经修饰的甾醇酰基转移酶制造技术

本发明专利技术涉及经修饰的甾醇酰基转移酶，所述经修饰的甾醇酰基转移酶具有朝向要在维生素D3的生物技术生产中使用的维生素D3前体7‑脱氢胆固醇(7‑DHC)的酰化的改善的活性和/或特异性。本发明专利技术还涉及一种表达所述经修饰的酶的宿主菌株，以及所述宿主菌株在用于产生维生素D3或其衍生物和/或代谢产物的方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的甾醇酰基转移酶本专利技术涉及经修饰的甾醇酰基转移酶，所述经修饰的甾醇酰基转移酶具有朝向要在维生素D3的生物技术生产中使用的维生素D3前体7-脱氢胆固醇(7-DHC)的酰化的改善的活性和/或特异性。本专利技术还涉及一种表达所述经修饰的酶的宿主菌株，以及所述宿主菌株在用于产生维生素D3或其衍生物和/或代谢产物的方法中的用途。维生素D3(也称为胆钙化醇或胆骨化醇)可以在哺乳动物皮肤中由前维生素D3(也称为7-脱氢胆固醇或7-DHC)合成，前维生素D3是在暴露于紫外光时胆固醇生物合成的产物，由此7-DHC被光化学转化为前维生素D3，前维生素D3在体温下异构化为生物活性形式维生素D3。在肝脏中，维生素D3转化为无生物活性的25-羟基维生素D3(也称为骨化二醇(calcidiol/calcifediol)、25-羟基胆钙化醇、25-OH-D3或HyD)，这是维生素D3的主要循环形式。进一步的羟基化发生在肾脏中。对于维生素D3的工业生产，(原则上)化学和生物技术合成两者都是可行的。化学合成开始于从例如羊毛脂中分离出胆固醇，然后将所述胆固醇脱氢成7-DHC，7-DHC是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有甾醇酰基转移酶活性的经修饰的酶，所述经修饰的酶包含在与根据SEQ IDNO:1的多肽中的选自由11、281、366、442、551、554、572、624、626、627、636位以及它们的组合组成的组的残基对应的一个或多个位置处的一个或多个氨基酸取代，优选地与E11G和/或L281I和/或D366V和/或I442V和/或H551Y和/或H554Q和/或F572L和/或F624L和/或L626F和/或G627D和/或C636S和/或它们的组合对应的一个或多个氨基酸取代。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180522 CH 00628/181.一种具有甾醇酰基转移酶活性的经修饰的酶，所述经修饰的酶包含在与根据SEQIDNO:1的多肽中的选自由11、281、366、442、551、554、572、624、626、627、636位以及它们的组合组成的组的残基对应的一个或多个位置处的一个或多个氨基酸取代，优选地与E11G和/或L281I和/或D366V和/或I442V和/或H551Y和/或H554Q和/或F572L和/或F624L和/或L626F和/或G627D和/或C636S和/或它们的组合对应的一个或多个氨基酸取代。


2.根据权利要求1所述的经修饰的酶，所述经修饰的酶催化包括7-脱氢胆固醇(7-DHC)和酵母甾醇在内的甾醇的酯化，其中与使用相应的未修饰酶的催化中的7-DHC与酵母甾醇的比率相比，所述甾醇酯中7-DHC与酵母甾醇的比率增加了至少约1.4倍。


3.根据权利要求1或2所述的经修饰的酶，其中所述一个或多个氨基酸取代选自F624L、G627D、E11G、H554Q、I442V，以及它们的组合。


4.一种宿主细胞，优选地酵母，更优选地产生甾醇的酵母，甚至更优选地产生胆固醇的酵母，所述宿主细胞包含根据权利要求1至3中任一项所述的经修饰的酶。


5.根据权利要求4所述的宿主细胞，所述宿主细胞还包含在与根据SEQIDNO:3的多肽中的选自592和/或595位的残基对应的一个或多个位置处的一个或多个氨基酸取代，优选地与F592L和/或G595D对应的取代。


6.根据权利要求4或5所述的宿主细胞，所述宿主细胞用于产生包含7-DHC和酵母甾醇的甾醇混合物，其中与表达未修饰的酶的宿主细胞相比，7-DHC与酵母甾醇的比率增加了...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥托·马丁·莱曼，哈拉德·皮希勒，霍莉·施托尔特福特，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL