一种将尿液细胞重编程为诱导性多能干细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种将尿液细胞重编程为诱导性多能干细胞的方法，所述方法包括：将表达四个转录因子和miRNA的载体导入尿液细胞中，包裹到多肽水凝胶中之后再置于细胞培养基中培养；所述转录因子包括OCT4、SOX2、SV40LT和KLF4；所述miRNA包括miRNA302和miRNA367。本发明专利技术利用三维多肽水凝胶替代传统的Matrigel，将表达转录因子和miRNA的尿液细胞重编程为诱导性多能干细胞，避免了使用动物源性的Matrigel，尿液细胞均一培养分布于多肽水凝胶中，不贴壁培养，有利于实现自动化吸取细胞克隆，质量可控、成分安全，扩大了诱导性多能干细胞的临床应用范围。

【技术实现步骤摘要】
一种将尿液细胞重编程为诱导性多能干细胞的方法
本专利技术属于体细胞重编程
，涉及一种将尿液细胞重编程为诱导性多能干细胞的方法。
技术介绍
人的多种体细胞包括尿液细胞可以通过导入转录因子OCT4、SOX2、SV40LT、KLF4和micro-RNA的方式被重编程为诱导性多能干细胞(iPSCs)(Xue,Y.；Cai,X.；Wang,L.；Liao,B.；Zhang,H.；Shan,Y.；Chen,Q.；Zhou,T.；Li,X.；Hou,J.；Chen,S.；Luo,R.；Qin,D.；Pei,D.；Pan,G.,Generatinganon-integratinghumaninducedpluripotentstemcellbankfromurine-derivedcells.PLoSOne2013,8(8),e70573.)。但是，目前的重编程技术是将尿液细胞置于二维Matrigel包被的培养板中进行重编程的。Matrigel是从EHSEngelbreth-Holm-Swarm小鼠肉瘤中得到的可溶性基底膜抽提物，含有不可靠的动物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将尿液细胞重编程为诱导性多能干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：将表达转录因子和miRNA的尿液细胞包裹于多肽水凝胶中，置于细胞培养基中培养；/n所述转录因子包括OCT4、SOX2、SV40LT和KLF4；/n所述miRNA包括miR302和miR367。/n

【技术特征摘要】
1.一种将尿液细胞重编程为诱导性多能干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：将表达转录因子和miRNA的尿液细胞包裹于多肽水凝胶中，置于细胞培养基中培养；
所述转录因子包括OCT4、SOX2、SV40LT和KLF4；
所述miRNA包括miR302和miR367。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述尿液细胞通过电转质粒的方式表达OCT4、SOX2、SV40LT、KLF4、miR302和miR367。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述多肽水凝胶包括精氨酸、丙氨酸或天冬氨酸中的任意一种或至少两种的组合，优选为精氨酸、丙氨酸和天冬氨酸的组合；
优选地，所述多肽水凝胶包括SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述尿液细胞在所述多肽水凝胶的浓度为1×105～1×106/mL。


5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述培养基包括人多能干细胞培养基，优选为mTesr培养基；
优选地，所述mTesr培养基含有抑制剂；
优选地，所述抑制剂包括A8301、PD032590、CHIR99021或thiazovivin中的任意一种或至少两种的组合，优选为A8301、PD032590、CHIR99021和thiazovivin的组合；
优选地，所述培养基包括含有0.1～1μMA8301、0.1～1μMPD032590、1～5μMCHIR99021和0.1～1μMthiazovivin的mTesr培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：张骁，孙薇，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44