基于RNA定点编辑的抑制脉络膜新生血管形成的方法及试剂技术

本发明专利技术提供了一种基于RNA定点编辑的抑制脉络膜新生血管形成的方法及试剂。本发明专利技术中，构建了用于递送CasRx以及针对血管内皮生长因子A(Vegfa)的gRNA的腺相关病毒，实现利用CasRx以及gRNA靶向性抑制高效精确地敲低Vegfa mRNA并抑制致病性脉络膜新生血管(CNV)的形成和发展。本发明专利技术获得的病毒可以持续有效地实现Vegfa mRNA的下调，作用时间长，稳定性好。

【技术实现步骤摘要】
基于RNA定点编辑的抑制脉络膜新生血管形成的方法及试剂
本专利技术属于基因改造
，更具体地，本专利技术涉及基于RNA定点编辑技术的抑制脉络膜新生血管形成的方法及试剂。
技术介绍
年龄相关性黄斑变性(Age-relatedmaculardegeneration，AMD)，以脉络膜新生血管形成(choroidalneovascularization，CNV)的发展为特征，是50岁以上成人视力恶化的主要原因。其临床表现上，视力可以为正常或严重下降，主诉常为阅读困难，需要增加光照强度来帮助阅读；眼底表现为玻璃疣、局灶性色素增生、斑片状脱色素灶、地图状萎缩等。血管生成生长因子血管内皮生长因子A(vascularendothelialgrowthfactorA，VEGFA)在其中起关键作用。使用人源化抗体的抗VEGFA治疗已被在临床上用于治疗AMD，通过定期注射抗体来维持治疗效果。但是，临床上也发现了此类抗体的缺陷，就是抗体易于在体内发生降解，导致有效作用的时间短，需要相对较为频繁地进行给药，例如视病情需要1至几个月给药一次。频繁给药一方面增本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向性抑制细胞内血管内皮生长因子A的方法，其特征在于，包括：以腺相关病毒递送CasRx以及针对血管内皮生长因子A的gRNA至细胞内，从而靶向性抑制细胞内血管内皮生长因子A。/n

【技术特征摘要】
1.一种靶向性抑制细胞内血管内皮生长因子A的方法，其特征在于，包括：以腺相关病毒递送CasRx以及针对血管内皮生长因子A的gRNA至细胞内，从而靶向性抑制细胞内血管内皮生长因子A。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，CasRx的表达盒中，CasRx编码基因的两端，还包括核定位信号序列；或
CasRx的表达盒中，以EFS、CMV、CAG、CBH或EF1a作为启动子，驱动CasRx的表达；较佳地，以EFS作为启动子。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，包括如下操作性连接的序列元件：启动子序列，核定位信号1序列，CasRx编码核酸序列，核定位信号2序列；较佳地，在启动子序列的5’端，还包括5’末端反向重复序列；较佳地，在核定位信号2序列的3’端，还包括PolyA序列。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，针对血管内皮生长因子A的gRNA的表达盒中，以U6作为启动子，驱动gRNA的表达。


5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述针对血管内皮生长因子A的gRNA的表达盒中，包括如下操作性连接的序列元件：U6启动子，针对血管内皮生长因子A的gRNA；较佳地，在所述gRNA的3’端，还包括3’末端反向重复序列。


6.如权利要求1～5任一所述的方法，其特征在于，所述的CasRx具有如SEQIDNO:1中第1699～4596位核苷酸序列或其简并序列所编码的多肽序列。


7.如权利要求1～5任一所述的方法，其特征在于，所述的针对血管内皮生长因子A的gRNA靶向于以下血管内皮生长因子A中SEQIDNO:9或SEQIDNO:10所示序列的区段。


8.如权利要求1～5任一所述的方法，其特征在于，CasRx的编码序列以及针对血管内皮生长因子A的gRNA被组装在一个腺相关病毒载体中；较佳地，腺相关病毒的载体包含SEQIDNO:4所示的核苷酸序列。


9.表达CasRx以及针对血管内皮生长因子A的gRNA的重组载体，其特征在于，所述重组载体为腺相关病毒载体，包括CasRx的表达盒和血管内皮生长因子A...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨辉，周昌阳，
申请(专利权)人：中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：上海;31