一种银杏叶的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种银杏叶的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取银杏叶供试品进行检测，该检测的色谱条件包括：色谱柱：Agilent Eclipse Plus C183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸‑甲醇(A)：0.1％甲酸‑水(B)，所述检测的洗脱梯度为0‑3min：25％‑95％A；3‑6min：95％A；6‑7min：95％‑25％A；7‑8min：25％A。经方法学考察，确认本发明专利技术技术简便、快速、准确，可在短内完成多种指标成分的检测，是测定银杏叶多指标成分含量的有效手段。

【技术实现步骤摘要】
一种银杏叶的检测方法
本专利技术涉及检测方法，特别涉及一种采用液相色谱串联三重四极杆质谱法测定银杏叶的方法。
技术介绍
银杏叶为银杏科植物银杏(GinkgobilobaL.)的干燥叶。性甘、苦、涩、平，归心、肺经，具有活血化瘀、通经活络、敛肺平喘、化浊降脂等作用。银杏叶作为中药材，已广泛地运用到各类制剂产品中，主要用于冠状动脉性心脏病、心绞痛、高血脂等疾病的治疗。银杏内酯是银杏叶(Ginkgoleaf)中主要的有效成分之一，其结构主要为二萜和倍半萜类结构，是目前为止发现的唯一拥有叔丁基官能团的天然物质。研究表明，该类成分可特异性拮抗血小板活化因子(PAF)受体。银杏叶中常见的银杏内酯有银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯、银杏内酯J。银杏内酯类化合物的含量，对银杏叶制剂的疗效和内在质量起着关键的作用，而且是银杏叶及其提取物和植物药质量控制的重要依据。银杏酸(ginkgolicacids，GA)是银杏叶中主要的毒性物质，具有致敏性、胚胎毒性、细胞毒性及免疫毒性。也是引起临床不良反应的主要物质，具致敏性和致突变毒性。其中，银杏叶中具有多种银杏酸，而银杏酸的限量是评价银杏叶制剂质量的关键指标之一。目前已有银杏叶中银杏内酯类成分、银杏酸类成分的检测方法。对于银杏内酯类成分，因其紫外吸收较差，在检测时易受干扰，目前多采用高效液相色谱与蒸发光散射检测器(ELSD)联用法检测，但蒸发光散射检测器灵敏度低，目前多用于银杏叶提取物及制剂中银杏内酯类成分的检测。对于银杏酸类成分，目前主要采用高效液相色谱与二极管阵列检测器(DAD)联用法检测，多以白果新酸及银杏总酸作为对照，以此计算银杏叶及其制剂中银杏酸的含量，并不能反映出各类银杏酸在银杏叶及其制剂中的实际存在情况。并且分别检测两类成分需要进行不同的前处理，过程繁琐耗时，因此有必要采用灵敏度高的检测手段，建立一种可以同时测定银杏叶及其制剂中银杏内酯、银杏酸含量的快速、简便的方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是针对现有的技术存在的上述问题，提供一种通过HPLC-MS/MS法同时测定银杏叶中多指标成分含量的检测方法，本专利技术所要解决的技术问题是如何简便、快速、灵敏的测定银杏叶中多指标成分的含量。本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：一种银杏叶的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取银杏叶供试品进行检测，该检测的色谱条件包括：色谱柱：AgilentEclipsePlusC183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(A)：0.1％甲酸-水(B)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％A；3-6min：95％A；6-7min：95％-25％A；7-8min：25％A。进一步地，所述色谱条件还包括：柱温25～40℃，流速0.4～0.6mL/min。具体地，所述色谱条件包括：柱温40℃，流速0.6mL/min，进样量：1μL。进一步地，所述检测方法还包括对对照品溶液进行检测，该检测的色谱条件包括：色谱柱：AgilentEclipsePlusC183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(A)：0.1％甲酸-水(B)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％A；3-6min：95％A；6-7min：95％-25％A；7-8min：25％A；所述对照品可以选自银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯J、白果内酯、银杏酸C13:0、银杏酸C15:0、银杏酸C15:1、银杏酸C17:1、银杏酸C17:2中的一种或多种。根据以上对供试品或对照品的检测结果，可以获得银杏叶的成分信息，或成分及其含量信息。进一步地，所述检测方法中可选用的内标为甲苯磺丁脲。具体地，所述银杏叶供试品的制备可采用醇溶液进行提取处理；具体方法可包括：使用75％甲醇作为提取溶剂，银杏叶与所述75％甲醇溶液按0.2g:25mL的比例，超声提取，离心后取上清液，用纯甲醇溶液稀释，过0.22μm滤膜。更具体地，供试品的制备包括：银杏叶与75％-100％甲醇提取溶剂，按1：125～1：25的料液比，超声提取20～40min，离心后取上清液，用纯甲醇溶液稀释100倍，过0.22μm滤膜；优选地，称取0.2g银杏叶粉末，加入75％甲醇溶液25mL，称重后，超声提取30min，冷却至室温后，用75％的甲醇溶液补足减失的重量，离心后取上清液1mL，用纯甲醇溶液稀释100倍，过0.22μm滤膜，即得到银杏叶供试品溶液。具体地，所述对照品溶液制备方法包括：取对照品10mg，置20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成0.5mg/mL的对照品储备液。本专利技术还提出了一种快速测定银杏叶中多指标成分的方法，该方法采用超高效液相色谱-质谱联用技术对银杏叶进行检测；其中，所述超高液相-串联质谱的色谱条件包括：色谱柱：AgilentEclipsePlusC183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(A)：0.1％甲酸-水(B)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％A；3-6min：95％A；6-7min：95％-25％A；7-8min：25％A；所述超高效液相-串联质谱中的质谱为三重四极杆质谱。进一步地，所述色谱条件还包括：柱温25～40℃，流速0.3～0.45mL/min。具体地，所述色谱条件包括：柱温40℃，流速0.4mL/min，进样量：1μL。具体地，所述超高液相-串联质谱的质谱条件包括：负离子ESI电离源，三重四极杆检测器，离子源温度500℃，雾化气和辅助气为氮气，扫描方式为多反应监测模式(MRM)。进一步地，所述方法中可选用的内标为甲苯磺丁脲。具体地，所述多指标成分可包括银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯J、白果内酯、银杏酸。具体地，所述银杏酸可包括银杏酸C13:0、银杏酸C15:0、银杏酸C15:1、银杏酸C17:1或银杏酸C17:2。进一步地，所述多指标成分以及内标的质谱参数包括：本专利技术中的方法学考察可包括：线性关系考察：按前述方法制备对照品储备液适量，混合，再用甲醇溶液依次精密稀释，制备成系列对照品溶液，并在每个浓度对照品溶液中加入一定量的内标溶液，使内标液的浓度保持在20ng/mL；用前述的LC-MS/MS检测方法(超高效液相色谱-质谱联用技术)进行检测；以待测物的浓度(C，ng/mL)为横坐标，目标分析物与内标峰面积比(Y)为纵坐标，采用最小二乘法，进行回归运算，得其线性回归方程；精密度考察：取同一混合对照品溶液，进行LC-MS/MS分析，连续重复进样6次，记录目标分析物与内标峰面积，计算其比值(A分析物/AIS)的RSD值；稳定性考察：按前述方法制备供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h进行LC-MS/MS分析，记录各目标分析物与内标峰面积，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种银杏叶的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取银杏叶供试品进行检测，该检测的色谱条件包括：/n色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18 3.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(A)：0.1％甲酸-水(B)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％A；3-6min：95％A；6-7min：95％-25％A；7-8min：25％A。/n

【技术特征摘要】
1.一种银杏叶的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取银杏叶供试品进行检测，该检测的色谱条件包括：
色谱柱：AgilentEclipsePlusC183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(A)：0.1％甲酸-水(B)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％A；3-6min：95％A；6-7min：95％-25％A；7-8min：25％A。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：
柱温25～40℃，流速0.4～0.6mL/min。


3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括对对照品溶液进行检测，该检测的色谱条件包括：
色谱柱：AgilentEclipsePlusC183.0×50mm，1.8μm；流动相：0.1％甲酸-甲醇(A)：0.1％甲酸-水(B)，所述检测的洗脱梯度为0-3min：25％-95％A；3-6min：95％A；6-7min：95％-25％A；7-8min：25％A；
所述对照品选自银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯J、白果内酯、银杏酸C13:0、银杏酸C15:0、银杏酸C15:1、银杏酸C17:1、银杏酸C17:2中的一种或多种。


4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法中选用的内标为甲苯磺丁脲。


5.根据权利要求1-4任一所述的检测方法，其特征在于，所述银杏叶供试品制备方法包括：
银杏叶与75％-100％甲醇提取溶剂，按1：125～1：25的料液比，超声提取20～40min，离心后取上...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖伟，李雨蔓，耿婷，高霞，陈夏霖，王振中，曹亮，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32