【技术实现步骤摘要】
一种结直肠癌类器官免疫微环境重构的方法
本专利技术涉及医学模型
，尤其涉及一种结直肠癌类器官免疫微环境重构的方法。
技术介绍
目前，提高个体化免疫治疗敏感性及疗效是肿瘤免疫领域亟待解决的问题，如何在体外模拟体内肿瘤环境，增强免疫细胞杀伤肿瘤细胞能力成为解决问题的关键。ToshiroSato等人由结直肠癌患者样本体外构建人的肿瘤类器官(patient-derivedtumororganoids，PDOs)，该技术可在体外模拟体内3D生长环境，与传统二维培养系统相比，能够更加真实反映肠道功能及体内的信号传导及形态，并且与原发肿瘤灶基因突变类型高度一致1。科学家们借助类器官这一研究工具，用于研究结直肠癌(colorectalcancer，CRC)发生发展机制及抗肿瘤药物的体外筛选2。Krijn等学者将自体外周血T淋巴细胞与肠癌及肺癌类器官共培养，结果表明与自体肿瘤类器官共培养后，CD8+T细胞产生IFN-γ水平升高，且T细胞杀伤肿瘤的能力显著增强3。Nicholas等人研究结果表明与乳腺导管类器官共培养后，Vδ2+T...
【技术保护点】
1.一种结直肠癌类器官免疫微环境重构的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一，用新鲜结直肠癌组织构建结直肠癌类器官；/n步骤二，提供与所述结直肠癌组织同一来源的外周血，然后进行红细胞裂解并采用淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞；/n步骤三，运用CD3
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种结直肠癌类器官免疫微环境重构的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，用新鲜结直肠癌组织构建结直肠癌类器官；
步骤二，提供与所述结直肠癌组织同一来源的外周血，然后进行红细胞裂解并采用淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞；
步骤三，运用CD3+T细胞磁珠分选试剂盒将淋巴细胞中的CD3+T细胞富集，并加入T细胞培养液培养4-9天；
步骤四，将步骤一构建的所述类器官消化为单细胞，然后与培养之后的所述CD3+T细胞按照1:10-30的比例进行共培养2-3周，便构建了所述结直肠癌类器官免疫微环境。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一的具体步骤如下：
S1，将所述新鲜结直肠癌组织切成碎块，离心，弃上清；用组织消化液重悬沉淀，剧烈震荡后冰孵30-40min；
S2，冰上孵育后，将上清液过滤获得过滤液；取所述过滤液离心，弃上清，以基础培养基重悬细胞沉淀、计数；
S3，取所需细胞悬液，离心，弃上清后，冰上加入4℃液态温敏型Matrigel基质胶，然后以预冷后枪头吹吸Matrigel基质胶；
技术研发人员：秦环龙，蔚青，李曼，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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