成干血斑。所述空白对照干血斑质控样本的数量至少为2个。在一种优选的实施方式中，所述干血斑样本的血斑来源为兔血，兔血红细胞比容(HCT)值在30％-40％。在一种优选的实施方式中，所述同位素取代的霉酚酸为氢同位素取代。在一种优选的实施方式中，所述同位素取代的霉酚酸为霉酚酸-D3。在一种优选的实施方式中，所述内标提取试剂的溶剂为有机溶剂、水、或有机溶剂与水的混合物；所述有机溶剂为甲醇、或乙腈、或甲醇与乙腈的混合液；当内标提取试剂的溶剂为有机溶剂与水的混合物时，所述有机溶剂与水的体积比为(1.0～9.0):1；在一种优选的实施方式中，所述内标提取试剂的溶剂为甲醇与水的混合液，甲醇与水的体积比为(3.0～4.0):1。在一种优选的实施方式中，所述同位素取代的霉酚酸的浓度为10～100ng/mL。在一种优选的实施方式中，所述霉酚酸干血斑校准品中干血斑样本的数量为6个或7个或8个。所述干血斑样本是将血液样本点制于血斑采集卡上形成。在一种优选的实施方式中，所述霉酚酸干血斑质控品有两组。每组具有三个不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本，即低浓度质控样本(LQC样本)、中浓度质控样本(MQC样本)和高浓度质控样本(HQC样本)。本专利技术还提供上述试剂盒用于检测干血斑中霉酚酸药物浓度的检测方法，包括如下步骤：(1)样本前处理：利用干血斑打孔器打取各干血斑校准品的样本和待检测血斑的样本，加入霉酚酸内标提取试剂，振荡，离心，吸取上清液，上清液再离心，再吸取上清液作为进样样本；(2)将进样样本进LC-MS/MS进行分析检测，检测条件为：液相条件：a、流动相：流动相A+流动相B＝100％；流动相A：0.1％甲酸水溶液；流动相B：乙腈；b、液相条件：色谱柱：WatersACQUITYUPLCBEHC18，2.1mm×50mm，1.7μm；梯度洗脱程序：流动相A+流动相B＝100％；0～0.2min，流动相A体积保持80％；0.2～1.0min，流动相A体积由80％递减至10％；1.0～1.5min，流动相A体积保持10％；1.5～1.7min，流动相A体积由10％升高至80％；1.7～2.0min，流动相A体积保持80.0％；c、质谱条件：离子源：ESI+；锥孔电压：30V；去溶剂化温度：600℃；去溶剂化流速：1000L/Hr；锥孔流速：150L/Hr；雾化压力：7.0Bar；碰撞电压：36V；(3)结果分析：通过各校准品标示浓度(X)，校准品中霉酚酸和霉酚酸同位素内标的峰面积比值(Y)，绘制校准曲线，并拟合校准曲线方程；再将待检测血斑的霉酚酸的峰面积与霉酚酸同位素内标的峰面积比值，带入校准曲线方程，即可定量计算待检测血斑中霉酚酸的浓度。具体的，所述液相条件中，流速为0.6mL/min，柱温为40℃。具体的，所述质谱条件中，采集离子对为：霉酚酸的母离子321.2596；霉酚酸的子离子159.0387，207.1774；D3-霉酚酸的母离子324.2596；D3-霉酚酸的子离子160.6500，210.1744。具体的，所述方法中，采用试剂盒附有的高、中、低三个不同浓度的质控品对检测结果进行把控，并附有空白对照样品以对进样残留情况进行监测。本专利技术采用高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)技术将高效液相色谱仪(UPLC)与三重四极杆质谱仪(QQQ)联接在一起，用于检测全血中霉酚酸药物浓度，具有高选择性和高灵敏度，能够分析复杂基质样品中痕量目标化合物，具有快速而耐用的特点。本方法选用Waters的超高效液相色谱串联质谱系统作为霉酚酸血药浓度的检测仪器，采用MRM模式对目标化合物进行检测。具体来说，在第一重四极杆处，根据质荷比(m/z)对在离子源被离子化的待测物(即母离子)进行扫描，具有特定质荷比的母离子被允许进入碰撞室(第二重四极杆)。在碰撞室母离子被打碎成不同的特征子离子，进入第三重四极杆。第三重四极杆根据本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒，其特征在于，包含：霉酚酸干血斑提取试剂、霉酚酸干血斑校准品和霉酚酸干血斑质控品；/n所述霉酚酸干血斑提取试剂采用同位素取代的霉酚酸作为内标物；/n所述霉酚酸干血斑校准品为一组具有不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本，所述干血斑样本的数量为至少6个，所述干血斑样本固定于血斑采集卡；所述浓度梯度的浓度范围为500-15000ng/mL；/n所述霉酚酸干血斑质控品包括至少一组具有三个不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本，所述干血斑样本固定于血斑采集卡；所述三个不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本分别为低浓度质控样本、中浓度质控样本和高浓度质控样本；其中，低浓度质控样本中霉酚酸浓度为500～1500ng/mL，中浓度质控样本中霉酚酸浓度为6000～9000ng/mL，高浓度质控样本中霉酚酸浓度为10500～15000ng/mL。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒，其特征在于，包含：霉酚酸干血斑提取试剂、霉酚酸干血斑校准品和霉酚酸干血斑质控品；
所述霉酚酸干血斑提取试剂采用同位素取代的霉酚酸作为内标物；
所述霉酚酸干血斑校准品为一组具有不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本，所述干血斑样本的数量为至少6个，所述干血斑样本固定于血斑采集卡；所述浓度梯度的浓度范围为500-15000ng/mL；
所述霉酚酸干血斑质控品包括至少一组具有三个不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本，所述干血斑样本固定于血斑采集卡；所述三个不同浓度梯度的霉酚酸的干血斑样本分别为低浓度质控样本、中浓度质控样本和高浓度质控样本；其中，低浓度质控样本中霉酚酸浓度为500～1500ng/mL，中浓度质控样本中霉酚酸浓度为6000～9000ng/mL，高浓度质控样本中霉酚酸浓度为10500～15000ng/mL。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括空白对照干血斑质控样本；所述空白对照干血斑质控样本为空白全血，其中不含有霉酚酸。


3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述干血斑样本的血斑来源为兔血，兔血红细胞比容值在30％-40％。


4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述同位素取代的霉酚酸为氢同位素取代。


5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述同位素取代的霉酚酸为霉酚酸-D3。


6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述内标提取试剂的溶剂为有机溶剂、水、或有机溶剂与水的混合物；所述有机溶剂为甲醇、或乙腈、或甲醇与乙腈的混合液；当内标提取试剂的溶剂为有机溶剂与水的混合物时，所述有机溶剂与水的体积比为(1.0～9.0):1。


7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述内标提取试剂的溶剂为甲醇与水的混合液，甲醇与水的体积比为(3.0～4.0):1。


8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述同位素取代的霉酚酸的浓度为10～100ng/mL。


9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述霉酚酸干血斑校准品中干血斑样本的数量为6个或7个或8个。


10.如权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗稳，冉云，李晓芳，
申请(专利权)人：苏州药明泽康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32