β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法和制备方法技术

本发明专利技术涉及核苷酸类物质提纯技术领域，尤其是涉及一种β‑烟酰胺单核苷酸的纯化方法和制备方法。β‑烟酰胺单核苷酸的纯化方法，包括如下步骤：采用硅胶柱对β‑烟酰胺单核苷酸粗产物进行层析分离，湿法上样后进行梯度洗脱；所述梯度洗脱包括：采用醇类溶剂作为流动相淋洗1～5个柱体积脱除前杂，再用体积分数为75％～90％的醇类溶剂的水溶液淋洗0.5～1个柱体积，再用体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗至洗脱液中无β‑烟酰胺单核苷酸；收集体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗的洗脱液，脱色处理后，脱溶处理。本发明专利技术的纯化方法得到的β‑烟酰胺单核苷酸纯度高、收率高。

【技术实现步骤摘要】
β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法和制备方法
本专利技术涉及核苷酸类物质提纯
，尤其是涉及一种β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法和制备方法。
技术介绍
β-烟酰胺单核苷酸，又称作β-NMN，是自然存在的生物活性核苷。由于烟酰胺属于维生素B3，因而NMN属于维生素B族衍生物范畴，广泛参与人体多项生化反应，与免疫、代谢息息相关。NMN是NAD+的前体，其功能也主要通过NAD+体现。随着年龄的增长，NMN和NAD+水平均呈下降趋势，而NAD+代谢产物NAM呈上升趋势。衰老过程中NAD+的下降被认为是导致疾病和残疾的主要原因，如听力和视力丧失，认知和运动功能障碍，免疫缺陷，自身免疫炎症反应失调导致的关节炎、代谢障碍和心血管疾病。因此，补充NMN能够提高体内NAD+含量，从而延缓、改善、防止衰老等，或改善年龄诱导的代谢紊乱、老年疾病等，具有重要意义。NMN可以经内源物质合成，也可以由日常饮食中摄入。NMN在日常食物中分布较广，蔬菜、水果和肉类中均含有丰富的NMN。为了进一步提高NMN在医药治疗等领域的应用前景，现有技术中通过人工合成的方式得到NMN。但由于NMN与多种物质极性相近，分离纯化难度较大，合成得到的NMN纯度和收率较低，不适合工业化生产。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，以解决现有技术中存在的制得的β-烟酰胺单核苷酸纯度低、收率低等技术问题。本专利技术的第二目的在于提供β-烟酰胺单核苷酸的制备方法，通过特定制备方法配合纯化方法，有效去除杂质，提高纯度和收率。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，包括如下步骤：采用硅胶柱对β-烟酰胺单核苷酸粗产物进行层析分离，湿法上样后进行梯度洗脱；所述梯度洗脱包括：采用醇类溶剂作为流动相淋洗1～5个柱体积脱除前杂，再用体积分数为75％～90％的醇类溶剂的水溶液淋洗0.5～1个柱体积，再用体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗至洗脱液中无β-烟酰胺单核苷酸；收集体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗的洗脱液，脱色处理后，除溶处理。在本专利技术的具体实施方式中，所述醇类溶剂包括甲醇、乙醇和异丙醇中的任一种或多种。在本专利技术的具体实施方式中，所述湿法上样后，吸附10～60min，再进行梯度洗脱。优选的，所述湿法上样后，吸附30～40min，再进行梯度洗脱。在本专利技术的具体实施方式中，所述硅胶柱的径高比为1﹕(5～10)，优选为1﹕(7～8)。在本专利技术的具体实施方式中，所述梯度洗脱的流速为1～4bv/h，优选为2～3bv/h。在本专利技术的具体实施方式中，所述洗脱液的收集方法包括：每0.1～0.2倍柱体积的洗脱液收集于一个容器中，采用HPLC检测每个容器中的洗脱液，根据检测结果进行合并。在实际操作中，为了进一步提高收集的洗脱液中产物的纯度，可分批次收集洗脱液，然后根据HPLC检测结果，进行洗脱液的合并处理。在本专利技术的具体实施方式中，所述脱色处理的方法包括：采用活性炭进行所述脱色。在实际操作中，可在洗脱液中加入活性炭搅拌脱色后过滤，或可将洗脱液过活性炭柱子进行脱色。在本专利技术的具体实施方式中，所述除溶处理包括：将脱色处理后的物料旋蒸处理除去醇类溶剂，然后进行冷冻干燥处理。通过旋蒸处理的方式除去低沸点的醇类溶剂，剩余的水相溶剂通过冷冻干燥的方式除去，以得到产物。在本专利技术的具体实施方式中，所述β-烟酰胺单核苷酸粗产物的制备方法包括：(a)烟酰胺核糖的氯化物与三氯氧磷在溶剂中，于-10～20℃反应5～10h，停止反应；(b)向步骤(a)反应后的物料中加水破坏，然后缓慢加入碱液中和，过滤并采用醇的水溶液洗滤饼，收集滤液，将所述滤液进行除盐处理，固液分离收集液体。在本专利技术的具体实施方式中，所述溶剂包括磷酸三甲酯。在本专利技术的具体实施方式中，所述烟酰胺核糖的氯化物与所述三氯氧磷的质量比为(1.2～1.8)﹕1，优选为(1.4～1.5)﹕1。本专利技术还提供了β-烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括前述任意一所述β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，通过采用特定的层析分离条件，能够有效分离β-烟酰胺单核苷酸和各个杂质，提高纯化处理后的β-烟酰胺单核苷酸产物的纯度和收率，适宜于大规模生产。具体实施方式下面将结合具体实施方式对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，包括如下步骤：采用硅胶柱对β-烟酰胺单核苷酸粗产物进行层析分离，湿法上样后进行梯度洗脱；所述梯度洗脱包括：采用醇类溶剂作为流动相淋洗1～5个柱体积脱除前杂，再用体积分数为75％～90％的醇类溶剂的水溶液淋洗0.5～1个柱体积，再用体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗至洗脱液中无β-烟酰胺单核苷酸；收集体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗的洗脱液，脱色处理后，除溶处理。在本专利技术的具体实施方式中，所述梯度洗脱包括：采用醇类溶剂作为流动相淋洗1～5个柱体积脱除前杂，再用体积分数为75％～85％的醇类溶剂的水溶液淋洗0.5～1个柱体积，再用体积分数为35％～45％的醇类溶剂的水溶液淋洗至洗脱液中无β-烟酰胺单核苷酸。然后，收集体积分数为35％～45％的醇类溶剂的水溶液淋洗的洗脱液，脱色处理后，除溶处理。在本专利技术的具体实施方式中，所述梯度洗脱包括：采用醇类溶剂作为流动相淋洗1～2个柱体积脱除前杂，再用体积分数为75％～85％的醇类溶剂的水溶液淋洗0.5～1个柱体积，再用体积分数为35％～45％的醇类溶剂的水溶液淋洗至洗脱液中无β-烟酰胺单核苷酸。如在不同实施方式中，体积分数为75％～85％的醇类溶剂的水溶液可以为甲醇的水溶液、乙醇的水溶液和异丙醇的水溶液中的一种或多种；醇类溶剂的水溶液的体积分数可以为75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％等等。如在不同实施方式中，体积分数为35％～45％的醇类溶剂的水溶液可以为甲醇的水溶液、乙醇的水溶液和异丙醇的水溶液中的一种或多种；醇类溶剂的水溶液的体积分数可以为35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％等等。如在不同实施方式中，采用醇类溶剂作为流动相淋洗1～5个柱体积脱除前杂，其中，可淋洗1个柱体积、1.1个柱体积本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：/n采用硅胶柱对β-烟酰胺单核苷酸粗产物进行层析分离，湿法上样后进行梯度洗脱；/n所述梯度洗脱包括：采用醇类溶剂作为流动相淋洗1～5个柱体积脱除前杂，再用体积分数为75％～90％的醇类溶剂的水溶液淋洗0.5～1个柱体积，再用体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗至洗脱液中无β-烟酰胺单核苷酸；/n收集体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗的洗脱液，脱色处理后，除溶处理。/n

【技术特征摘要】
1.β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
采用硅胶柱对β-烟酰胺单核苷酸粗产物进行层析分离，湿法上样后进行梯度洗脱；
所述梯度洗脱包括：采用醇类溶剂作为流动相淋洗1～5个柱体积脱除前杂，再用体积分数为75％～90％的醇类溶剂的水溶液淋洗0.5～1个柱体积，再用体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗至洗脱液中无β-烟酰胺单核苷酸；
收集体积分数为35％～70％的醇类溶剂的水溶液淋洗的洗脱液，脱色处理后，除溶处理。


2.根据权利要求1所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述醇类溶剂包括甲醇、乙醇和异丙醇中的任一种或多种。


3.根据权利要求1所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述湿法上样后，吸附10～60min，再进行所述梯度洗脱；
优选的，所述湿法上样后，吸附30～40min，再进行所述梯度洗脱。


4.根据权利要求1所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述硅胶柱的径高比为1﹕(5～10)；
优选的，所述硅胶柱的径高比为1﹕(7～8)。


5.根据权利要求1所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王代军，蒋宇峰，陈松，陶雷，
申请(专利权)人：浩宇康宁健康科技湖北有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42