基因工程化的细胞及应用制造技术

本发明专利技术公开一种基因工程化的细胞，其表达特异性结合靶抗原的外源性受体和外源性CCL21，还可以进一步表达促进细胞增殖的IL‑7R结合蛋白或外源性IL‑7。还公开了一种包括外源性CCL21表达盒的表达构建物与含其的载体、病毒以及包括上述细胞的药物组合物。还公开了细胞、表达构建物、载体和病毒在制备抑制肿瘤或抑制病原体的药物上的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基因工程化的细胞及应用本申请要求申请日为2018年5月15日的中国专利申请CN201810463564.7、2018年9月18日的中国专利申请CN201811088090.9、2018年12月19日的中国专利申请CN201811552806.6、2019年2月28日的中国专利申请CN201910151930.X的优先权。本申请引用上述中国专利申请的全文。
本专利技术属于细胞治疗领域，涉及基因工程化的细胞及应用。更具体地，本专利技术涉及特异性结合靶抗原的外源性受体和外源性CCL21的细胞。
技术介绍
CAR-T细胞能够以MHC非限制性的方式进行肿瘤特异性地杀伤，在肿瘤免疫治疗中显示出较好的的应用前景，但其仍有较多局限性，如对实体瘤的疗效不佳、在体外表现出优良效果的候选药物，在体内往往无法表现出相应的效果。Adachi等尝试采用表达IL7和CCL19的CAR-T细胞(IL-7andCCL19expressioninCAR-TcellsimprovesimmunecellinfiltrationandCAR-Tcellsurvivalinth本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因工程化的细胞，其特征在于，所述细胞表达特异性结合靶抗原的外源性受体和外源性CCL21；优选地，还表达促进所述细胞增殖的蛋白；更优选地，所述促进细胞增殖的蛋白为IL-7R结合蛋白或外源性IL-7。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180515 CN 2018104635647;20180918 CN 201811088090一种基因工程化的细胞，其特征在于，所述细胞表达特异性结合靶抗原的外源性受体和外源性CCL21；优选地，还表达促进所述细胞增殖的蛋白；更优选地，所述促进细胞增殖的蛋白为IL-7R结合蛋白或外源性IL-7。


如权利要求1所述的的细胞，其特征在于，所述IL-7R结合蛋白为外源性IL-7R结合蛋白，所述外源性IL-7R结合蛋白能特异性结合IL-7R且增强IL-7R活性；
优选地，所述外源性IL-7R的氨基酸序列如SEQIDNO:19所示。


如权利要求1或2所述的细胞，其特征在于，所述外源性CCL21为天然CCL21、或与天然CCL21具有相同功能的天然CCL21的截短片段或天然CCL21的突变体；
优选地，所述天然CCL21与SEQIDNO:21所示的氨基酸序列具有至少90％同一性、或是SEQIDNO:21所示的氨基酸序列的截短片段；或者与由SEQIDNO:14或15所示的核苷酸编码的氨基酸序列具有至少90％同一性，或是由SEQIDNO:14或15所示的核苷酸编码的氨基酸序列的截短片段。


如权利要求1-3中任一项所述的细胞，其特征在于，所述外源性CCL21是组成型表达。


如权利要求1-3中任一项所述的细胞，其特征在于，所述外源性CCL21是诱导型表达；较佳地，所述诱导型表达通过免疫细胞诱导型启动子启动；更佳地，所述的免疫细胞诱导型启动子是NFAT启动子。


如权利要求1-5中任一项所述的细胞，其特征在于，所述外源性IL-7为天然IL-7、或与天然IL-7具有相同功能的天然IL-7的截短片段或天然IL-7的突变体；
优选地，所述天然IL-7与SEQIDNO:18所示的氨基酸序列具有至少90％同一性、或是SEQIDNO:18所示的氨基酸序列的截短片段；或者与由SEQIDNO:13所示的核苷酸编码的氨基酸序列具有至少90％同一性、或是由SEQIDNO:13所示的核苷酸编码的氨基酸序列的截短片段。


如权利要求1-5中任一项所述的细胞，其特征在于，所述外源性IL-7R结合蛋白或外源性IL-7是组成型表达。


如权利要求1-5中任一项所述的细胞，其特征在于，所述外源性IL-7R结合蛋白或外源性IL-7是诱导型表达；较佳地，所述诱导型表达通过免疫细胞诱导型启动子启动；更佳地，所述的免疫细胞诱导型启动子是NFAT启动子。


如权利要求1-8中任一项所述的细胞，其特征在于，所述的细胞为免疫效应细胞；
优选地，所述免疫效应细胞为T细胞、NK细胞或者NKT细胞；
更优选地，所述免疫效应细胞为T细胞。


如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述靶抗原包括肿瘤抗原和/或病原体抗原；优选地，为肿瘤抗原。


如权利要求10所述的细胞，其特征在于，所述靶抗原为实体瘤抗原；
优选地，所述实体瘤抗原为GPC3、EGFR或Claudin18.2，更优选地，所述实体瘤抗原为Claudin18.2。


如权利要求1-11中任一项所述的细胞，其特征在于，所述外源性受体为嵌合受体，其包含特异性结合靶抗原的抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域。


如权利要求12所述的细胞，其特征在于，所述外源性受体选自嵌合抗原受体(CAR)、修饰的T细胞(抗原)受体(TCR)、T细胞融合蛋白(TFP)、T细胞抗原耦合器(TAC)或其组合；
优选地，所述外源性受体为嵌合抗原受体。


如权利要求13所述的细胞，其特征在于，所述的嵌合抗原受体包括：
(i)特异性结合靶抗原的抗体或其片段、CD28或CD8的跨膜域、CD28的共刺激信号结构域和CD3ζ；或
(ii)特异性结合靶抗原的抗体或其片段、CD28或CD8的跨膜域、4-1BB的共刺激信号结构域和CD3ζ；或
(iii)特异性结合靶抗原的抗体或其片段、CD28或CD8的跨膜域、CD28的共刺激信号结构域、4-1BB的共刺激信号结构域和CD3ζ。


如权利要求12所述的细胞，其特征在于，所述外源性受体的抗原结合结构域的氨基酸序列与SEQIDNO:2所示的氨基酸序列具有至少90％的同一性。


如权利要求15所述的细胞，其特征在于，所述外源性受体的氨基酸序列与SEQIDNO:26、27或35所示的氨基酸序列具有至少90％的同一性。


如权利要求1-16中任一项所述的细胞，其特征在于，所述外源性受体、和/或外源性IL-7R结合蛋白或外源性IL-7、和/或外源性CCL21利用病毒载体表达；
较佳地，所述的病毒载体包括：慢病毒载体，逆转录病毒载体或腺病毒载体。


一种表达构建物，其特征在于，该表达构建物包括顺序连接的：特异性结合靶抗原的外源性受体的表达盒1，外源性IL-7R结合蛋白或外源性IL-7的表达盒2，及外源性CCL21的表达盒3；优选地，所述表达盒之间任选地由选自F2A、P2A、T2A、和/或E2A的串联片段连接。


如权利要求18所述的表达构建物，其特征在于，所述表达盒2含有如SEQIDNO:17所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宗海，骆红，蒋华，王华茂，
申请(专利权)人：科济生物医药上海有限公司，上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31