冷冻损伤抑制方法和冷冻损伤预防用组合物技术

本发明专利技术提供即使在低温下长时间保存脏器等生物材料的情况下也能够抑制冷冻损伤的方法或冷冻损伤预防用组合物。本发明专利技术涉及一种生物材料的冷冻损伤抑制方法，其中，包括抑制生物材料的由鞘氨醇‑1‑磷酸(S1P)介导的信号转导系统；以及，本发明专利技术涉及一种冷冻损伤预防用组合物，其含有抑制由S1P介导的信号转导系统的物质作为有效成分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】冷冻损伤抑制方法和冷冻损伤预防用组合物
本专利技术涉及抑制生物材料冷冻损伤的方法、冷冻损伤预防用组合物、生物材料的低温保存方法和保存液。
技术介绍
目前，由于心脏、肺、肝脏、胰腺、肾脏和小肠等非代偿性的脏器衰竭、恶性肿瘤，除脏器移植以外，预后改善无望的患者数量众多。在移植医疗最为盛行的北美，每年有5万人的移植等待登记者的脏器，其中实际能够享受移植医疗的低于10％。此外，毎年因非代偿性的脏器损伤而死亡的患者为70万人以上，未进行等待登记而死亡的患者中也推测存在潜在的移植适合者。供体不足的最大原因无疑是脑死亡供体的绝对性不足，但供体的选择中除组织适合度以外，还要考虑对脏器的获取时间等，因此尽管存在优先顺位高的适合受体，但是在大于保存时间的上限那样的情况下，因脏器状态的恶化等而导致脏器被废弃，保存时间的延长无疑是针对供体不足的有效且不浪费的方法。特别是，心脏、肺等保存时间有时短至数小时，摘除的脏器的废弃率超过70％。各国进行了脏器保存的研究，标准方法20年以上未发生变化，是使用脏器保护液的低温保存(专利文献1和2)，各脏器的低温保存可耐受的时间为保存时间的上限。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2010-239963号公报专利文献2：日本特表2010-529053号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的技术问题如果能够保存为了脏器移植而摘除的脏器的时间变长，则可将更多患者作为移植对象。因此，要求开发即使长时间保存也不损伤脏器的保存方法。>作为长时间保存脏器这样的生物材料的方法之一，进行低温下的保存，如果低温保存时间超过一定时间，则发生超过保护效果的组织损伤。该组织损伤被称为冷冻损伤或冷藏/复温损伤(以下，也将其简称为“冷冻损伤”)，由于该冷冻损伤，移植中可使用脏器的低温保存时间的上限由脏器确定。本专利技术，在一个方式中，提供在低温下长时间保存脏器等生物材料的情况下也能够抑制冷冻损伤的方法、冷冻损伤预防用组合物、生物材料的低温保存方法和保存液方法以及生物材料的冷冻损伤预防用组合物。用于解决问题的技术方案本专利技术，在一个或多个实施方式中，涉及生物材料的冷冻损伤抑制方法或低温保存方法，其包括抑制生物材料的由鞘氨醇-1-磷酸(S1P)介导的信号转导系统。本专利技术，在一个或多个实施方式中，涉及冷冻损伤预防用组合物或生物材料保存液，其含有抑制由S1P介导的信号转导系统的物质(S1P信号转导系统抑制物质)作为有效成分。附图说明图1是表示实施例1中，在化合物1或2的存在下，评价低温下培养源自人肝癌的细胞株HepG2时的冷冻损伤抑制效果的结果的示例的图表。图2是表示实施例2中，在化合物1的存在下，评价低温下培养源自人肝癌的细胞株HepG2、人脐带静脉血管内皮细胞株HUEhT-2或Flp-InTMCHO细胞时的冷冻损伤抑制效果的结果的示例的图表。图3表示实施例3中，改变低温保存的细胞与化合物1接触的时机而评价冷冻损伤抑制效果的结果的示例。图4是表示实施例4中，低温保存(4℃、24小时)后，移植的大鼠的心脏的存活心肌面积和纤维化面积的示例的图表。图5是表示实施例5中，在化合物1或3～7的存在下，评价低温下培养源自人肝癌的细胞株HepG2时的冷冻损伤抑制效果的结果的示例的图表。具体实施方式本专利技术在一个方式中，基于以下新的见解，即，S1P受体(S1PR)抑制剂、鞘氨醇激酶(SPHK)抑制剂等S1P信号转导系统抑制物质能够抑制细胞、脏器等低温保存时可能发生的冷冻损伤。此外，本专利技术在一个方式中，基于以下新的见解，即，与S1PR抑制剂或SPHK抑制剂接触后或在接触的同时低温保存脏器等生物材料，由此能够抑制低温保存时可能发生的冷冻损伤的同时长时间保存该生物材料。作为本专利技术中的“生物材料的由S1P介导的信号转导系统的抑制”，在一个或多个实施方式中，可举出S1PR的功能抑制、S1P与S1PR的相互作用的抑制、S1P的生成抑制、S1PR的生成抑制或S1P的功能抑制等。生物材料的由S1P介导的信号转导系统的抑制，在一个或多个实施方式中，可通过使生物材料与抑制由S1P介导的信号转导系统的物质接触而进行。作为由S1P介导的信号转导系统的抑制物质，在一个或多个实施方式中，可举出S1PR拮抗剂等S1PR抑制物质、S1P生成抑制物质、SPHK抑制物质、S1P与S1PR的相互作用抑制物质或S1P功能的抑制物质等。本专利技术中“冷冻损伤”是指因在细胞、脏器等生物材料暴露于低温下而导致细胞受到的损伤。冷冻损伤在一个或多个实施方式中，冷冻损伤引起细胞的存活能力降低、细胞死亡等。本专利技术中“低温”是指例如不低于0℃的低温，在一个或多个实施方式中，可举出0～4℃。本专利技术中，作为“冷冻损伤的预防”，在一个或多个实施方式中，包括抑制冷冻损伤、防止冷冻损伤以及减少冷冻损伤等。本专利技术中，作为“抑制冷冻损伤”，在一个或多个实施方式中，可举出细胞的存活能力降低的抑制、细胞死亡的抑制等。本专利技术，在一个或多个实施方式中，可优选应用于低温保存时发生冷冻损伤的生物材料、不适合低温保存的生物材料、或者即使能够低温保存也难以长时间低温保存的生物材料。作为本专利技术中的“长时间”，因保存的生物材料的种类等而不同，在一个或多个实施方式中，是指与以往的低温保存方法中的能够保存的时间相比更长的时间，特别是在非限定的一个或多个实施中，是指以往的低温保存方法中的能够保存的时间的1.5倍以上、2倍以上或3倍以上的时间。作为生物材料，在一个或多个实施方式中，可以举出人或除人以外的哺乳类等动物或源自该动物的生物材料。作为生物材料，在一个或多个实施方式中，可举出脏器、组织、器官、个体、细胞、体液、输血制剂和细胞片(cellsheet)等。作为器官和脏器，在一个或多个实施方式中，可举出心脏、血液、皮肤、隔膜、角膜、肝脏、血管、肾脏、脑、眼球、脾脏、卵巢、肺、肠、神经、胎盘、脐带或视网膜等。作为个体，可举出人或除人以外的哺乳类等动物。作为体液，在一个或多个实施方式中，可举出血液和精液等。[冷冻损伤预防用组合物]本专利技术，在一个或多个实施方式中，涉及冷冻损伤预防用组合物(本专利技术的冷冻损伤预防用组合物)，其含有抑制由S1P介导的信号转导系统的物质作为有效成分。本专利技术的冷冻损伤预防用组合物，在一个或多个实施方式中，可抑制生物材料的低温保存时可能发生的冷冻损伤。本专利技术的冷冻损伤预防用组合物，在一个或多个实施方式中，可用于移植中使用的脏器等生物材料的保存液或灌流液。本专利技术中的冷冻损伤预防，在一个或多个实施方式中，可包括抑制冷冻损伤和防止冷冻损伤。根据本专利技术，可抑制因低温保存时的冷冻损伤导致的生物材料的状态的恶化，因此能够以更长时间低温保存，能够更长时间保持生物材料的新鲜度。[有效成分]本专利技术的冷冻损伤预防用组合物含有S1P信号转导系统抑制物质作为有效成分。作为S1P信号转导系统抑制物质，如上所述，在非限定的一个或多个实施方式中，可举出本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物材料的冷冻损伤抑制方法，其特征在于，包括：/n抑制生物材料的由鞘氨醇-1-磷酸(S1P)介导的信号转导系统。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180525 JP 2018-1007591.一种生物材料的冷冻损伤抑制方法，其特征在于，包括：
抑制生物材料的由鞘氨醇-1-磷酸(S1P)介导的信号转导系统。


2.根据权利要求1所述的冷冻损伤抑制方法，其中，
所述信号转导系统的抑制包括使所述生物材料与抑制S1P的信号转导系统的物质接触。


3.根据权利要求2所述的冷冻损伤抑制方法，其中，
所述抑制S1P的信号转导系统的物质选自S1P受体(S1PR)抑制化合物和鞘氨醇激酶(SPHK)抑制化合物。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的冷冻损伤抑制方法，其中，
所述冷冻损伤抑制方法包括低温保存所述生物材料；
所述信号转导系统的抑制包括在低温保存前进行，或者，在低温保存开始的同时进行。


5.一种生物材料的冷冻损伤抑制方法，其特征在于，包括使下述式(I)表示的化合物、下述式(I')表示的化合物或它们的制药上可接受的盐与生物材料接触，



式(I)和式(I')中，
X1为N或CR5，
R1和R2各自独立为氢原子、卤素原子、C1-8烷基、卤素原子取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基、C2-8炔基、C1-8烷基磺酰基或氰基，或者，R1和R2与由a和b标记的原子一起形成取代或未取代的芳香环、或者取代或未取代的芳杂环，
R3、R4和R5各自独立为氢原子、卤素原子、C1-8烷基、卤素原子取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基、C2-8炔基、C1-8烷基磺酰基或氰基，
Z为



R6为-C(＝O)R10或-CH2R11，R10和R11为取代或未取代的C2-8烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的C2-8烷氧基、取代或未取代的芳杂环基、或者-NR12R13，R12和R13各自独立为氢原子或者取代或未取代的C1-8烷基，或者，R12和R13与相邻的氮原子一起形成取代或未取代的含氮杂环基，
R7为取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基、喹啉基或异喹啉基，
R8为O或NR14，R14为氢原子、取代或未取代的C2-8烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的C2-8烷氧基、或者取代或未取代的芳杂环基，
R9为取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基、喹啉基或异喹啉基。


6.根据权利要求5所述的冷冻损伤抑制方法，其中，
所述式(I)或式(I')表示的化合物为



R1、R2、R3和R4各自独立为氢原子、卤素原子、甲基、乙基、异丙基、丙基、三氟甲基、氰基、甲氧基、乙酰基、甲磺酰基或乙炔基，
R7为由选自卤素原子、三氟甲基、氰基、甲氧基和乙炔基中的1个或2个以上的取代基取代的苯基、苯基、由1个或2个以上的卤素原子取代的吡啶基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基，
R9为由选自卤素原子、三氟甲基、氰基、甲氧基和乙炔基中的1个或2个以上的取代基取代的苯基、苯基、由1个或2个以上的卤素原子取代的吡啶基、吡啶基、喹啉基或异喹啉基，
R10为正丁基、叔丁基、1-乙基丙基、2,2-二甲基丙基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的呋喃基、乙氧基、或者-NR12R13，R12和R13各自独立为氢原子或叔丁基，或者，R12和R13与相邻的氮原子一起形成哌啶环，
R15和R16各自独立为氢原子、卤素原子、甲基、三氟甲基、氰基、甲氧基、乙酰基、甲磺酰基或乙炔基。


7.根据权利要求1～4中任一项所述的冷冻损伤抑制方法，其中，
所述S1PR抑制化合物为权利要求5或6规定的式(I)或(I')表示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：萩原正敏，金光瑛彰，田中信生，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP