制备过表达外源基因的免疫效应细胞的方法技术

本发明专利技术涉及制备过表达外源基因的免疫效应细胞的方法以及培养电转细胞的方法。本发明专利技术的方法包括使用含有PI3K抑制剂的培养基培养电转得到的细胞的步骤。采用本发明专利技术的方法能提升细胞电转后的阳性率和存活率。

【技术实现步骤摘要】
制备过表达外源基因的免疫效应细胞的方法
本专利技术涉及分子生物学
，具体地涉及一种制备过表达外源基因细胞的方法。
技术介绍
使用表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫效应细胞，如CAR-T细胞的过继性细胞治疗(AdoptiveCellTherapy，ACT)用于治疗肿瘤具有永久性改变肿瘤治疗现状的潜力。这类治疗依赖于高效、稳定和安全的基因转移平台。将编码嵌合抗原受体的合成的基因转入免疫效应细胞，如T细胞内，是实现肿瘤治疗的第一步。基因转移技术主要包括病毒方法与非病毒方法。病毒方法主要包括使用逆转录病毒载体或慢病毒载体来表达CAR基因，通过包装的病毒颗粒将CAR基因导入免疫效应细胞内，并通过逆转录病毒或慢病毒自身的整合系统整合至细胞基因组上。病毒载体系统的优点在于病毒颗粒能够有效地转导免疫效应细胞，如T细胞，并且高效稳定地整合到宿主细胞基因组中。但病毒的制备生产过程成本较高，费时费力，并且为了符合临床安全标准，利用病毒系统改造的免疫效应细胞中需要表现出病毒自身无复制、低基因毒性以及低免疫源性，在回输至人体内后还需要长期监控，存在着一定的安全隐患。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养电转细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用含有PI3K抑制剂的培养基培养电转得到的细胞的步骤；优选地，培养基中所述PI3K抑制剂的终浓度为0.01-5μM；更优选地，为0.0625-4μM；进一步更优选地，为0.25-1μM。/n

【技术特征摘要】
1.一种培养电转细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用含有PI3K抑制剂的培养基培养电转得到的细胞的步骤；优选地，培养基中所述PI3K抑制剂的终浓度为0.01-5μM；更优选地，为0.0625-4μM；进一步更优选地，为0.25-1μM。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括，电转结束后，将电转的细胞转入培养基中培养0.5-5小时，优选地培养3小时，然后在所述培养基中加入所述PI3K抑制剂进行培养。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞为免疫效应细胞；优选地，所述免疫效应细胞选自T细胞、TIL、NK细胞、NKT细胞、CAR-T细胞、CIK细胞、TCR-T细胞和巨噬细胞中的一种或多种；更优选选自T细胞、TIL和CAR-T细胞中的一种或多种。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基为细胞培养基，优选为用于培养免疫效应细胞的培养基；更优选地选自CTSTM无血清细胞培养基、DMEM培养基和RPMI1640培养基中的一种或多种；进一步更优选为CTSTM无血清细胞培养基。


5.一种电转法制备表达外源基因的细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：
1)通过电转向细胞中导入含有表达外源基因的核酸；
2)用含有PI3K抑制剂的培养基培养步骤1)中电转了外源基因的细胞；
优选地，培养电转的细胞0.5-5h后、更优选地培养电转的细胞3h后在所述培养基中加入所述PI3K抑制剂；优选地，加入所述PI3K抑制剂后，其在培养基中的终浓度在0.01-5μM的范围内；更优选地，在0.0625-4μM的范围内；进一步更优选地，在0.25-1μM的范围内。


6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述细胞为免疫效应细胞，优选选自T细胞、TIL细胞、NK细胞、NKT细胞、CAR-T细胞、CIK细胞、TCR-T细胞和巨噬细胞中的一种或多种；更优选选自T细胞、TIL和CAR-T细胞中的一种或多种。


7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养基为用于培养免疫效应细胞的培养基；优选选自CTSTM无血清细胞培养基、DMEM培养基和RPMI1640培养基；更优选为CTSTM无血...

【专利技术属性】
技术研发人员：许馥慧，沈永超，孙娟娟，金华君，钱其军，
申请(专利权)人：上海细胞治疗集团有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31